測定菌長速，并記錄滿 肩時間、滿袋時間。
[0050] 為了考察本發(fā)明所述谷粒菌種培養(yǎng)基的優(yōu)勢，本發(fā)明進(jìn)行了對比試驗，對照組培 養(yǎng)基為玉米粒培養(yǎng)基：玉米粒99%，生石灰1% ;對比試驗結(jié)果如表2所示。
[0051] 表2黑木耳谷粒菌種的滿袋時間
[0052]
[0053] 由表2可知，菌絲在"麥粒+酸棗枝肩"谷粒培養(yǎng)基比純麥粒培養(yǎng)基的長速快，這 是因為麥粒間隙酸棗枝肩的添加，更有利于菌絲生長，且，在液體培養(yǎng)基中加入酸棗枝肩， 使菌絲能夠更快適應(yīng)生長底物，從而加快發(fā)菌速度，縮短生產(chǎn)周期提高生產(chǎn)效率。
[0054] C.酸棗枝肩培養(yǎng)料的制備
[0055] 按質(zhì)量百分比，稱取酸棗枝肩60%、棉籽皮19%，柿木肩10%，麩皮10%，生石灰 1% ;料水比為1:1. 4進(jìn)行拌料，混合均勻后，堆悶30min后裝入容器中進(jìn)行滅菌和接種工 作。
[0056] 將上述培養(yǎng)料裝入聚乙烯袋、聚丙烯袋或玻璃瓶內(nèi)，口徑不限，常規(guī)扎口，高壓滅 菌一般以121°C滅菌，保持150min;常壓滅菌一般以100°C滅菌，保持24h;冷卻后接種。
[0057] 本發(fā)明在研宄過程中對酸棗枝肩的用量進(jìn)行了考察，具體如下：
[0058] 按表3所示準(zhǔn)確稱取各組分，將其混合均勻，加水，料水比為1:1. 4,將配置好的培 養(yǎng)料裝入試管，每個配方重復(fù)5次，121°C高壓滅菌150min。將步驟B所述谷粒菌種分別接 入含有培養(yǎng)料的試管中，進(jìn)行試管營養(yǎng)生長試驗。
[0059] 表3培養(yǎng)基配方（干料，％ )
[0060]
[0061] 每隔2天觀察一次試管中菌絲的長速和長勢情況，用游標(biāo)卡尺（精確度0. 02mm) 測定菌絲長速。菌絲長速長勢結(jié)果如表4所示。
[0062] 表4黑木耳的菌絲生長情況
[0063]
[0064] (注：列^菌絲長速均為平^值土標(biāo)準(zhǔn)誤"++表示生長致++表示生長較致 密，+表不生長一般。）
[0065] 由表4可以看出，當(dāng)酸棗枝肩粉末添加量略有增加時，其長勢較好，菌絲潔白、較 致密，與純棉籽皮培養(yǎng)基具有可比性，菌絲在配方P6上生生長最快，比純酸棗枝肩P5長速 快。
[0066] 按表3中的配方稱取各成分，混合均勻，料水比1 :1. 4進(jìn)行拌料，裝入 17cmX32cmX0. 05cm聚乙烯塑料袋，每袋裝干料約300g，接種量為"液體菌種一酸棗枝肩+ 棉籽皮"制種的谷粒菌種一接種勺，觀察并記錄各個配方的生長情況并計算生物轉(zhuǎn)化率。試 驗結(jié)果如表5所示。
[0067] 生物轉(zhuǎn)化率（％ )=(子實體鮮重/培養(yǎng)料干重）X100%
[0068] 表5黑木耳的生物轉(zhuǎn)化率
[0069]
[0070] 由表5可以看出，當(dāng)酸棗枝肩為主要碳源達(dá)到60%時，黑木耳的生物轉(zhuǎn)化率達(dá)到 了 82. 64%，盡管未達(dá)到栽培料主料為純棉籽皮時的生物轉(zhuǎn)化率87. 67 %，但具有可比性。 綜上所述，酸棗枝肩可以部分代替棉籽皮成為黑木耳種植中的主料，酸棗枝肩這一林業(yè)廢 棄物也得到了資源化利用，對生態(tài)農(nóng)業(yè)建設(shè)具有重要意義。
[0071] 本發(fā)明最終確定適宜栽培黑木耳配方為酸棗枝肩60%、棉籽皮19%，柿木肩 10%，麩皮10%，生石灰1%，料水比為1:1. 4進(jìn)行拌料。
[0072] D?接種、培養(yǎng)、采收
[0073] 將滅菌冷卻后的出菇袋，無菌操作下按照5-10%的接種量接入步驟B所得谷粒 菌種?？蓪⒔雍梅N的菌袋置于25°C室溫下進(jìn)行避光培養(yǎng)，室內(nèi)溫度應(yīng)保持22°C-30°C，使 菌種盡快萌發(fā)、定植。接菌5天后溫度控制在23°C-25°C，每天早晚通風(fēng)，每次各50分鐘， 1周后檢查菌袋是否受雜菌污染，若有雜菌要及時隔離培養(yǎng)。發(fā)菌室要求相對濕度保持在 55% -68%，10-15天后翻堆時將外袋取出，以增加氧氣，促進(jìn)菌絲生長。待菌絲滿袋后，敞 開袋口進(jìn)行生殖生長管理階段。
[0074] 割口后的菌袋在耳棚內(nèi)保溫保濕培養(yǎng)3-5天，割口處形成潔白菌絲時，再過3-4天 后瘤狀的黑色原基就能封住割口，這段時間是整個出耳期的主要管理環(huán)節(jié)。培養(yǎng)室溫度控 制在15°C-25°C，以20°C-22°C為宜。溫度過高，耳片薄、產(chǎn)量低；溫度過低，耳片生長緩慢。 而且培養(yǎng)室要加強水分管理，使室內(nèi)空氣相對濕度保持在80%左右（初期），要經(jīng)常通風(fēng)， 保持室內(nèi)空氣新鮮，但又不能通風(fēng)量太大，以防耳芽出現(xiàn)干枯現(xiàn)象。噴水時不宜直接向菌袋 出耳處噴射，以防水分過大造成爛耳。出耳旺盛期相對濕度要求85% -95%。
[0075] 當(dāng)子實體長到八成熟，即朵片邊緣呈波浪形且變薄，耳根收縮，快要彈射孢子時， 應(yīng)及時采收。采耳時一手拿袋一手將耳順袋采下，注意不要將耳根留在袋內(nèi)，防止耳基受雜 菌感染影響出耳。采下的耳要剪去帶培養(yǎng)基的耳根，大朵撕開分類，成為單片耳，質(zhì)優(yōu)價高。
[0076] 綜上所述，本發(fā)明所述酸棗枝肩為主料可用于栽培黑木耳，因此，將酸棗枝作為可 循環(huán)利用的生物資源，用于產(chǎn)業(yè)化開發(fā)具有重要的創(chuàng)新意義和現(xiàn)實價值，再結(jié)合細(xì)胞工程 定向選育適宜分解酸棗枝肩的優(yōu)良菌株，將會產(chǎn)生更好效果。
【主權(quán)項】
1. 一種利用酸棗枝肩培養(yǎng)黑木耳的方法，包括如下步驟： A. 液體菌種的制備和培養(yǎng)； B. 谷粒菌種的制備和培養(yǎng)； C. 栽培用培養(yǎng)基的制備； D. 無菌條件下，將步驟B制備得到的谷粒菌種接入步驟C制備得到的培養(yǎng)基，進(jìn)行培 養(yǎng)、出葫管理、米收； 其特征在于：在步驟A或/和步驟B或/和步驟C的培養(yǎng)基中含有酸棗枝肩。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用酸棗枝肩培養(yǎng)黑木耳的方法，其特征包括：步驟A中黑 木耳的液體菌種培養(yǎng)基中作為底物誘導(dǎo)物提前加入酸棗枝肩；其優(yōu)化液體菌種培養(yǎng)基配 方重量百分比為：馬鈴薯20%，酸棗枝肩5%，麩皮3%，葡萄糖2%，KH 2PO4 0.3%，MgSO4 0? 15%，VBi 10mg/L，羧甲基纖維素 0.3%，水 1000mL，pH 自然。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述利用酸棗枝肩培養(yǎng)黑木耳的方法，所述步驟A中液體菌種的制 備特征在于： a. -級液體菌種的制備 無菌條件下，將市售母種接入一級液體培養(yǎng)基中，25°C、160r/min恒溫振蕩培養(yǎng)7d，即 制得一級液體菌種； 所述一級液體菌種培養(yǎng)基包括：以重量百分比計，馬鈴薯20 %，麩皮3 %，葡萄糖2 %， KH2PO4 0. 3%, MgSO4 0. 15%, CMC 0. 3%, VB1 10mg/L ； b. 二級液體菌種的制備 所述二級液體菌種培養(yǎng)基配方重量百分比為：馬鈴薯20 %，酸棗枝肩5 %，麩皮3 %，葡 萄糖 2% ,KH2PO4 0.3% ,MgSO4 0.15%，CMC OJKVB1 10mg/L，制備方法是將馬鈴薯、酸棗 枝肩粉和麩皮加水1000 mL共煮，開鍋后保持微沸30分鐘，過濾，取濾液，趁熱加入其它組 分，攪拌化開后，定容至水lOOOmL，分裝，滅菌，待接種； 無菌條件下，將一級液體菌種以10%的接種量接入二級液體培養(yǎng)基中，25°C、160r/min 恒溫振蕩培養(yǎng)7d，即制得二級液體菌種。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用酸棗枝肩培養(yǎng)黑木耳的方法，其特征包括：步驟B中黑 木耳的谷粒菌種培養(yǎng)基中也作為底物誘導(dǎo)物、提前加入酸棗枝肩；其優(yōu)化的谷粒菌種培養(yǎng) 基配方：玉米粒85%，酸棗枝肩10%，麩皮4%，生石灰1%。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述利用酸棗枝肩培養(yǎng)黑木耳的方法，所述步驟B中谷粒菌種的制 備特征在于： 將步驟A得到的二級液體菌種接入谷粒菌種培養(yǎng)基，接種量為10 %，22-24°C培養(yǎng)至 滿，得到谷粒菌種。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用酸棗枝肩培養(yǎng)黑木耳的方法，其特征包括：步驟C中酸 棗枝肩作為栽培黑木耳的主料，栽培培養(yǎng)基重量組成包括：酸棗枝肩60%、棉籽皮19%、柿 木肩10%、麩皮10%、生石灰1%。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述利用酸棗枝肩培養(yǎng)黑木耳的方法，所述步驟C中酸棗枝肩培養(yǎng) 基的制備特征在于：將酸棗枝，柿木碎段粉碎成木肩狀，配以棉籽皮、麩皮和生石灰，料水比 為1 : 1.4,堆悶30min，裝入容器內(nèi)，滅菌，冷卻后備用。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述利用酸棗枝肩培養(yǎng)黑木耳的方法，其特征在于，步驟D中谷粒菌 種的接種量為5-10%。9. 根據(jù)權(quán)利要求2所述利用酸棗枝肩培養(yǎng)基栽培黑木耳的方法，其特征在于，液體培 養(yǎng)基中所用酸棗枝肩，事先粉碎并過80目篩。10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述利用酸棗枝肩培養(yǎng)黑木耳的方法，其特征在于，步驟C中酸棗 枝肩培養(yǎng)基的滅菌條件為121°C高壓滅菌150min或100°C常壓滅菌24h。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種利用酸棗枝屑為主料培養(yǎng)黑木耳的方法，包括如下步驟：A.液體菌種的制備和培養(yǎng)；B.谷粒菌種的制備和培養(yǎng)；C.栽培用培養(yǎng)基的制備；D.無菌條件下，將步驟B制備得到的谷粒菌種接入步驟C制備得到的培養(yǎng)基，進(jìn)行培養(yǎng)、出菇管理、采收；創(chuàng)新點在于，在步驟A或/和步驟B或/和步驟C的培養(yǎng)基中含有酸棗枝屑。本發(fā)明充分利用了林業(yè)廢棄物酸棗枝，形成循環(huán)經(jīng)濟(jì)模式，避免了自然資源的浪費和環(huán)境的污染，而且還降低了栽培成本。利用酸棗枝屑栽培黑木耳的栽培技術(shù)，具有顯著的經(jīng)濟(jì)效益和生態(tài)效益，具有廣闊的應(yīng)用前景。
【IPC分類】A01G1/04, C12N1/14
【公開號】CN104956923
【申請?zhí)枴緾N201510407534
【發(fā)明人】王謙, 盧紅, 劉敏
【申請人】河北大學(xué)
【公開日】2015年10月7日
【申請日】2015年7月13日