豬場(chǎng)凈化疫病的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及疾病凈化領(lǐng)域，特別是指一種豬場(chǎng)凈化疫病的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 豬瘟俗稱(chēng)"爛腸瘟"，是由黃病毒科豬瘟病毒屬的豬瘟病毒引起的一種急性、發(fā)熱、 接觸性傳染病，具有高度傳染性和致死性。豬偽狂犬病是豬群多種傳染病的原發(fā)性疾病之 一。規(guī)模化豬場(chǎng)的豬只感染豬偽狂犬病或豬瘟直接或間接造成產(chǎn)房仔豬腹瀉、保育豬高殘 次率，中大豬呼吸道疾病等問(wèn)題，導(dǎo)致高死亡率和高發(fā)病率，給養(yǎng)豬場(chǎng)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損 失。
[0003] 目前規(guī)?；i場(chǎng)內(nèi)，針對(duì)豬瘟和豬偽狂犬病采取分別凈化的方法。針對(duì)豬瘟的凈 化通常采用采集扁桃體開(kāi)展豬瘟凈化，隨后通過(guò)基因缺失疫苗和鑒別開(kāi)展豬偽狂犬病的凈 化。其具體實(shí)施方案為：首先，對(duì)種豬群進(jìn)行免疫接種，采集樣進(jìn)行檢測(cè)免疫抗體，采集扁桃 體，進(jìn)行豬瘟免疫熒光或套式RT-PCR或熒光定量PCR檢測(cè)豬瘟病毒，檢測(cè)陽(yáng)性母豬，給予淘 汰。隨后，針對(duì)豬偽狂犬病毒凈化，即免疫結(jié)合鑒別診斷，檢測(cè)到野毒陽(yáng)性即淘汰，目前豬偽 狂犬病毒病毒的鑒別診斷技術(shù)靈敏度相對(duì)較低，通常需2-3年監(jiān)測(cè)和陽(yáng)性種豬的淘汰，最 終達(dá)到凈化的目的。
[0004] 由于不同的病毒具有不同的嗜性以及凈化的方法?，F(xiàn)有的豬場(chǎng)凈化疫病的方法不 能同步開(kāi)展豬偽狂犬病和豬瘟的凈化工作，需分別進(jìn)行。并且，由于種豬體重大，不論采集 前腔靜脈血或采集扁桃體均相對(duì)比較復(fù)雜，且應(yīng)激過(guò)大易造成懷孕母豬流產(chǎn)，同時(shí)血樣采 集需要多人協(xié)助，且需要特殊設(shè)備，采集過(guò)程相對(duì)比較費(fèi)時(shí)，采集扁桃體易出現(xiàn)交叉污染。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提出一種豬場(chǎng)凈化疫病的方法，同步凈化豬瘟和豬 偽狂犬病毒，效率高、應(yīng)激小、操作方便。
[0006] 基于上述目的本發(fā)明提供的豬場(chǎng)凈化疫病的方法，通過(guò)免疫抗體檢測(cè)將豬群分為 抗體陰性分群及抗體陽(yáng)性分群；所述抗體陰性分群進(jìn)行加強(qiáng)免疫接種，接種后再次檢測(cè)免 疫抗體，抗體陽(yáng)性豬只納入所述抗體陽(yáng)性分群；采集所述抗體陽(yáng)性分群中母豬分娩時(shí)仔豬 臍帶中的體液作為檢測(cè)樣本，通過(guò)PCR方法同步檢測(cè)豬瘟病毒及豬偽狂犬病毒，保留豬瘟 病毒及豬偽狂犬病毒均為陰性的豬只；對(duì)保留的豬只進(jìn)行定期抽檢與全面檢測(cè)，淘汰豬瘟 病毒及豬偽狂犬病毒均為陽(yáng)性或其中之一為陽(yáng)性豬只，以實(shí)現(xiàn)豬瘟病毒和豬偽狂犬病毒的 同步凈化。
[0007] 較佳的，采集所述抗體陽(yáng)性分群中母豬分娩時(shí)仔豬臍帶中的體液作為檢測(cè)樣本， 分別提取DNA與RNA，其中提取的RNA通過(guò)套式RT-PCR方法檢測(cè)豬瘟病毒；提取的DNA通 過(guò)PCR方法檢測(cè)豬偽狂犬病毒。
[0008] 較佳的，所述提取的DNA通過(guò)PCR方法擴(kuò)增豬偽狂犬病毒的gD基因片段與gE基 因片段，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定。
[0009] 較佳的，所述gD基因片段的大小為217bp，所述gE基因片段的大小為350bp。
[0010] 較佳的，所述套式RT-PCR方法檢測(cè)豬瘟病毒基因片段，其中外套PCR獲得806bp 的基因片段，內(nèi)套PCR獲得基因片段大小為512bp。
[0011] 可選的，所述檢測(cè)樣本母豬分娩時(shí)仔豬臍帶中的體液為3-5mL。
[0012] 較佳的，所述免疫抗體檢測(cè)的是豬瘟病毒抗體、豬偽狂犬病毒gB抗體、豬圓環(huán)2型 抗體和藍(lán)耳病毒抗體，四種免疫抗體檢測(cè)全為陽(yáng)性豬只納入抗體陽(yáng)性分群，存在其中一種 或以上免疫抗體陰性的豬只納入抗體陰性分群。
[0013] 較佳的，所述抗體陰性分群進(jìn)行加強(qiáng)免疫接種，接種其檢測(cè)為陰性的疫病抗體對(duì) 應(yīng)的疫苗一次，接種后一個(gè)月，再次進(jìn)行所述免疫抗體檢測(cè)，檢測(cè)陽(yáng)性豬只納入所述抗體陽(yáng) 性分群，陰性豬只淘汰。
[0014] 較佳的，所述定期抽檢與全面檢測(cè)中，每季度按20-30%抽樣檢測(cè)豬瘟病毒抗體、 豬偽狂犬病毒gB抗體、豬圓環(huán)2型抗體和藍(lán)耳病毒抗體一次。
[0015] 較佳的，所述定期抽檢與全面檢測(cè)中，每半年全部仔豬斷臍帶時(shí)采集臍帶中體液， 通過(guò)PCR方法檢測(cè)豬瘟病毒及豬偽狂犬病毒，并淘汰檢測(cè)兩種疫病均為陽(yáng)性或其中一種為 陽(yáng)性的豬只。
[0016] 從上面所述可以看出，本發(fā)明提供的豬場(chǎng)凈化疫病的方法可以同步達(dá)到凈化豬瘟 和豬偽狂犬病兩種重要疾病，操作簡(jiǎn)便、快速、無(wú)交叉污染且應(yīng)激小。減少了由于豬瘟和豬 偽狂犬病引起的損失。
【附圖說(shuō)明】
[0017] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例豬場(chǎng)凈化疫病的方法的流程示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合具體實(shí)施例，并參照 附圖，對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。
[0019] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例豬場(chǎng)凈化疫病的方法的流程示意圖。如圖1所示，在本實(shí)施 例中，所述豬場(chǎng)凈化疫病的方法通過(guò)免疫抗體檢測(cè)將豬群分為抗體陰性分群及抗體陽(yáng)性分 群；所述抗體陰性分群進(jìn)行加強(qiáng)免疫接種，接種后再次檢測(cè)免疫抗體，抗體陽(yáng)性豬只納入所 述抗體陽(yáng)性分群；采集所述抗體陽(yáng)性分群中母豬分娩時(shí)仔豬臍帶中的體液作為檢測(cè)樣本， 通過(guò)PCR方法同步檢測(cè)豬瘟病毒及豬偽狂犬病毒，保留豬瘟病毒及豬偽狂犬病毒均為陰性 的豬只；對(duì)保留的豬只進(jìn)行定期抽檢與全面檢測(cè)，淘汰豬瘟病毒及豬偽狂犬病毒均為陽(yáng)性 或其中之一為陽(yáng)性豬只，以實(shí)現(xiàn)豬瘟病毒和豬偽狂犬病毒的同步凈化?？梢?jiàn)，本實(shí)施例豬場(chǎng) 凈化疫病的方法通過(guò)PCR方法檢測(cè)豬場(chǎng)母豬分娩的臍帶體液，同步凈化豬瘟病毒和豬偽狂 犬病毒，應(yīng)激小、效率高、操作方便。
[0020] 實(shí)施例一：免疫抗體檢測(cè)及初步分群
[0021] 對(duì)全場(chǎng)的種豬進(jìn)行一次臨床外觀檢查，淘汰老、弱及產(chǎn)仔8胎以上的種豬，組成假 定健康種豬群。
[0022] 采集上述假定健康種豬群的前腔靜脈血分離血清，通過(guò)ELISA (酶聯(lián)免疫吸附實(shí) 驗(yàn)）方法檢測(cè)假定健康種豬群的豬瘟病毒、豬偽狂犬病毒、豬圓環(huán)病毒、藍(lán)耳病的免疫抗體 (武漢科前生物有限公司研發(fā)的豬瘟病毒抗體、豬偽狂犬病毒gB抗體、豬圓環(huán)2型抗體和藍(lán) 耳病毒抗體ELISA試劑盒）的表達(dá)，選取四種抗體均為陽(yáng)性的豬只為成功免疫的豬群，納入 抗體陽(yáng)性分群。
[0023] 判斷標(biāo)準(zhǔn)：
[0024] 豬瘟病毒：S/P (樣本OD63toni值/陽(yáng)性對(duì)照OD 63Qnni值）值彡0. 17,判為陽(yáng)性；S/P值 < 〇. 17,判為陰性。
[0025] 豬偽狂犬病毒gB抗體：S/N(樣本OD630nni值/陰性對(duì)照OD 63Qnni值）值彡0. 7,判為 陰性；S/N值彡0. 6為陽(yáng)性；若0. 6 < S/N值彡0. 7,為可疑，樣品重新檢測(cè)，如果結(jié)果相同， 則間隔兩周再次采樣檢測(cè)。
[0026] 豬圓環(huán)病毒2型抗體：樣品（S-N) ΛΡ-Ν)值彡0. 16,則判為陽(yáng)性；如果樣品（S-N) / (P-N)值< 0. 16,則判為陰性。其中，S為樣本OD63ta值；P為陽(yáng)性對(duì)照OD 63_值；N為陰性 對(duì)照〇D63。?值。
[0027] 藍(lán)耳病毒抗體：樣品KQ值多20,判為陽(yáng)性；樣品KQ值< 20,判為陰性。其中，KQ =(樣本OD630nni值/陽(yáng)性對(duì)照平均值）*100。
[0028] 根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，將假定健康種豬群分為抗體陽(yáng)性分群與抗體陰性分群，兩群隔離 飼養(yǎng)。其中，抗體陽(yáng)性分群為上述免疫抗體檢測(cè)全為陽(yáng)性豬只，抗體陰性分群為上述檢測(cè)存 在免疫抗體陰性的豬只。
[0029] 實(shí)施例二：抗體陰性分群加強(qiáng)免疫
[0030] 根據(jù)實(shí)施例一種抗體檢測(cè)結(jié)果，抗體陰性分群的豬只加強(qiáng)免疫接種其檢測(cè)為陰性 的疫病抗體對(duì)應(yīng)的疫苗一次，按照相應(yīng)疫苗使用說(shuō)明劑量操作。
[0031] 接種相應(yīng)疫苗1個(gè)月后，再次進(jìn)行相應(yīng)免疫抗體檢測(cè)，基于實(shí)施例一判斷標(biāo)準(zhǔn)，將 陰性豬只淘汰，陽(yáng)性豬只納入抗體陽(yáng)性分群。
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