一種高精度1/2ms(含碳源)培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)?；谱鞣椒?br>【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明公開(kāi)了一種高精度1/2MS(含碳源)培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)?；谱鞣椒?，屬于植物生物技術(shù)領(lǐng)域。更具體地說(shuō)是一種包括有準(zhǔn)確計(jì)算、精確稱量、先少后多地混合、密封、單獨(dú)母液制備、啟封使用等六個(gè)步驟，以期獲得不同批次和批次之間誤差極小的培養(yǎng)基質(zhì)、減少試驗(yàn)誤差的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]植物組織培養(yǎng)技術(shù)或無(wú)土栽培技術(shù)通常需要配制培養(yǎng)基母液，即配制擴(kuò)大一定倍數(shù)、含有各種類型試劑的液體。然而，由于母液含有不同類型試劑，常常分為大量元素、微量元素、鐵鹽和有機(jī)元素四大類，而四大類所擴(kuò)大的倍數(shù)不同，導(dǎo)致藥品使用質(zhì)量不一致，一則容易出現(xiàn)計(jì)算誤差；二則藥品的廠家、質(zhì)量不一致，即使計(jì)算、稱量一致，也會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果；三則由于母液為液體狀態(tài)，在春夏之交季節(jié)，由于氣溫上升以及濕度增大，極其容易導(dǎo)致母液感染細(xì)菌、霉菌，導(dǎo)致母液中呈現(xiàn)不同顏色或出現(xiàn)沉淀的現(xiàn)象，浪費(fèi)了原料；四則會(huì)因稱量者對(duì)容器刻度的認(rèn)知(尤其是微量元素)、儀器精密度的不同而出現(xiàn)較大誤差。
[0003]鑒于母液配制的上述缺點(diǎn)，用常規(guī)的母液配制培養(yǎng)基，常常會(huì)出現(xiàn)因稱量者、藥品、季節(jié)等因素而導(dǎo)致的試驗(yàn)結(jié)果失敗或無(wú)法重復(fù)的現(xiàn)象，極大的影響了運(yùn)用植物組織培養(yǎng)或無(wú)土栽培技術(shù)開(kāi)展試驗(yàn)的進(jìn)程，打擊了試驗(yàn)者的信心。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]一種高精度1/2MS (含碳源)培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)?；谱鞣椒?，其特征在于，所述的方法中包括有準(zhǔn)確計(jì)算、精確稱量、先少后多地混合、密封、單獨(dú)母液制備、啟封使用等六個(gè)步驟。
[0005]根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的六個(gè)步驟具體操作如下:
①準(zhǔn)確計(jì)算:將MS基本培養(yǎng)基所含的17種元素?cái)U(kuò)大1000倍，即鹽酸硫胺素0.1g, 二水鉬酸鈉0.25g，煙酸0.5g，鹽酸吡哆醇0.5g，碘化鉀0.83g，甘氨酸2g，硼酸6.2g，七水硫酸鋅8.6g，四水硫酸錳22.3g，乙二胺四乙酸鈉鐵36.5g，肌醇100g，磷酸二氫鉀85g，七水硫酸鎂185g，二水氯化鈣220g，硝酸銨825g，硝酸鉀950g，綿白糖30000g ；2種元素六水氯化鈷和五水硫酸銅擴(kuò)大10000倍，即各0.25g ；
②精確稱量:按照①中計(jì)算的結(jié)果準(zhǔn)確稱量，尤其是要用萬(wàn)分之一天平準(zhǔn)確稱量各0.25g的六水氯化鈷和五水硫酸銅；
③先少后多地混合:按照量的少多進(jìn)行先后混合，即按照鹽酸硫胺素，二水鉬酸鈉，煙酸，鹽酸吡哆醇，碘化鉀，甘氨酸，硼酸，七水硫酸鋅，四水硫酸錳，乙二胺四乙酸鈉鐵，肌醇，磷酸二氫鉀，七水硫酸鎂，二水氯化鈣，硝酸銨，硝酸鉀、綿白糖的順序混合均勻，共計(jì)32242.78g ；
④密封:將混合后的固體基質(zhì)按照250g每瓶的要求分裝于塑料容器中，并進(jìn)行密封；
⑤單獨(dú)母液制備:六水氯化鈷和五水硫酸銅各稱量0.25g，溶于IL蒸餾水中，配制成10000倍母液；
⑥啟封使用:根據(jù)需要，每IL蒸餾水中加入準(zhǔn)確稱量的上述固體基質(zhì)32.24g，加熱待其完全溶解后加入10PL六水氯化鈷和五水硫酸銅的單獨(dú)母液，進(jìn)而加入其它所需試劑即可。
[0006]本發(fā)明的有益效果:該高精密度培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)?；谱鞣椒ň哂幸韵绿攸c(diǎn)，即不同批次的基質(zhì)之間無(wú)計(jì)算誤差；由于17種試劑都擴(kuò)大了 1000倍，2種試劑擴(kuò)大了 10000倍，不同批次的基質(zhì)之間的稱量誤差極小，精密度高；理論上，由于固體基質(zhì)每次為1000倍的使用量(以每次IL計(jì)算)，即可以配制1000L的上述配方，液體母液每次僅需要ΙΟΟμ?，批次內(nèi)部不會(huì)出現(xiàn)因?yàn)槭褂貌煌瑥S家、不同時(shí)期的試劑而導(dǎo)致的人為誤差；擴(kuò)大后的固體基質(zhì)為每250g密封于一個(gè)塑料容器中，可避免因天氣、溫度、水分等外界因素影響導(dǎo)致出現(xiàn)液體母液常見(jiàn)的沉淀、發(fā)霉等現(xiàn)象，而液體基質(zhì)僅為兩種元素的混合。擴(kuò)大10000倍后精密度高；上述的諸多優(yōu)點(diǎn)都為以該培養(yǎng)基為基質(zhì)開(kāi)展的后續(xù)試驗(yàn)，獲得準(zhǔn)確的試驗(yàn)結(jié)果奠定基礎(chǔ)O O
[0007]【具體實(shí)施方式】:
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的描述。
[0008]本實(shí)施例中一種高精度1/2MS(含碳源)(含碳源和固定介質(zhì))固體培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)?；谱鞣椒?，包括有準(zhǔn)確計(jì)算、精確稱量、先少后多地混合、密封、單獨(dú)母液制備、啟封使用等六個(gè)步驟。
[0009]上述六個(gè)步驟具體操作如下:
①準(zhǔn)確計(jì)算:將MS基本培養(yǎng)基所含的17種元素?cái)U(kuò)大1000倍，即鹽酸硫胺素0.1g, 二水鉬酸鈉0.25g，煙酸0.5g，鹽酸吡哆醇0.5g，碘化鉀0.83g，甘氨酸2g，硼酸6.2g，七水硫酸鋅8.6g，四水硫酸錳22.3g，乙二胺四乙酸鈉鐵36.5g，肌醇100g，磷酸二氫鉀85g，七水硫酸鎂185g，二水氯化鈣220g，硝酸銨825g，硝酸鉀950g，綿白糖30000g ；2種元素六水氯化鈷和五水硫酸銅擴(kuò)大10000倍，即各0.25g ；
②精確稱量:按照①中計(jì)算的結(jié)果準(zhǔn)確稱量，尤其是要用萬(wàn)分之一天平準(zhǔn)確稱量各0.25g的六水氯化鈷和五水硫酸銅；
③先少后多地混合:按照量的少多進(jìn)行先后混合，即按照鹽酸硫胺素，二水鉬酸鈉，煙酸，鹽酸吡哆醇，碘化鉀，甘氨酸，硼酸，七水硫酸鋅，四水硫酸錳，乙二胺四乙酸鈉鐵，肌醇，磷酸二氫鉀，七水硫酸鎂，二水氯化鈣，硝酸銨，硝酸鉀、綿白糖的順序混合均勻，共計(jì)32242.78g ；
④密封:將混合后的固體基質(zhì)按照250g每瓶的要求分裝于塑料容器中，并進(jìn)行密封；
⑤單獨(dú)母液制備:六水氯化鈷和五水硫酸銅各稱量0.25g，溶于IL蒸餾水中，配制成10000倍母液；
⑥啟封使用:根據(jù)需要，每IL蒸餾水中加入準(zhǔn)確稱量的上述固體基質(zhì)32.24g，加熱待其完全溶解后加入10PL六水氯化鈷和五水硫酸銅的單獨(dú)母液，進(jìn)而加入其它所需試劑即可。
[0010]將上述基質(zhì)配制后的IL溶液加入5g的瓊脂粉，進(jìn)而加入Iml的IN的Κ0Η，溶解完全后分裝于30個(gè)200ml的玻璃瓶中，121 °C滅菌20min后。于超凈工作臺(tái)上接種甜葉菊莖段，25°C光照12h條件下培養(yǎng)20d后，生根良好。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種高精度1/2MS(含碳源)培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)?；谱鞣椒?，其特征在于，所述的方法中包括有準(zhǔn)確計(jì)算、精確稱量、先少后多地混合、密封、單獨(dú)母液制備、啟封使用等六個(gè)步驟。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的六個(gè)步驟具體操作如下: ①準(zhǔn)確計(jì)算:將MS基本培養(yǎng)基所含的17種元素?cái)U(kuò)大1000倍，即鹽酸硫胺素0.1g, 二水鉬酸鈉0.25g，煙酸0.5g，鹽酸吡哆醇0.5g，碘化鉀0.83g，甘氨酸2g，硼酸6.2g，七水硫酸鋅8.6g，四水硫酸錳22.3g，乙二胺四乙酸鈉鐵36.5g，肌醇100g，磷酸二氫鉀85g，七水硫酸鎂185g，二水氯化鈣220g，硝酸銨825g，硝酸鉀950g，綿白糖30000g ；2種元素六水氯化鈷和五水硫酸銅擴(kuò)大10000倍，即各0.25g ； ②精確稱量:按照①中計(jì)算的結(jié)果準(zhǔn)確稱量，尤其是要用萬(wàn)分之一天平準(zhǔn)確稱量各0.25g的六水氯化鈷和五水硫酸銅； ③先少后多地混合:按照量的少多進(jìn)行先后混合，即按照鹽酸硫胺素，二水鉬酸鈉，煙酸，鹽酸吡哆醇，碘化鉀，甘氨酸，硼酸，七水硫酸鋅，四水硫酸錳，乙二胺四乙酸鈉鐵，肌醇，磷酸二氫鉀，七水硫酸鎂，二水氯化鈣，硝酸銨，硝酸鉀、綿白糖的順序混合均勻，共計(jì)32242.78g ； ④密封:將混合后的固體基質(zhì)按照250g每瓶的要求分裝于塑料容器中，并進(jìn)行密封； ⑤單獨(dú)母液制備:六水氯化鈷和五水硫酸銅各稱量0.25g，溶于IL蒸餾水中，配制成10000倍母液； ⑥啟封使用:根據(jù)需要，每IL蒸餾水中加入準(zhǔn)確稱量的上述固體基質(zhì)32.24g，加熱待其完全溶解后加入10PL六水氯化鈷和五水硫酸銅的單獨(dú)母液，進(jìn)而加入其它所需試劑即可。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，該高精密度培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)?；谱鞣椒ň哂幸韵绿攸c(diǎn)，即不同批次的基質(zhì)之間無(wú)計(jì)算誤差；由于17種試劑都擴(kuò)大了 1000倍，2種試劑擴(kuò)大了 10000倍，不同批次的基質(zhì)之間的稱量誤差極小，精密度高；理論上，由于固體基質(zhì)每次為1000倍的使用量(以每次IL計(jì)算)，即可以配制1000L的上述配方，液體母液每次僅需要ΙΟΟμ?，批次內(nèi)部不會(huì)出現(xiàn)因?yàn)槭褂貌煌瑥S家、不同時(shí)期的試劑而導(dǎo)致的人為誤差；擴(kuò)大后的固體基質(zhì)為每250g密封于一個(gè)塑料容器中，可避免因天氣、溫度、水分等外界因素影響導(dǎo)致出現(xiàn)液體母液常見(jiàn)的沉淀、發(fā)霉等現(xiàn)象，而液體基質(zhì)僅為兩種元素的混合；擴(kuò)大10000倍后精密度高；上述的諸多優(yōu)點(diǎn)都為以該培養(yǎng)基為基質(zhì)開(kāi)展的后續(xù)試驗(yàn)，獲得準(zhǔn)確的試驗(yàn)結(jié)果奠定基礎(chǔ)。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種高精度1/2MS(含碳源)培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)?；谱鞣椒?，屬于植物生物技術(shù)領(lǐng)域。首先計(jì)算基質(zhì)所含的17種元素?cái)U(kuò)大1000倍后的需求量以及CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O擴(kuò)大10000倍后的需求量；準(zhǔn)確稱取擴(kuò)大后的藥品量；將1000倍的17種元素按照需求量的少多進(jìn)行先后混合、密封；將CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O用1L蒸餾水溶解后備用；根據(jù)需要分別進(jìn)行啟封使用。通過(guò)該方法可制備的基質(zhì)具有精度高、操作方便、快速、應(yīng)用簡(jiǎn)單、不同批次以及批次內(nèi)誤差小的特點(diǎn)，可運(yùn)用于植物組織培養(yǎng)等生物技術(shù)用途。
【IPC分類】A01G31-00, A01H4-00
【公開(kāi)號(hào)】CN104719138
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510082500
【發(fā)明人】錢夕剛
【申請(qǐng)人】錢夕剛
【公開(kāi)日】2015年6月24日
【申請(qǐng)日】2015年2月16日