楸樹組培苗生根培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物培植領(lǐng)域，涉及一種植物組織培養(yǎng)的方法，具體涉及一種楸樹組 培苗生根培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 楸樹（Catalpa bungei C. A. Meyer)，屬紫葳科，梓樹屬，為落葉喬木，在立地較好 的條件下，樹高可達(dá)30m，胸徑達(dá)Im以上。但是在繁殖方面，由于楸樹雌雄花期不遇，往往自 花不育，需人工授粉才能結(jié)實(shí)，結(jié)實(shí)出種率很低，種子發(fā)芽率不高，實(shí)生繁殖較為困難，造成 楸樹資源相對較少。目前多采用根蘗或嫁接方法生產(chǎn)楸樹種苗。隨著對楸樹采伐利用增多， 常規(guī)的繁殖不能滿足生產(chǎn)對良種苗木的需要，致使出現(xiàn)成材比例嚴(yán)重失調(diào)和楸木供不應(yīng)求 的局面，與當(dāng)前快速發(fā)展林業(yè)的形勢不相適應(yīng)。探索快繁繁殖楸樹的方法來促進(jìn)和改善楸 樹繁育和苗木培育狀況成為亟待解決的問題。
[0003] 組織培養(yǎng)是迅速繁殖林木的方法之一，如孟永紅等，在《河北林果研宄》、報(bào)道的 "楸樹植株再生體系的建立"中，篩選出了楸樹不定芽生長及分化的培養(yǎng)基為MS+6 - BA 0? 8mg/L+IBA 0? lmg/L，其最高增殖系數(shù)為5。
[0004] 韓創(chuàng)舉等，在《西北林學(xué)院學(xué)報(bào)》報(bào)道的"楸樹組培技術(shù)研宄"中，對楸樹組培研宄 表明N6+6 - BA I. 5mg/L+NAA 0. 0016mg/L是楸樹的最佳增殖培養(yǎng)基，最高增殖系數(shù)為7. 2， 該配方基本培養(yǎng)基為N6。
[0005] 傅玉蘭等在《技術(shù)開發(fā)》報(bào)道的"楸樹試管叢生芽繼代增殖影響因素的研宄"中，公 開了楸樹叢生芽繼代增殖最適宜培養(yǎng)基配方是MS+BA 4.0mg/L+IBA 0.5mg/L+PVP IOOmg/ L+食糖30g/L，最高增殖系數(shù)為4. 8,且培養(yǎng)周期為35天。
[0006] 以上關(guān)于楸樹增殖培養(yǎng)基的研宄中，激素配比以細(xì)胞分裂素與生長素的組合為 主，且研宄多停留在理論層面，且組培生根苗需要經(jīng)過煉苗后才能進(jìn)行大棚移栽，在工廠化 生產(chǎn)過程中，該步驟耗費(fèi)人工成本大，降低煉苗成本是楸樹組培產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)又一待解決的 難題。
[0007] 中國發(fā)明專利申請CN104054580 A公開了"一種提高楸樹增殖系數(shù)的組織培養(yǎng)方 法"，包括以下步驟（1)無菌培養(yǎng)物的建立；（2)腋芽的誘導(dǎo)；（3)腋芽的增殖；(4)芽苗的生 根培養(yǎng)；（5)煉苗與移栽，五個(gè)步驟，該專利申請最佳腋芽誘導(dǎo)配方為MS+BA 0. 8mg/L+IBA 0? lmg/L ;最佳腋芽增殖配方為MS+BA1. 5mg/L+ZT 0? lmg/L+IAA 0? 2mg/L ;最高增殖系數(shù)為 15,該方法雖然獲得較高的增殖系數(shù)，但其增殖主要通過腋芽誘導(dǎo)和腋芽增殖兩步實(shí)現(xiàn)，若 進(jìn)行工廠化生產(chǎn)，該方法步驟繁瑣，人工成本大，不利于大規(guī)模的工廠化生產(chǎn)。
[0008] 在楸樹工廠化生產(chǎn)過程中，不僅要保證擴(kuò)繁比例，還需確?？捎糜谏N苗比例， 而現(xiàn)有文件報(bào)道大都僅限于理論水平，生根材料需要從擴(kuò)繁苗中篩選，可用于生根種苗比 例極低，難以滿足產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)要求。
[0009] 因此，建立一種操作過程簡單，周期短，增殖系數(shù)穩(wěn)定，成本低，擴(kuò)繁比例和可用于 生根種苗比例均符合楸樹組培產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)即能在短期內(nèi)為生產(chǎn)提供大量正常健康的楸樹 無菌組培苗方法具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題，是提供一種楸樹組培苗生根培養(yǎng)的方法，該培養(yǎng)方法 所得增殖系數(shù)穩(wěn)定，周期短，操作過程簡單，能有效降低人工成本，利于大規(guī)模的工廠化生 產(chǎn)。
[0011] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：
[0012] 一種楸樹組培苗生根培養(yǎng)方法，它按照以下步驟順序進(jìn)行：
[0013] (1)楸樹無菌苗的獲取
[0014] 選取帶芽點(diǎn)的健壯枝條于室內(nèi)進(jìn)行水培，待新芽萌發(fā)出來后切割成2~3cm長的 頂芽或帶腋芽的莖段，剪去葉片留3~5mm葉柄，用75%酒精擦拭外植體表面，用洗衣粉水 浸泡2min，再置于流水下沖洗0. 5~Ih ;在超凈工作臺上，用0. 05%的升采處理6~9min， 用無菌水沖洗5次，接種至培養(yǎng)基A中，每瓶接種2株，獲得楸樹無菌苗；
[0015] (2)無菌苗的繼代
[0016] 選取生長周期為26~30天，生長健壯、葉片濃綠的楸樹無菌苗，利用頂芽、莖段及 基部叢生芽進(jìn)行繁殖，其中頂芽高0. 8~I. 4cm、莖段高0. 5~lcm，至少含一個(gè)腋芽，基部 愈傷組織含2~4個(gè)小芽，繼續(xù)轉(zhuǎn)接至培養(yǎng)基A中，培養(yǎng)26~30天后，即可得用于生根的 楸樹組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)或者用于繼續(xù)繼代的楸樹組培苗；
[0017] (3)楸樹組培苗生根培養(yǎng)
[0018] 選取步驟（2)增殖培養(yǎng)中高度為2. 5~4cm的楸樹組培苗，保留3片以上展開的 大葉，基部葉柄貼莖桿切除，同時(shí)將展開的腋芽切除，切口以下留出Imm的莖桿，接種至生 根培養(yǎng)基中，切口部位沒入培養(yǎng)基B中，培養(yǎng)25~28天，即得楸樹生根苗；所得的楸樹生根 苗的生根率為90~98%。
[0019] (4)煉苗與移栽
[0020] 將楸樹生根苗根系上的培養(yǎng)基洗凈，種植于含有營養(yǎng)基C的營養(yǎng)杯或穴盤中，濕 度為80%~90%，待新根及新葉發(fā)出后接膜通風(fēng)，培養(yǎng)45~60天，即得楸樹大棚生根苗。 所得的楸樹大棚生根苗的成活率為90~95%。
[0021] 作為本發(fā)明的一種限定，所述步驟（2)中的楸樹組培苗的培養(yǎng)條件為：光照和暗 培養(yǎng)交替進(jìn)行，光照培養(yǎng)條件為13小時(shí)光照，光照強(qiáng)度3000勒克斯，溫度為25°C ;暗培養(yǎng) 條件為暗培養(yǎng)11小時(shí)，溫度為20°C。
[0022] 作為本發(fā)明的另一種限定，所述步驟（2)中的培養(yǎng)基A包括：以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基， 添加濃度為30g/L的蔗糖，濃度為5. 8g/L的瓊脂，濃度為0. 05~0. 2mg/L的6 - BA、濃度 為0? 01 ~0?05mg/L 的 TDZ，調(diào)節(jié) pH 為 5. 8~6.0。
[0023] 作為本發(fā)明的第三種限定，所述步驟（3)中的培養(yǎng)基B包括：以MS 1/2為基礎(chǔ)培養(yǎng) 基，添加濃度為0. 3~I. 5mg/L的IBA，15~30g/L蔗糖和濃度為5. 8g/L的瓊脂，pH調(diào)節(jié) 至 5. 5 ~5. 8〇
[0024] 本發(fā)明還有一種限定，所述步驟（4)中的營養(yǎng)基C包括兩層，其中下層2/3容量 為體積比為菜園土：珍珠巖：蛭石：草炭=2 :2 :1 :1混合的營養(yǎng)基，上層1/3為體積比為蛭 石：珍珠巖=1 :1的營養(yǎng)基。
[0025] 由于采用了上述的技術(shù)方案，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，所取得的技術(shù)進(jìn)步在于：
[0026] 采用本發(fā)明所提供的楸樹組培苗生根培養(yǎng)方法，控制擴(kuò)繁比例為1 :3-3. 5,控制 苗的株高為2. 5-4cm后在進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根的比例達(dá)90%以上；降低了生產(chǎn)成本，工廠 化生產(chǎn)的可生根苗數(shù)量與可擴(kuò)繁苗數(shù)量比值應(yīng)大于〇.75。
[0027] 在楸樹組培苗生根培養(yǎng)的過程中無菌苗的獲取和繼代培養(yǎng)使用的是同一種培養(yǎng) 基，節(jié)省了操作步驟和生產(chǎn)成