針對頸總動脈或上矢狀竇中誘發(fā)出血的止血劑性能評價用動物模型及其用圖
【技術(shù)領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種用于評價止血性能的動物模型及其用途，更具體地說，涉及一種 用于評價止血劑性能的動物模型，所述動物誘發(fā)有頸總動脈（CCA)或上矢狀竇（SSS)出血， 使用該動物模型篩選止血劑的方法，和使用該動物模型評價止血劑功效的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 如本文所使用的，術(shù)語"醫(yī)用瞬間粘合劑"在廣義上是指包括橡皮膏、手術(shù)粘合劑 和止血劑在內(nèi)的醫(yī)療用品，而在狹義上是指直接在包括皮膚科、血管外科、消化內(nèi)科和整形 外科在內(nèi)的醫(yī)療領域中使用的粘合劑。因為醫(yī)用瞬間粘合劑接觸皮膚，其應當是生物相容 的，不應當對身體有毒有害，應當具有生物相容性并應當具有止血功效。此外，即便是在存 在水分的情況下其也應表現(xiàn)出瞬時粘合的性質(zhì)，且不應當妨礙身體的愈合。
[0003]目前實際使用的醫(yī)用粘合劑材料包括氰基丙烯酸酯類、纖維蛋白膠類、明膠膠水 類和聚氨醋類。氰基丙稀酸辛醋是一種醫(yī)用組織粘合劑（可自美國Closure Medical Corp. 以商品名"多抹棒"(Dermabond)商購獲得），其于1997年8月被EC批準上市銷售并在1998 年被美國FDA批準使用。愛惜康（Ethicon)是強生公司（Johnson&Johnson)的附屬公司，該 公司在包括美國、歐洲和日本的大約50個國家排他性銷售這種產(chǎn)品，并且這種產(chǎn)品在全世 界越來越多地用于醫(yī)學應用，包括裂傷愈合以及整形外科和重建外科之后的切口縫合。此 外，對包括1，2-異亞丙基甘油基2-氰基丙烯酸酯、烷基2-氰基丙烯酰基羥乙酸酯和包含 聚（三氧乙烯草酸酯）的甲氧基丙基氰基丙烯酸酯的組織粘合劑進行了生物相容性和生物 降解性方面的積極研宄。
[0004] 已有研宄集中于將諸如配體肽（其是一種蛋白酶底物和一種特定類型的細胞）的 生物活性材料應用于粘合劑材料纖維蛋白，從而賦予纖維蛋白功能性。Cohesion Corp.(美 國）開發(fā)出纖維蛋白-膠原蛋白復合組織粘合劑（CoStasis?)，其是一種包含凝血酶和牛 膠原蛋白的止血產(chǎn)品。外科膠"Tissel"在1998年被美國FDA批準用于心臟搭橋手術(shù)、結(jié) 腸直腸外科手術(shù)、創(chuàng)傷等，而其他幾種產(chǎn)品正在等待FDA的批準。
[0005] 事實上，使用測試動物對醫(yī)用粘合劑進行的動物模型研宄已報道如下。Bijan S.造 成制作動物模型的兔大動脈破損，并且使用該動物模型測定了醫(yī)用粘合劑Gelfoam、Avitene、 Surgicel 和 FloSeal 的止血功效（Bijan. ? S 等人，Journal of Surgical Research，106 : 99-107,2002)。此外，Hasan Bilgili誘發(fā)在豬皮膚、肝臟、脾、靜脈和動脈中的出血來制作豬 出血模型，并使用該豬出血模型評價了止血功效（Hasan Bilgili等人，Med Princ Pract，18: 165-169 2009)。此外，Ozer Kandemir等人通過對具有主動脈出血的大鼠模型的病理和免 疫組織學分析研宄了新的活性止血成分的功效（Hasan Bilgili等人，Med Princ Pract，18: 165-169 2009)。
[0006] 然而，在自然止血困難的情況下，如血液噴涌，尚未見報道用于演示在血液涌出的 狀態(tài)下止血劑的止血功效的動物模型。此外，在最嚴重的出血，如動脈出血的情況下，也就 是，在從傷口噴出的血液達到相當高度的情況下，血液以高速率流出使大量的血液會損失。 在這種情況下，血液難以凝結(jié)，并且因此是不容易評價止血劑的功效。
[0007] 另外，在用于評價止血劑功效的止血動物模型的制備中，由于動脈和靜脈的特征， 難以選擇血管。出于這個原因，止血動物模型的制備方法有限。
[0008] 同時，上矢狀竇出血是不可避免的并且在鼻竇手術(shù)中經(jīng)常發(fā)生。然而，因為圍繞上 矢狀竇的組織是硬組織，難以篩選有效的止血劑。此外，由于不存在用于篩選抑制出血的組 合物的有效的動物模型，使用軟組織篩選的止血劑得以應用。
[0009] 因此，本發(fā)明人已進行了廣泛的努力來開發(fā)新型且有效的用于評價止血性能的動 物模型，和使用該動物模型評價止血劑功效的方法，并且結(jié)果是，已制備出在動物的頸總動 脈（CCA)或矢狀竇（SSS)中誘發(fā)有出血的動物模型，并且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該動物模型對測試止血 劑功效是有用的，從而完成了本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明的一個目的是提供一種用于評價止血劑性能的動物模型。
[0011] 本發(fā)明的另一個目的是提供一種使用上述動物模型篩選止血劑的方法。
[0012] 本發(fā)明的又另一個目的是提供一種使用上述動物模型評價止血劑功效的方法。
[0013] 為了達到上述目的，本發(fā)明提供了一種用于評價止血劑功效的動物模型，該動物 在頸總動脈（CCA)或上矢狀竇（SSS)中誘發(fā)有出血。
[0014] 本發(fā)明還提供了通過使用上述評價止血劑功效的動物模型來從候選止血劑中篩 選止血劑的方法。
[0015] 本發(fā)明還提供了通過使用上述評價止血劑功效的動物模型來評價止血劑功效的 方法。
[0016] 本發(fā)明的其它的特征和實施方式將從以下的詳細說明和所附權(quán)利要求中更顯而 易見。
【附圖說明】
[0017] 圖1示出麻醉試驗動物的步驟。
[0018] 圖2示出在麻醉后的頭部已被固定在立體定位架，且要對剃毛后的部位進行手術(shù) 操作的試驗動物。
[0019] 圖3示出向溫度傳感器施用潤滑劑，舉起試驗動物的尾巴，然后將溫度傳感器插 入肛門的步驟。
[0020] 圖4示出切開動物模型的手術(shù)部位并除去結(jié)締組織以暴露動脈。
[0021] 圖5示出作為動脈模型的手術(shù)部位的頸總動脈（CCA)。
[0022] 圖6示出在誘發(fā)出血后為了止血而施用于棉的止血劑。
[0023] 圖7示出切開靜脈模型的頭皮。
[0024] 圖8示出通過切開顱骨以確保手術(shù)部位和示出上矢狀竇（SSS)的位置。
[0025] 圖9示出使用動脈動物模型測試候選止血劑的止血功效的結(jié)果。
[0026] 圖10示出使用靜脈動物模型測試候選止血劑的止血功效的結(jié)果。
【具體實施方式】
[0027] 除非另有定義，否則本文中所用的全部技術(shù)和科學術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領域普 通技術(shù)人員通常所理解的含義相同的含義。一般地說，本文所用的命名法和在下文描述的 實驗方法是本領域公知的和常用的。
[0028] 在一個方面，本發(fā)明涉及一種用于評價止血劑功效的動物模型，該動物的頸總動 脈（CCA)或上矢狀竇（SSS)中誘發(fā)有出血。
[0029] 在一個實施方案中，用于評價根據(jù)本發(fā)明的止血劑功效的動物模型可通過包括以 下步驟的方法來制備：(a)確保動物的動脈手術(shù)部位；和（b)誘發(fā)動物的頸總動脈（CCA)出 血。
[0030] 在另一個實施方案中，用于評價根據(jù)本發(fā)明的止血劑功效的動物模型可通過包 括以下步驟的方法來制備：(a'）確保動物的靜脈手術(shù)部位；和（b'）誘發(fā)動物的上矢狀竇 (SSS)出血。
[0031] 在本發(fā)明中，該方法可以進一步在步驟（a)之前包括麻醉動物的步驟。
[0032] 動物麻醉可以根據(jù)本領域技術(shù)人員已知的任何常規(guī)方法來進行。在本發(fā)明中的 用于麻醉動物的麻醉方法優(yōu)選用Zoletil/Rompun麻醉動物的方法；用氯胺酮/甲苯噻嘆/ 乙酰丙嗪麻醉動物的方法；單獨用戊巴比妥鈉麻醉動物的方法；或用異氟烷麻醉動物的方 法，但不特別限定于此。
[0033] 在本發(fā)明的一個實施方案中，麻醉可以使用Zoletil/Rompun進行，將流體（乳酸 林格氏液等）在外科手術(shù)期間給予動物，并且可在外科手術(shù)后給予抗生素和止痛藥。
[0034] 用于步驟（a)和（a'）中的動物可以包括能誘發(fā)出血的所有動物。優(yōu)選地，可以包 括哺乳動物。更優(yōu)選地，可以包括嚙齒動物如小鼠、豚鼠、倉鼠和大鼠，以及非人靈長類動 物，如貓、狗、豬、兔、綿羊、山羊、鹿、馬、牛、山魈、黑猩猩和猴。
[0035] 用于步驟（b)和（b'）中的頸總動脈（CCA)和上矢狀竇（SSS)的特征在于具有與 動物沒有關(guān)系的部位特異性特征。
[0036] 例如，所使用的動物可以是7-15周齡的