一種鐵皮石斛根尖組培快速繁育方法
【專利說明】
[0001]技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及一種鐵皮石斛根尖組培快速繁殖的育苗方法，屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域。
[0002]【背景技術(shù)】:
野生鐵皮石斛由于生長條件十分苛刻，產(chǎn)量極為稀少，被國家列為瀕危物種保護(hù)?，F(xiàn)代人工種植的種苗來自鐵皮石斛種子有性繁殖，由于自然育種條件下，種子繁殖后代變異較多，個(gè)體植株差異較大，性狀不穩(wěn)定，生產(chǎn)成本高，產(chǎn)量較低，因此，優(yōu)良品種的留種擴(kuò)繁成為迫切需求。本發(fā)明采用人工選取優(yōu)良植株，通過脫毒種苗組織培養(yǎng)快繁技術(shù)，使種苗后代繼承了原植株的優(yōu)良性狀，不帶病毒，抗性良好，產(chǎn)量穩(wěn)定。從而在生產(chǎn)上具有重要的推廣價(jià)值。
[0003]
【發(fā)明內(nèi)容】
:
本發(fā)明提供一種鐵皮石斛根尖組培快速繁育方法，包括如下步驟:
根尖消毒:選取健壯的鐵皮石斛苗，取1~1.5cm的根尖依次經(jīng)流水沖洗lh，75%的乙醇溶液消毒40s，無菌水沖洗2遍后再把根尖放入容器中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的升汞浸泡8分鐘，再用無菌水沖洗4-5遍，得到待接種根尖；
根尖分化:將上述待接種根尖切取0.3-0.5mm，接入誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基中，在溫度為25°C，光照強(qiáng)度18001x，每日光照時(shí)間12小時(shí)的條件下，培養(yǎng)兩個(gè)月，得到分化的根尖；增殖培養(yǎng):將上述步驟中待分化的根尖置于增殖培養(yǎng)基，在溫度25°C，光照強(qiáng)度18001x，光照時(shí)間12小時(shí)的條件下，培養(yǎng)45天，得到經(jīng)增殖培養(yǎng)的根尖；
生根培養(yǎng):將上述經(jīng)增殖培養(yǎng)的根尖置于生根培養(yǎng)基中，在溫度25°C，光照強(qiáng)度18001x，光照時(shí)間12小時(shí)的條件下，培養(yǎng)45天，得到生根苗，得到的生根苗經(jīng)煉苗后即可移栽。
[0004]所述的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基由如下重量份的原料組成的:MS培養(yǎng)基100份，0.4mg/LNAA 1-10份，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%香蕉汁1-10份，5.7g/L瓊脂0.5_5份，30g/L蔗糖10-30份、松花粉5-20份，硅藻粉5-10份。進(jìn)一步優(yōu)選為:MS培養(yǎng)基100份，0.4mg/L NAA 5.5份，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%香蕉汁1-10份，5.7g/L瓊脂0.5-5份，30g/L蔗糖18份、松花粉12.5份，娃藻粉6份。
[0005]所述的增殖培養(yǎng)基由如下原料組成的:MS培養(yǎng)基100份，1.0mg/L NAA 1_5份，0.2mg/L 6-BA0.5-3份，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%馬鈴薯汁1-10份，5.7g/L瓊脂0.5-5份，30g/L蔗糖10-20份，硫脲3-10份。進(jìn)一步有選為:所述的增殖培養(yǎng)基由如下原料組成的:MS培養(yǎng)基100份，1.0mg/L NAA 4份，0.2 mg/L 6-BA 2份，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%馬鈴薯汁6.5份，5.1g/L瓊脂2份，30g/L蔗糖13份，硫脲5.5份。
[0006]所述的生根培養(yǎng)基由如下原料組成的:MS培養(yǎng)基100份，0.2mg/L NAA 1-5份，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%香蕉汁1-10份，5.7g/L瓊脂0.5-5份，30g/L蔗糖10-20份，茶樹根粉5-15份。進(jìn)一步優(yōu)選為:MS培養(yǎng)基100份，0.2mg/L NAA 3.5份，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%香蕉汁4.5份，5.7g/L瓊脂2.5份，30g/L蔗糖15份，茶樹根粉12.5份。
[0007]采用上述培養(yǎng)基進(jìn)行野生鐵皮石斛的培養(yǎng)，培養(yǎng)周期短，野生鐵皮石斛的適應(yīng)性強(qiáng)，移栽后成活率高，如實(shí)施例2，比實(shí)施例1培養(yǎng)的鐵皮石斛的成活率高10-25%，移栽后的成活率比實(shí)施例1高17-20%。
[0008]本發(fā)明的松花粉、硅藻粉具有消毒殺菌、防霉變的作用；硫脲具有抑制病菌的效果，同時(shí)在增殖培養(yǎng)中提供營養(yǎng)；茶樹根粉由于粒度較細(xì)(本發(fā)明所用的粒度為過300目及以上)，在生根過程中，促進(jìn)根系部位的呼吸，同時(shí)具有殺菌消毒的作用。
【具體實(shí)施方式】
[0009]結(jié)合實(shí)驗(yàn)案例，進(jìn)一步闡述。
[0010]實(shí)驗(yàn)例1:
選取健壯的鐵皮石斛苗，取1.5cm左右的根尖用流水沖洗Ih左右，再用75%的乙醇溶液消毒40s，接著無菌水沖洗2遍，然后把材料放入燒杯中，用0.1%的升汞浸泡8分鐘，然后用無菌水沖洗4-5遍，取0.3-0.5mm大小的根尖接種到誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基中:MS培養(yǎng)基(100份)+ ΝΑΑ0.4mg/L (3.5 份)+ 香蕉汁 10% (6.4 份)+ 瓊脂 5.7g/L (3.7 份)+ 蔗糖 30g/L(28份)，在溫度25°C，光照強(qiáng)度18001x，光照時(shí)間12小時(shí)的條件下，培養(yǎng)兩個(gè)月。后轉(zhuǎn)接增殖培養(yǎng)基中:MS培養(yǎng)基(100份)+ NAA1.0mg/L (1.5份)+6-BA0.2 mg/L (1.2份)+馬鈴薯汁10% (7.3份)+瓊脂5.7g/L (1.8份)+蔗糖30g/L (14.3份)，在溫度25°C，光照強(qiáng)度18001x，光照時(shí)間12小時(shí)的條件下，培養(yǎng)一個(gè)半月。轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基:MS培養(yǎng)基(100份)+ ΝΑΑ0.2mg/L (2.1 份)+ 香蕉汁 10% (5.5 份)+ 瓊脂 5.7g/L (1.6 份)+ 蔗糖 30g/L(20份)，在溫度25°C，光照強(qiáng)度18001x，光照時(shí)間12小時(shí)的條件下，培養(yǎng)一個(gè)半月左右，即可煉苗后移栽。
[0011]實(shí)施例2
根尖消毒:選取健壯的鐵皮石斛苗，取1~1.5cm的根尖依次經(jīng)流水沖洗lh，75%的乙醇溶液消毒40s，無菌水沖洗2遍后再把根尖放入容器中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的升汞浸泡8分鐘，再用無菌水沖洗4-5遍，得到待接種根尖；
根尖分化:將上述待接種根尖切取0.3-0.5mm，接入誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基中，在溫度為25°C，光照強(qiáng)度18001x，每日光照時(shí)間12小時(shí)的條件下，培養(yǎng)45天，得到分化的根尖；所述的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基100份，0.4mg/L NAA 5.5份，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%香蕉汁1_10份，5.7g/L瓊脂0.5-5份，30g/L蔗糖18份、松花粉12.5份，硅藻粉6份的混合物。
[0012]增殖培養(yǎng):將上述步驟中待分化的根尖置于增殖培養(yǎng)基，在溫度25°C，光照強(qiáng)度18001x，光照時(shí)間12小時(shí)的條件下，培養(yǎng)38天，得到經(jīng)增殖培養(yǎng)的根尖，所述的增殖培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基100份，1.0mg/L NAA 4份，0.2 mg/L 6-BA 2份，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%馬鈴薯汁6.5份，5.7g/L瓊脂2份，30g/L蔗糖13份，硫脲5.5份的混合物；
生根培養(yǎng):將上述經(jīng)增殖培養(yǎng)的根尖置于生根培養(yǎng)基中，在溫度25°C，光照強(qiáng)度18001x，光照時(shí)間12小時(shí)的條件下，培養(yǎng)38天，得到生根苗，得到的生根苗經(jīng)煉苗后即可移栽，所述的生根培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基100份，0.2mg/L NAA 3.5份，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%香蕉汁4.5份，5.7g/L瓊脂2.5份，30g/L蔗糖15份，茶樹根粉12.5份的混合物。
[0013]采用本發(fā)明的技術(shù)方案培養(yǎng)時(shí)間短，穩(wěn)定性高，不帶來病菌，保持了野生鐵皮石斛原有的生長特性。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種鐵皮石斛根尖組培快速繁育方法，其特征在于，包括如下步驟: 根尖消毒:選取健壯的鐵皮石斛苗，取1~1.5cm的根尖依次經(jīng)流水沖洗lh，75%的乙醇溶液消毒40s，無菌水沖洗2遍后再把根尖放入容器中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的升汞浸泡8分鐘，再用無菌水沖洗4-5遍，得到待接種根尖； 根尖分化:將上述待接種根尖切取0.3-0.5mm，接入誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基中，在溫度為.25°C，光照強(qiáng)度18001x，每日光照時(shí)間12小時(shí)的條件下，培養(yǎng)兩個(gè)月，得到分化的根尖； 增殖培養(yǎng):將上述步驟中待分化的根尖置于增殖培養(yǎng)基，在溫度25°C，光照強(qiáng)度.18001x，光照時(shí)間12小時(shí)的條件下，培養(yǎng)45天，得到經(jīng)增殖培養(yǎng)的根尖； 生根培養(yǎng):將上述經(jīng)增殖培養(yǎng)的根尖置于生根培養(yǎng)基中，在溫度25°C，光照強(qiáng)度.18001x，光照時(shí)間12小時(shí)的條件下，培養(yǎng)45天，得到生根苗，得到的生根苗經(jīng)煉苗后即可移栽。
2.根尖權(quán)利要求1所述的鐵皮石斛根尖組培快速繁育方法，其特征在于，所述的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基由如下重量份的原料組成的:MS培養(yǎng)基100份，0.4mg/LNAA 1_10份，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%香蕉汁1-10份，5.7g/L瓊脂0.5-5份，30g/L蔗糖10-30份、松花粉5-20份，硅藻粉5-10份。
3.根尖權(quán)利要求2所述的鐵皮石斛根尖組培快速繁育方法，其特征在于，所述的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基由如下重量份的原料組成的:MS培養(yǎng)基100份，0.4mg/L NAA 5.5份，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%香蕉汁1-10份，5.7g/L瓊脂0.5-5份，30g/L蔗糖18份、松花粉12.5份，硅藻粉6份。
4.根尖權(quán)利要求1所述的鐵皮石斛根尖組培快速繁育方法，其特征在于，所述的增殖培養(yǎng)基由如下原料組成的:MS培養(yǎng)基100份，1.0mg/L NAA 1-5份，0.2 mg/L 6-BA0.5-3份，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%馬鈴薯汁1-10份，5.7g/L瓊脂0.5-5份，30g/L蔗糖10-20份，硫脲3-10份。
5.根尖權(quán)利要求4所述的鐵皮石斛根尖組培快速繁育方法，其特征在于，所述的增殖培養(yǎng)基由如下原料組成的:MS培養(yǎng)基100份，1.0mg/L NAA 4份，0.2 mg/L 6-BA 2份，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%馬鈴薯汁6.5份，5.7g/L瓊脂2份，30g/L蔗糖13份，硫脲5.5份。
6.根尖權(quán)利要求1所述的鐵皮石斛根尖組培快速繁育方法，其特征在于，所述的生根培養(yǎng)基由如下原料組成的:MS培養(yǎng)基100份，0.2mg/LNAA 1_5份，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%香蕉汁.1-10份，5.7g/L瓊脂0.5-5份，30g/L蔗糖10-20份，茶樹根粉5-15份。
7.根尖權(quán)利要求6所述的鐵皮石斛根尖組培快速繁育方法，其特征在于，所述的生根培養(yǎng)基由如下原料組成的:MS培養(yǎng)基100份，0.2mg/L NAA 3.5份，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%香蕉汁.4.5份，5.7g/L瓊脂2.5份，30g/L蔗糖15份，茶樹根粉12.5份。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種鐵皮石斛根尖組培快速繁殖的育苗方法，從根尖誘導(dǎo)分化培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)，生根培養(yǎng)后，得到生根苗，煉苗、移栽得到成品苗。本發(fā)明培育的鐵皮石斛種苗繼承了人工選擇植株的優(yōu)良性狀，抗性良好，產(chǎn)量穩(wěn)定，在生產(chǎn)上具有重要推廣價(jià)值。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號】CN104823852
【申請?zhí)枴緾N201510230160
【發(fā)明人】劉開紅
【申請人】長陽勤勞農(nóng)夫農(nóng)產(chǎn)品有限公司
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年5月8日