專利名稱：彩色馬蹄蓮微型種球大規(guī)?？旆狈椒?br> 技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及彩色馬蹄蓮微型種球的繁殖方法，特別是采用工廠化大規(guī)模生產(chǎn)的快速繁殖方法。
近年來，試管成球技術(shù)研究越來越受到重視，但只有馬鈴薯試管成球技術(shù)在規(guī)?；a(chǎn)上應(yīng)用比較成功。我國目前已有8個(gè)單位從事馬鈴薯種球研究工作。美國、蘇聯(lián)、荷蘭、比利時(shí)、法國等國都利用這種成球技術(shù)生產(chǎn)出大量高質(zhì)量的試管種球，形成馬鈴薯微型薯產(chǎn)業(yè)，已獲得了較高的經(jīng)濟(jì)效益。國內(nèi)外與馬鈴薯微型薯有關(guān)的專利就有近百個(gè)，但球根花卉方面，有關(guān)種球誘導(dǎo)的專利相當(dāng)少。而馬蹄蓮試管成球方面的專利還未見報(bào)道。
彩色馬蹄蓮是近幾年才興起的新切花品種，在新西蘭、荷蘭等國，馬蹄蓮產(chǎn)業(yè)十分發(fā)達(dá)。傳統(tǒng)的馬蹄蓮繁殖方法是分栽小球莖，這種方法繁殖速度相當(dāng)慢，目前馬蹄蓮繁殖的主要方式是組培快繁試管苗，但這種方法費(fèi)地、費(fèi)工、費(fèi)時(shí)，遠(yuǎn)距離運(yùn)輸也極為不便。
本發(fā)明的目的是提供一種方法，能大規(guī)?？焖俚统杀具M(jìn)行工廠化彩色馬蹄蓮微型種球的生產(chǎn)。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的首先對(duì)彩色馬蹄蓮進(jìn)行試管苗快繁，然后對(duì)試管苗進(jìn)行微型種球誘導(dǎo)。
試管苗決繁過程包括A.彩色馬蹄蓮?fù)庵搀w采集選擇生長(zhǎng)健壯無病蟲害的植株，取其種球，刮去污染或損傷部位，切成0.1-1.5cm2大小芽塊，然后流水沖洗。
B.外植體消毒、接種消毒采取二次消毒法。第一次依次用75％酒精，0.1％新潔爾滅，0.1％升汞消毒，最后用無菌水沖洗；第二次消毒步驟不變，但時(shí)間稍縮短，最后用無菌水沖洗后接種，培養(yǎng)基為MS+BA0.1-10.0ppm+NAA0.01-5.0ppm。
C.叢生芽的產(chǎn)生及試管苗繼代在MS培養(yǎng)基上接種2-4個(gè)月后，產(chǎn)生叢生芽。將叢生芽分單芽轉(zhuǎn)接，芽叢可每月繼代1次。
微型種球誘導(dǎo)過程包括A.試管誘導(dǎo)成球選擇高2cm以上，莖粗0.2cm以上健壯試管苗作為微型種球生產(chǎn)的原材料，將試管苗接入含MS-BA0.1-10.0ppm+多效唑0.0-10.0ppm的液體培養(yǎng)基中，靜置培養(yǎng)2-3月，即可形成5-15mm直徑的微型種球。
B.環(huán)境因子脅迫成球?qū)⑶o粗0.2cm以上試管苗，直接移栽到營(yíng)養(yǎng)缽中，緩苗20-30天。根據(jù)所處的季節(jié)選擇高溫誘導(dǎo)或是低溫誘導(dǎo)。在5-10℃低溫條件下或26-32℃高溫條件下處理2-3月。幼苗的地上部分全部或部分枯萎后，即可將營(yíng)養(yǎng)缽中的種球挖出進(jìn)行貯藏。
C.激素脅迫成球?qū)⑶o粗0.2cm以上試管苗，直接移栽到營(yíng)養(yǎng)缽中，緩苗20天-30天。在25±2℃環(huán)境條件下，ABA0.5-10.0ppm每周葉面噴施2次，持續(xù)2-3月直至幼苗地上部分全部或部分枯萎，即可將土缽中的種球挖出進(jìn)行貯藏。
上述試管苗快繁過程中，外植體最佳取樣時(shí)間為4月或12月，培養(yǎng)基最佳配方為MS+BA0.5ppm+NAA0.2ppm，所需環(huán)境因子為溫度25±2℃，每天光照8-14小時(shí)，其中12小時(shí)最佳，光照強(qiáng)度為4000LX以上。
上述微型種球誘導(dǎo)過程中，試管誘導(dǎo)成球所需的培養(yǎng)基配方為MS+BA0.5ppm+多效唑6.0ppm，PH5.8。所需環(huán)境因子為溫度28±2℃，適當(dāng)暗培養(yǎng)，光照強(qiáng)度100-600LX，最佳為200-400LX。
上述微型種球誘導(dǎo)過程中，環(huán)境脅迫成球所需的脅迫溫度為低溫脅迫所需最佳溫度為5℃；高溫脅迫所需最佳溫度為29℃。
上述微型種球誘導(dǎo)過程中，激素脅迫成球所需的最佳條件為ABA2.0ppm葉面噴施，每周2次。
本發(fā)明首先對(duì)彩色馬蹄蓮進(jìn)行試管苗快繁，然后進(jìn)行種球誘導(dǎo)，從而逾越了移栽環(huán)節(jié)，既節(jié)省土地，又省去移栽和成球的田間管理，從而降低成本；本發(fā)明成球周期2-3月，如果進(jìn)行周年生產(chǎn)，每年可進(jìn)行4-6次，每瓶一次轉(zhuǎn)8-12株苗，按90％結(jié)球率計(jì)算，則每瓶可年產(chǎn)40-60個(gè)球，一個(gè)占地約0.5平米的五層培養(yǎng)架可年產(chǎn)種球2-3萬個(gè)，故本發(fā)明繁殖速度快，效益高，可進(jìn)行大規(guī)模工廠化生產(chǎn)；本發(fā)明的種球便于儲(chǔ)藏和運(yùn)輸，降低銷售過程中的銷售成本，種球移栽簡(jiǎn)單易行，便于推廣種植；本發(fā)明種球誘導(dǎo)是在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行的，液體培養(yǎng)不需瓊脂，故節(jié)省了開支，液體培養(yǎng)還比固體培養(yǎng)結(jié)球早，同樣面積容納植株數(shù)多，液體培養(yǎng)基還有配制容易、補(bǔ)加營(yíng)養(yǎng)液方便等特點(diǎn)；本發(fā)明在簡(jiǎn)易組織培養(yǎng)條件下就可進(jìn)行，操作簡(jiǎn)單，只需一般技術(shù)工人就可操作。
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明第一步彩色馬蹄蓮試管苗組培快繁體系的建立在4月初，在健壯苗上采集帶芽的種球，用刀片刮去污染或損傷部位，切成0.1-1.5cm大小的帶芽塊，莖尖留0.2-0.5cm，流水沖洗3小時(shí)。消毒采取二次消毒法第一次用75％酒精3分鐘，0.1％新潔爾滅7分鐘，0.1％升汞3分鐘，無菌水沖洗3遍。第二次消毒劑不變，但時(shí)間長(zhǎng)短稍有調(diào)整。最后用無菌水沖洗5遍后接種。
將消毒后的外植體接種在MS培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基組分為
1)MS+BA 0.1ppm+NAA0.05ppm，2)MS+BA 0.5ppm+NAA0.2ppm，3)MS+BA 2.0ppm+NAA1.0ppm，這三種培養(yǎng)基中，瓊脂6.5g/l，蔗糖3％，PH5.8。每100ml三角瓶倒40ml培養(yǎng)基，每瓶接種5個(gè)外植體，外界環(huán)境因子為25±2℃，光照每日12小時(shí)(6000LX)。結(jié)果1號(hào)和3號(hào)培養(yǎng)基外植體接種6月后出現(xiàn)叢生芽，2號(hào)培養(yǎng)基4月后出現(xiàn)叢生芽。(說明2號(hào)培養(yǎng)基最適合彩色馬蹄蓮?fù)庵搀w分化)。將叢生小芽分單芽轉(zhuǎn)接，每月繼代1次。此期間必須有充足光照(4000LX)以避免試管苗徒長(zhǎng)。此外，在培養(yǎng)基中加入2.0ppm多效唑，壯苗效果非常好，在弱光下也可使試管苗粗增長(zhǎng)1倍。
第二步微型種球的誘導(dǎo)1.試管誘導(dǎo)成球選擇高2cm以上，莖粗0.2cm以上健壯試管苗，接種在液體培養(yǎng)基中，每瓶8-12株苗，確保每株試管苗都直立在液體培養(yǎng)基中。培養(yǎng)基組分為MS+BA0.5ppm+多效唑6.0ppm，蔗糖為6％，PH5.8。培養(yǎng)基液體和固體均可成球，但液體培養(yǎng)基成本低，且成球率和成球大小都明顯優(yōu)于固體培養(yǎng)基。將接種后的三角瓶移入溫度28±2℃，適當(dāng)暗培養(yǎng)條件下，即光照強(qiáng)度400LX，靜置培養(yǎng)2周后就可以觀察到試管苗莖基有膨大現(xiàn)象。2-3月后就可形成5-15mm直徑的微型小球，成球率達(dá)90％以上。莖上部則由于養(yǎng)分回流而慢慢枯死。
上述其他條件不變，BA濃度改變當(dāng)BA為2.0ppm時(shí)，成球率86.5％； BA為3.0時(shí)，成球率為90.6％ppm；當(dāng)BA為4.0ppm時(shí)，成球率為88.3％；當(dāng)BA為5.0ppm時(shí)，成球率為86.5％。
假設(shè)每培養(yǎng)瓶放10棵苗，按90％成活率，一周期可產(chǎn)9球，一個(gè)五層培養(yǎng)架(每層125×45cm2，可放133瓶)可放665瓶，則一個(gè)培養(yǎng)架1周期可產(chǎn)約6000個(gè)球，年產(chǎn)2-3萬個(gè)球，且一個(gè)培養(yǎng)架只占地1.25×0.45＝0.56cm2。
2.環(huán)境脅迫成球選擇高2cm，莖粗0.2cm以上健壯試管苗，消毒處理后直接移栽到口徑10cm的營(yíng)養(yǎng)缽中，25±2℃條件下緩苗20天。緩苗期注意保持濕度。根據(jù)所處的季節(jié)選擇高溫誘導(dǎo)或是低溫誘導(dǎo)。在5-10℃低溫條件下或28-32℃高溫條件下處理2-3個(gè)月。幼苗的地上部分完全枯萎后，將營(yíng)養(yǎng)缽中的種球挖出進(jìn)行貯藏。
3.激素脅迫成球選擇苗高2cm以上，莖粗0.2cm以上健壯試管苗，消毒處理后直接移栽到口徑10cm的營(yíng)養(yǎng)缽中，緩苗20天。25±2℃環(huán)境條件下，ABA2.0ppm每周葉面噴施2次，持續(xù)2-3個(gè)月至幼苗地上部分養(yǎng)分完全回流，將營(yíng)養(yǎng)缽中的種球挖出進(jìn)行貯藏。
小球儲(chǔ)藏一般用冰箱保存，即將收獲后的微型種球在室溫條件下晾干，然后裝于布袋中，貯于4℃條件下，1月后即可種植。
權(quán)利要求
1.彩色馬蹄蓮微型種球大規(guī)模快繁方法，其特征在于首先對(duì)彩色馬蹄蓮進(jìn)行試管苗快繁，然后對(duì)試管苗進(jìn)行微型種球誘導(dǎo)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的彩色馬蹄蓮微型種球大規(guī)?？旆狈椒?，其特征在于所述的試管苗快繁過程包括A.彩色馬蹄蓮?fù)庵搀w采集選擇生長(zhǎng)健壯無病蟲害的植株，取其種球，刮去污染或損傷部位，切成0.1-1.5cm2大小芽塊，然后流水沖洗。B.外植體消毒、接種消毒采取二次消毒法。第一次依次用75％酒精，0.1％新潔爾滅，0.1％升汞消毒，最后用無菌水沖洗；第二次消毒步驟不變，但時(shí)間稍縮短，最后用無菌水沖洗后接種，培養(yǎng)基為MS+BA0.1-10.0ppm+NAA0.01-5.0ppm。C.叢生芽的產(chǎn)生及試管苗繼代在MS培養(yǎng)基上接種2-4個(gè)月后，產(chǎn)生叢生芽。將叢生芽分單芽轉(zhuǎn)接，芽叢可每月繼代1次。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的彩色馬蹄蓮微型種球大規(guī)?？旆狈椒ǎ涮卣髟谟谒龅奈⑿头N球誘導(dǎo)過程為試管誘導(dǎo)成球過程選擇高2cm以上，莖粗0.2cm以上健壯試管苗作為微型種球生產(chǎn)的原材料，將試管苗接入含MS-BA0.1-10.0ppm+多效唑0.0-10.0ppm的液體培養(yǎng)基中，靜置培養(yǎng)2-3月，即可形成5-15mm直徑的微型種球。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的彩色馬蹄蓮微型種球大規(guī)模快繁方法，其特征在于所述的微型種球誘導(dǎo)過程為環(huán)境因子脅迫成球過程將莖粗0.2cm以上試管苗，直接移栽到營(yíng)養(yǎng)缽中，緩苗20-30天。根據(jù)所處的季節(jié)選擇高溫誘導(dǎo)或是低溫誘導(dǎo)。在5-10℃低溫條件下或26-32℃高溫條件下處理2-3月。幼苗的地上部分全部或部分枯萎后，即可將營(yíng)養(yǎng)缽中的種球挖出進(jìn)行貯藏。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的彩色馬蹄蓮微型種球大規(guī)模快繁方法，其特征在于所述的微型種球誘導(dǎo)過程為激素脅迫成球過程將莖粗0.2cm以上試管苗，直接移栽到營(yíng)養(yǎng)缽中，緩苗20天-30天。在25±2℃環(huán)境條件下，ABA0.5-10ppm每周葉面噴施2次，持續(xù)2-3月直至幼苗地上部分完全或部分枯萎，即可將營(yíng)養(yǎng)缽中的種球挖出進(jìn)行貯藏。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的彩色馬蹄蓮微型種球大規(guī)模快繁方法，其特征在于所述的試管苗快繁過程中，外植體取樣最佳時(shí)間為4月或12月，培養(yǎng)基最佳配方為Ms+BA0.5ppm+NAA0.2ppm，所需環(huán)境因子為溫度25±2℃，每天光照8-14小時(shí)，其中12小時(shí)最佳，光照強(qiáng)度為4000LX以上。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的彩色馬蹄蓮微型種球大規(guī)模快繁方法，其特征在于所述的微型種球誘導(dǎo)過程中，試管誘導(dǎo)成球所需培養(yǎng)基最佳配方為Ms+BA0.5ppm+多效唑6.0ppm，PH5.8。所需環(huán)境因子為溫度28±2℃，適當(dāng)暗培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為100-600LX，最佳為200-400LX。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的彩色馬蹄蓮微型種球大規(guī)模快繁方法，其特征在于所述的微型種球誘導(dǎo)過程中，環(huán)境脅迫成球所需的脅迫溫度為低溫脅迫所需最佳溫度為5℃；高溫脅迫所需最佳溫度為29℃。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的彩色馬蹄蓮微型種球大規(guī)模快繁方法，其特征在于所述的微型種球誘導(dǎo)過程中，激素脅迫成球所需的最佳條件為ABA2.0ppm葉面噴施，每周2次。
全文摘要
本發(fā)明涉及彩色馬蹄蓮微型種球工廠化大規(guī)模生產(chǎn)的快速繁殖方法,即首先對(duì)彩色馬蹄蓮進(jìn)行試管苗快繁,然后進(jìn)行種球誘導(dǎo),從而逾越了移栽環(huán)節(jié),使得本發(fā)明繁殖速度快,效益高,可進(jìn)行大規(guī)模工廠化生產(chǎn),同時(shí),本發(fā)明所得的種球便于貯藏和運(yùn)輸,降低銷售過程中的銷售成本,種球移栽簡(jiǎn)單易行,便于推廣種植。
文檔編號(hào)A01H4/00GK1275315SQ99107899
公開日2000年12月6日 申請(qǐng)日期1999年6月1日 優(yōu)先權(quán)日1999年6月1日
發(fā)明者李榮旗, 張?zhí)扃? 王玉忠, 林翔鷹 申請(qǐng)人:北京錦繡大地農(nóng)業(yè)股份有限公司