一種款冬花的快速繁育方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥材育苗技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及一種款冬花的快速繁育方法。
【背景技術(shù)】
[0002]款冬(Tussilago farfara)，另Ij名冬花、蜂斗菜或款冬蒲公英，屬于菊科款冬屬植物?；ɡ偃胨帲晕缎翜兀哂袧?rùn)肺下氣，化痰止嗽的作用。在《本經(jīng)》中記載:對(duì)“寒束肺經(jīng)之飲邪喘、嗽最宜”。氣味雖溫，潤(rùn)而不燥，則溫?zé)嶂?，郁于肺?jīng)而不得疏泄者，亦能治之。故外感內(nèi)傷、寒熱虛實(shí)的咳嗽，皆可應(yīng)用。特別是肺虛久咳不止，最為適用?？疃ɡ偻ǔＴ?0月下旬至12月下旬花尚未出土?xí)r采挖。
[0003]隨著中藥材市場(chǎng)的發(fā)展及款冬的現(xiàn)代藥理學(xué)研宄的深入，款冬的需求量將會(huì)不斷增加，因此有必要對(duì)款冬的人工栽培種植進(jìn)一步研宄，以適應(yīng)市場(chǎng)的發(fā)展。傳統(tǒng)的種植方法育苗數(shù)量少，幼苗成活率低，大大降低了款冬花種植業(yè)的進(jìn)步。因此有必要進(jìn)一步深入研宄與開發(fā)種苗栽培技術(shù)。由于組織培養(yǎng)法繁殖植物的明顯特點(diǎn)是快速，每年可以數(shù)以百萬倍速度繁殖，因此對(duì)一些繁殖系數(shù)低，不能用種子繁殖的植物品種的繁殖，尤為意義重大，如發(fā)明專利CN103141395B公開的一種山綠茶種苗的快速繁育方法，包括外植體滅菌、初代誘導(dǎo)、繼代增殖、生根移栽等技術(shù)環(huán)節(jié)，使山綠茶迅速增殖，短時(shí)間內(nèi)生產(chǎn)大量?jī)?yōu)質(zhì)種苗；CN102511396B明公開了一種藥用植物瑪咖離體快速繁育的方法，主要通過培養(yǎng)基的配制、無菌苗制備、芽簇誘導(dǎo)和生根培養(yǎng)過程實(shí)現(xiàn)的；CN103688857B公開了一種快速繁育鐵皮石斛的方法。諸如此類的組織培養(yǎng)技術(shù)表明植物離體培養(yǎng)可實(shí)踐性很強(qiáng)，尋求特別適宜于款冬花的組織培養(yǎng)技術(shù)可大大提高繁育效率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明針對(duì)款冬花根狀莖繁殖效率低，限制了款冬花產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展的問題，提供一種款冬花的快速繁育方法，該方法適用于款冬花種苗繁育，推動(dòng)了款冬花的大面積規(guī)?；耘?。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn):
[0006]一種款冬花的快速繁育方法，包括以下步驟:
[0007]⑴在秋末冬初季節(jié)，選擇粗壯多花、顏色較白，且沒有病蟲害的款冬根狀莖，用清水洗凈附著泥土，用0.1 %的升未溶液滴加數(shù)滴吐溫80浸泡lOmin，再用無菌水沖洗三次，每次2-5min，切成l_2cm的小段作為外植體，將外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基在光照條件下進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，獲得叢生芽；所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基，大量元素減半，并添加濃度為15-25g/L的蔗糖、濃度為2-5g/L的瓊脂、濃度為0.5-1.5mg/L的6-BA、濃度為 0.3-lmg/L 的 NAA ；
[0008]⑵將步驟⑴所得叢生芽轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基在光照條件下進(jìn)行叢生芽繼代增殖培養(yǎng)，獲得繼代增殖叢生芽；所述增殖培養(yǎng)基以MS(1/3NH4N03)培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基，并添加濃度為15-25g/L的蔗糖、濃度為3-6g/L的瓊脂、濃度為l_3mg/L的6-BA、濃度為2-3.5mg/L的NAA，所述MS (1/3NH4N03)培養(yǎng)基中硝酸銨的濃度為MS培養(yǎng)基中硝酸銨濃度的1/3，其余組分及其濃度與MS培養(yǎng)基相同；
[0009]⑶當(dāng)步驟⑵所得繼代增殖叢生芽生長(zhǎng)至3_4cm高時(shí)，將叢生芽切成單芽，轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基在光照條件下進(jìn)行生根培養(yǎng)，獲得試管苗；所述生根培養(yǎng)基以1/2MS培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基，并添加濃度為15-20g/L的蔗糖、濃度力3.5-6g/L的卡拉膠、濃度為0.2-0.3mg/L的細(xì)胞激動(dòng)素、濃度為0.35-0.55mg/L的NAA、濃度為0.1-0.3mg/L的GA，所述1/2MS培養(yǎng)基所含組分種類與MS培養(yǎng)基相同，但各組分的濃度僅為MS培養(yǎng)基中濃度的1/2 ；
[0010]⑷將步驟⑶所得試管苗移栽入體積比為3:1:6的珍珠巖、蛭石、泥炭土混合基質(zhì)中培養(yǎng)，即得脫毒組培種苗。
[0011]進(jìn)一步，步驟⑴-⑶所述培養(yǎng)溫度為26±1°C，光照強(qiáng)度為1000-15001UX，光照時(shí)間為每天10-14小時(shí)；
[0012]進(jìn)一步，步驟⑴-⑶所述光照強(qiáng)度為12501UX，光照時(shí)間為每天12小時(shí)；
[0013]進(jìn)一步，步驟⑵是將叢生芽分割至含有2-3個(gè)芽叢，再將其莖基部0.5cm以上部分切除，形成微型團(tuán)塊轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基，接種時(shí)先棄去培養(yǎng)基表面的水層，并使芽切口露出培養(yǎng)基表面。
[0014]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明系統(tǒng)地進(jìn)行了款冬花根狀莖叢生芽誘導(dǎo)、叢生芽繼代增殖、生根培養(yǎng)和試管苗移栽等研宄工作，得到的幼苗移栽成活率高達(dá)87.5以上％，且芽苗健壯，生長(zhǎng)快；周期短，成本低，完全能滿足款冬花大面積規(guī)模化栽培的需要，具有良好的應(yīng)用前景。
【具體實(shí)施方式】
[0015]結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步闡述，不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的范圍限制。
[0016]實(shí)施例1
[0017]在秋末冬初季節(jié)，選擇粗壯多花、顏色較白，且沒有病蟲害的款冬根狀莖，用清水洗凈附著泥土，用0.1 %的升汞溶液滴加數(shù)滴吐溫80浸泡lOmin，再用無菌水沖洗三次，每次2min，切成Icm的小段作為外植體，將外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基在光照條件下進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，獲得叢生芽；所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基，大量元素減半，并添加濃度為15g/L的蔗糖、濃度為2g/L的瓊脂、濃度為0.5mg/L的6-BA、濃度為0.3mg/L的NAA。叢生芽轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基在光照條件下進(jìn)行叢生芽繼代增殖培養(yǎng)，獲得繼代增殖叢生芽；所述增殖培養(yǎng)基以MS(1/3NH4N03)培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基，并添加濃度為15g/L的蔗糖、濃度為3g/L的瓊脂、濃度為lmg/L的6-BA、濃度為2mg/L的NAA，所述MS (1/3NH4N03)培養(yǎng)基中硝酸銨的濃度為MS培養(yǎng)基中硝酸銨濃度的1/3，其余組分及其濃度與MS培養(yǎng)基相同。繼代增殖叢生芽生長(zhǎng)至3cm高時(shí)，將叢生芽切成單芽，轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基在光照條件下進(jìn)行生根培養(yǎng)，獲得試管苗；所述生根培養(yǎng)基以1/2MS培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基，并添加濃度為15g/L的蔗糖、濃度力3.5g/L的卡拉膠、濃度為0.2mg/L的細(xì)胞激動(dòng)素、濃度為0.35mg/L的NAA、濃度為0.lmg/L的GA，所述1/2MS培養(yǎng)基所含組分種類與MS培養(yǎng)基相同，但各組分的濃度僅為MS培養(yǎng)基中濃度的1/2。試管苗移栽入體積比為3:1:6的珍珠巖、蛭石、泥炭土混合基質(zhì)中培養(yǎng)，即得脫毒組培種苗。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，生根率90%，增殖倍數(shù)11.6，移栽