專利名稱：蘆薈的組織培養(yǎng)繁殖方法以及所使用的培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蘆薈的組織培養(yǎng)繁殖方法以及所使用的培養(yǎng)基。
蘆薈(Aloe Liliaceae)又名油蔥、龍角、狼牙掌，是百合科蘆薈屬常綠肉質(zhì)多漿植物?？茖W(xué)研究證明它含有蘆薈甙、蛋白質(zhì)、20種氨基酸、多種維生素、大黃素、活性酶和微量元素100余種成分，能治療腸、胃病、高血壓、糖尿病、心臟病、肝炎、腎病、感冒、哮喘、便秘癌癥，外用能治療燙傷、燒傷、刀傷、扭傷、凍傷、腳癬、神經(jīng)皮炎、痔瘡、皸裂、濕疹、牙病、鼻炎、蚊蟲叮咬、痱子等，在日化工業(yè)上又是“天然的化妝品，”具有防曬、護(hù)膚、養(yǎng)顏，除雀斑皺紋等作用，高級(jí)化妝品中80％含有蘆薈的成分。近幾年來，蘆薈所具有的神奇藥用價(jià)值及工業(yè)用途越來越引起人們的興趣，被稱為“植物保健美容醫(yī)師”。
蘆薈雖有強(qiáng)大的生命力，但自身不能繁殖，只能靠分株和扦插，因此如果采植物組織培養(yǎng)的方法來繁殖蘆薈，進(jìn)行工廠化育苗，將會(huì)大大地加快蘆薈的生產(chǎn)周期，產(chǎn)生更大的效益。
植物組織培養(yǎng)技術(shù)是利用細(xì)胞的全能性(即每一個(gè)細(xì)胞都潛在著發(fā)育成新個(gè)體的能力)，采取植物體上的細(xì)胞團(tuán)或一塊組織，通過人工配制不同營(yíng)養(yǎng)成分和激素調(diào)控，使這些組織形成成千上萬個(gè)植株并且保存了母體內(nèi)全部?jī)?yōu)良性狀，這種方法可在短時(shí)間內(nèi)獲得大量試管苗，可在車間內(nèi)流水作業(yè)進(jìn)行，因而稱為工廠化生產(chǎn)。由于生產(chǎn)幼苗是在試管內(nèi)進(jìn)行并擺放在有光照條件的恒溫房間內(nèi)，四季皆可進(jìn)行，可在極少的面積內(nèi)進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)，因而不占用土地，大大降低了成本。
然而，用組織培養(yǎng)方法繁殖蘆薈難度較大，由于蘆薈含酚類醌類物質(zhì)多，很易氧化變褐，使培養(yǎng)基褐化從而影響分化率，故組培效果很難令人滿意。針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種可以快速、大規(guī)模繁殖蘆薈的組織培養(yǎng)方法。經(jīng)計(jì)算機(jī)檢索，未發(fā)現(xiàn)有關(guān)于蘆薈組織培養(yǎng)繁殖方法的報(bào)導(dǎo)。
本發(fā)明提供蘆薈，尤其是美國(guó)庫(kù)拉索蘆薈(A.barbadersis)和日本木立蘆薈(A.arborescens)的組織培養(yǎng)方法，包括以下步驟1、誘導(dǎo)及分化利用胚狀體組培途徑進(jìn)行誘導(dǎo)。將蘆薈的分生組織，接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基為MS常規(guī)基本培養(yǎng)基(Marashige & Skoog培養(yǎng)基，以下簡(jiǎn)稱MS)，其中加入了6-芐基嘌呤0.5-5毫克/升，最好為0.5-3毫克/升、6-糠基嘌呤(激動(dòng)素)0.5-5毫克/升，最好為0.5-3毫升、2，4-二氯苯氧乙酸0.1-2毫克/升，最好為0.1-1毫克/升、萘乙酸0.1-2毫克/升，最好為0.1-1毫克/升，另外該培養(yǎng)基還含有維生素C1-2毫克以及蔗糖30-60克，最好為40-50克/升。培養(yǎng)約60-80天后，小苗長(zhǎng)至常規(guī)生根程序所需高度時(shí)，進(jìn)入下一步。
2、生根將第一步所得小苗齊根取下，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基與上述的誘導(dǎo)及分化培養(yǎng)基相同，只是沒有加入維生素，但加入了活性炭0.1-0.5克，且加入了吲哚丁酸為0.1-0.5毫克/升，最好為0.1-0.2毫克/升。20-30天后，小苗基部開始出現(xiàn)白色短根并很快長(zhǎng)出完整根系，即可按常規(guī)方法移栽長(zhǎng)成正常蘆薈植株。
本發(fā)明的特點(diǎn)在于通過胚狀體途徑進(jìn)行誘導(dǎo)，效果很好，另外，在分化過程中普通組織培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基蔗糖濃度為30克，我們大大提高了蔗糖濃度，并針對(duì)培養(yǎng)基褐化加入了維生素C。比較高的蔗糖濃度可為高頻率分化提供更多的營(yíng)養(yǎng)，并增加培養(yǎng)基對(duì)培養(yǎng)物的滲透壓，從而使培養(yǎng)基的激素更好的作用于細(xì)胞內(nèi)部；Vc的使用可以防止細(xì)胞在培養(yǎng)過程中褐化。在生根培養(yǎng)基中，可在上述范圍內(nèi)大大提高萘乙酸的含量，這樣可更好地促進(jìn)生根。
此發(fā)明的培養(yǎng)基有如下優(yōu)點(diǎn)啟動(dòng)早、出苗快，同步性好，分化頻率高，苗齊壯，生長(zhǎng)良好。
實(shí)施例1.
1.取材取日本木立蘆薈上端或吸芽。
2.材料消毒方法取下的材料在流水中沖洗5分鐘后浸泡30秒，然后放入0.1％升汞溶液中消毒15分鐘(在超凈工作臺(tái)上用無菌水沖洗3-4次后濾紙吸干水分)。
3.接種在超凈工作臺(tái)上，用常規(guī)無菌操作方法將滅菌后材料中心部分(生長(zhǎng)點(diǎn)及附近組織)切成小拇指大小，沿原生長(zhǎng)方向插入培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基為MS+6-BA 2mg/L+KT 2mg/L+NAA 0.1mg/L+2.4-D 0.1mg/L+Vc2mg/L+蔗糖45克/L，培養(yǎng)溫度25℃±2℃，光照強(qiáng)度為1500-2000Lux。
4.分化20天后可見小芽萌發(fā)，長(zhǎng)出小苗繼代三次，約60天，小苗可長(zhǎng)至3公分高。
5.生根，把小苗轉(zhuǎn)至MS+IBA 0.2mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30克，2克活性炭，約20天后，下端長(zhǎng)出白色小根。
6.移栽當(dāng)試管苗長(zhǎng)至具完整的根，苗時(shí)，將其移栽于含有1/2草炭土和1/2蛭石的基質(zhì)中。
移栽方法將試管口打開，在常溫下敞開瓶口24小時(shí)，用長(zhǎng)把鑷子將苗從試管中小心取出，用自來水洗去沾在根上的瓊脂培養(yǎng)基，將移栽基質(zhì)放入花盆中，將小苗小心栽入盆中，澆透水后覆蓋塑料薄膜24小時(shí)后打開塑料薄膜，換氣2小時(shí)，以后每天延長(zhǎng)打開塑料膜的時(shí)間，直至完全不覆蓋為止，根據(jù)當(dāng)?shù)乜諝鉁囟群蜐穸?，適當(dāng)延長(zhǎng)或減少覆蓋時(shí)間，等幼苗確實(shí)完全成活后，按常規(guī)量施一些鉀肥和氮肥，保證苗壯、苗齊.，我們?cè)诒緦?shí)驗(yàn)室及京郊順義農(nóng)業(yè)示范基地各移栽了100株日本木立蘆薈小苗，成活株數(shù)分別81株和83株，成活率達(dá)80％以上。實(shí)施例二取美國(guó)庫(kù)拉索蘆薈，按實(shí)施例一相同方法進(jìn)行培養(yǎng)和移栽，其結(jié)果也得到了健壯的蘆薈苗。我們?cè)诒緦?shí)驗(yàn)室及京順義農(nóng)業(yè)示范基地各移栽了100株美國(guó)庫(kù)拉索蘆薈小苗，成活株數(shù)分別為87株和84株，成活率均達(dá)80％以上。
權(quán)利要求
1.一種蘆薈的組織培養(yǎng)繁殖方法，包括下述步驟a.將蘆薈的分生組織接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，該誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS常規(guī)基本培養(yǎng)基，其中加入了6-芐基嘌呤0.5-5毫克/升、6-糠基嘌呤(激動(dòng)素)0.5-5毫克/升、2，4-二氯苯氧乙酸0.1-2毫克/升、萘乙酸0.1-2毫克/升，另外該培養(yǎng)基還含有維生素C1-2毫克以及蔗糖30-60克；將分生組織在此培養(yǎng)基上培養(yǎng)60-80天；b.將上述步驟中所得小苗齊根剪除，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基與上述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基相同，只是沒有加入維生素，但加入了活性炭0.1-0.5克，且加入了吲哚丁酸為0.1-0.5毫克/升；20-30天后，小苗基部開始出現(xiàn)白色短根并長(zhǎng)出完整根系，按常規(guī)方法移栽長(zhǎng)成正常蘆薈植株。
2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述的蘆薈是美國(guó)庫(kù)拉索蘆薈(A.barbadersis)或者日本木立蘆薈(A.arborescens)。
3.按照權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中6-芐基嘌呤為0.5-3毫克/升、6-糠基嘌呤(激動(dòng)素)為0.5-3毫升、2，4-二氯苯氧乙酸為0.1-1毫克/升、萘乙酸為0.1-1毫克/升，蔗糖為40-50克/升；所述的生根培養(yǎng)基中吲哚丁酸為0.1-0.2毫克/升。
4.一種用于蘆薈的組織培養(yǎng)繁殖方法的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基為MS常規(guī)基本培養(yǎng)基，其中加入了6-芐基嘌呤0.5-5毫克/升、6-糠基嘌呤(激動(dòng)素)0.5-5毫克/升、2，4-二氯苯氧乙酸0.1-2毫克/升、萘乙酸0.1-2毫克/升，另外該培養(yǎng)基還含有維生素C1-2毫克以及蔗糖30-60克。
5.按照權(quán)利要求4所述的培養(yǎng)基，其中，6-芐基嘌呤為0.5-3毫克/升、6-糠基嘌呤(激動(dòng)素)為0.5-3毫升、2，4-二氯苯氧乙酸為0.1-1毫克/升、萘乙酸為0.1-1毫克/升，蔗糖為40-50克/升。
6.按照權(quán)利要求4所述的培養(yǎng)基，其中，所述的蘆薈是美國(guó)庫(kù)拉索蘆薈(A.barbadersis)或者日本木立蘆薈(A.arborescens)。
7.一種用于蘆薈的組織培養(yǎng)繁殖方法的生根培養(yǎng)基，其組成與權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基相同，只是沒有加入維生素，但加入了活性炭0.1-0.5克，且加入了吲哚丁酸為0.1-0.5毫克/升。
8.按照權(quán)利要求7所述的生根培養(yǎng)基，其中，吲哚丁酸為0.1-0.2毫克/升。
9.按照權(quán)利要求7所述的生根培養(yǎng)基，其中，所述的蘆薈是美國(guó)庫(kù)拉索蘆薈(A.barbadersis)或者日本木立蘆薈(A.arborescens)。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種蘆薈的組織培養(yǎng)繁殖方法以及所使用的培養(yǎng)基,該方法包括:a.將蘆薈的分生組織接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上;將分生組織在此培養(yǎng)基上培養(yǎng)60—80天;b.將上述步驟中所得小苗齊根剪除,轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中;20—30天后,小苗基部開始出現(xiàn)白色短根并長(zhǎng)出完整根系,按常規(guī)方法移栽長(zhǎng)成正常蘆薈植株。
文檔編號(hào)A01H4/00GK1276423SQ9910792
公開日2000年12月13日 申請(qǐng)日期1999年6月2日 優(yōu)先權(quán)日1999年6月2日
發(fā)明者劉敏, 薛淮, 張純花, 陳宇紅 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院遺傳研究所