空泡現(xiàn)象，加強了后續(xù)分子病理操作的實用性；
[0050](3)本發(fā)明提供的心臟組織固定劑對于核酸及蛋白有較高的保護效率，對抗原破壞小，能用于免疫組化、免疫熒光等分子病理學(xué)實驗中對心臟組織的固定；
[0051](4)本發(fā)明制備方法簡單，成本低廉。
【具體實施方式】
[0052]以下所述是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也視為本發(fā)明的保護范圍。
[0053]實施例1
[0054]一種心臟組織固定劑的制備方法，包括以下步驟:
[0055]取重鉻酸鉀溶于水制備質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%的重鉻酸鉀溶液，隨后加入飽和2，4，6-三硝基苯酚溶液(質(zhì)量分?jǐn)?shù)約1.22%)、甲醛(體積分?jǐn)?shù)為40%)和乙酸，混勻，補足余量水，制得心臟組織固定劑，所述固定劑各組分的重量百分比為:
[0056]2,4,6-三硝基苯酚 0.85% ；
[0057]甲醛8.8% ；
[0058]鉻酸0.48% ；
[0059]乙酸5.1% ；
[0060]余量為水。
[0061]實施例2
[0062]一種心臟組織固定劑的制備方法，包括以下步驟:
[0063]取重鉻酸鉀溶于水制備質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%的重鉻酸鉀溶液，隨后加入飽和2，4，6-三硝基苯酚溶液(質(zhì)量分?jǐn)?shù)約1.22%)、甲醛(體積分?jǐn)?shù)為40%)和乙酸，混勻，補足余量水，制得心臟組織固定劑，使得所述固定劑各組分的重量百分比為:
[0064]2,4,6-三硝基苯酚 0.79% ；
[0065]甲醛6.6% ；
[0066]鉻酸0.38% ；
[0067]乙酸4.2% ；
[0068]余量為水。
[0069]實施例3
[0070]一種心臟組織固定劑的制備方法，包括以下步驟:
[0071]取重鉻酸鉀溶于水制備質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%的重鉻酸鉀溶液，隨后加入飽和2，4，6-三硝基苯酚溶液(質(zhì)量分?jǐn)?shù)約1.22%)、甲醛和乙酸，混勻，補足余量水，制得心臟組織固定劑，使得所述固定劑各組分的重量百分比為:
[0072]2,4,6-三硝基苯酚 0.92% ；
[0073]甲醒11%;
[0074]鉻酸0.58% ；
[0075]乙酸6.8% ；
[0076]余量為水。
[0077]實施例4
[0078]一種心臟組織固定劑的制備方法，包括以下步驟:
[0079]取重鉻酸鉀溶于水制備質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%的重鉻酸鉀溶液，隨后加入飽和2，4，6-三硝基苯酚溶液(質(zhì)量分?jǐn)?shù)約1.22%)、甲醛和乙酸，混勻，補足余量水，制得心臟組織固定劑，使得所述固定劑各組分的重量百分比為:
[0080]2,4,6-三硝基苯酚 0.92% ；
[0081]甲醛8.8%;
[0082]鉻酸0.58% ；
[0083]乙酸5.1% ；
[0084]余量為水。
[0085]實施例5
[0086]采用實施例1制得的心臟組織固定劑用于成年清潔級昆明雄鼠心臟的固定，包括以下步驟:
[0087]1.取材
[0088]取健康成年清潔級昆明鼠，雄性體重(30 ±2) g，頸椎脫白法處死，打開胸腔，剪取心臟。
[0089]2.固定
[0090]將心臟用生理鹽水組織洗一下，立即投入固定劑中固定，室溫固定12-18h。
[0091]3.洗滌
[0092]從固定劑中取出組織浸入50%?70%乙醇3次，5mim/次。
[0093]4.脫水
[0094]30%、50%、70%、80%、90%各級乙醇溶液脫水各30min，放入95%、100%各兩面三次，每次 20min。
[0095]5.透明
[0096]浸入純酒精、二甲苯1:1等量混合液:15min,再放入二甲苯中30min。
[0097]6.透蠟
[0098]放入二甲苯、石臘等量混合液:15min,再放入石臘1、石臘II透臘各30min。
[0099]7.包埋
[0100]將經(jīng)過透蠟的組織連同熔化的石蠟，一起倒入容器內(nèi)，然后立即投入冷水中，使其立刻凝固成蠟塊，常溫干燥保存?zhèn)溆谩?br>[0101]8.石蠟切片
[0102]I)將已固定和修好的石蠟塊臺木裝在切片機的夾物臺上。
[0103]2)將切片刀固定在刀夾上，刀口向上。
[0104]3)調(diào)整石蠟塊與刀口之間的角度與位置，刀片與石蠟切片約成15度左右。
[0105]4)調(diào)整厚度調(diào)節(jié)器到所需的切片厚度，一般為4?10微米。
[0106]5)開始切片:此右手搖動轉(zhuǎn)輪，讓蠟塊切成蠟帶，左手持毛筆將蠟帶提起，搖轉(zhuǎn)速度通常為40?50r/min。
[0107]6)用單面刀片切取蠟片一小段，放在載玻上加水一滴，置于放大鏡或顯微鏡下觀察切片是否良好，如良好則進行貼片。
[0108]7)貼片
[0109]①取一片清潔的載玻片，滴一滴粘片劑于玻片中央，然后用洗凈的手指加以涂抹，便成均勻薄層。
[0110]②滴I?2滴的蒸餾水已涂粘片劑的載玻片上。
[0111]③用小鑷子夾取預(yù)先用刀片割開的蠟帶，放在水面上，注意蠟片光亮平整的一面貼于玻片上，并使之處于稍偏玻片的一端，另一端便于粘貼標(biāo)簽。
[0112]④把玻片擺好片位置，放置于預(yù)先加熱的展片臺上(溫度保持在40?45°C )。此時蠟片因受熱而伸展攤平。
[0113]⑤展片后把載玻片放在平盤上編好記號置于37°C溫箱烘干，一晝夜干燥后即可取出存放于切片盒。
[0114]9.將所得切片用于免疫組化，原位雜交，HE染色等分子病理、組織觀察實驗。
[0115]本發(fā)明中的“h”表示小時，“min”表示分鐘。
[0116]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1.一種心臟組織固定劑，其特征在于，該心臟組織固定劑含有2，4，6-三硝基苯酚、甲醛、鉻酸和乙酸； 所述心臟組織固定劑各組分的重量百分比為: 2,4,6-三硝基苯酚0.79%?0.92% ； 甲醛6.6%?11% ；鉻酸 0.38% ?0.58% ； 乙酸4.2%?6.8% ； 余量為水。
2.如權(quán)利要求1所述的心臟組織固定劑，其特征在于，所述心臟組織固定劑各組分的重量百分比為: 2，4，6-三硝基苯酚0.85%; 甲醛8.8% ； 鉻酸0.48% ； 乙酸 5.1% ； 余量為水。
3.如權(quán)利要求1所述的心臟組織固定劑的制備方法，其特征在于，取鉻酸鹽或重鉻酸鉀溶于水，再加入2，4，6_三硝基苯酚、甲醛和乙酸，得到所述心臟組織固定劑。
4.如權(quán)利要求1所述的心臟組織固定劑在制備組織切片、免疫組化、原位雜交或蘇木素-伊紅染色中的應(yīng)用。
5.如權(quán)利要求1所述的心臟組織固定劑在制備小鼠心臟組織石蠟切片中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種心臟組織固定劑，含有2，4，6-三硝基苯酚、甲醛、鉻酸和乙酸，所述固定劑各組分的重量百分比為：2，4，6-三硝基苯酚0.79%～0.92%；甲醛6.6%～11%；鉻酸0.38%～0.58%；乙酸4.2%～6.8%；余量為水。該心臟組織固定劑對房室隔膜等膜性結(jié)構(gòu)有快速滲透作用，能快速滲透定型，可兼顧心臟組織核酸、蛋白的保護以及組織形態(tài)上的保存；該心臟組織固定劑還可使心臟組織保持適當(dāng)?shù)挠捕?，易獲得完整連續(xù)的切片，便于后續(xù)進行分子病理實驗；此外，該心臟組織固定劑對抗原破壞小，不影響后續(xù)的免疫組化病理實驗。本發(fā)明還提供了一種心臟組織固定劑的制備方法和應(yīng)用。
【IPC分類】A01N1-00, G01N1-28, A01N1-02
【公開號】CN104663647
【申請?zhí)枴緾N201310616070
【發(fā)明人】萬曉春, 王蒲, 唐超, 鄒軍輝
【申請人】深圳先進技術(shù)研究院
【公開日】2015年6月3日
【申請日】2013年11月27日