專利名稱：酶法解離紫菜葉狀體細(xì)胞育苗方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開了一種酶法解離紫菜葉狀體細(xì)胞育苗方法，屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域。主要用于培育紫菜幼苗供海上養(yǎng)殖。
在已有技術(shù)中常規(guī)的紫菜育苗方法即絲狀體育苗法。它是在春天采集果孢子，先在室內(nèi)培養(yǎng)貝殼絲狀體，到秋天再采集殼孢子。整個(gè)育苗時(shí)間長(zhǎng)達(dá)半年之久。這種育苗法不但培養(yǎng)周期長(zhǎng)、病害多，而且采苗受環(huán)境因素的影響、成本高。50年代以后日本人和我國(guó)有些養(yǎng)殖專家如1980年李世英等曾設(shè)想用紫菜葉狀體的單孢子作為苗源、1981年趙煥登等用研磨法游離紫菜細(xì)胞作為苗源、1983年盧澄清等設(shè)想用微生物發(fā)酵分解紫菜細(xì)胞作為苗源，本發(fā)明人曾利用酶法解離紫菜細(xì)胞首次獲得再生幼苗，并于1985年申請(qǐng)了專利，申請(qǐng)?zhí)枮?6104059，隨后上海水產(chǎn)大學(xué)、廈門水產(chǎn)學(xué)院以及美國(guó)、日本、加拿大、法國(guó)、馬來(lái)西亞、韓國(guó)和臺(tái)灣都相繼開展過(guò)酶法紫菜單細(xì)胞和原生質(zhì)體的分離培養(yǎng)，亦都獲得了再生苗，但是都沒(méi)能形成生產(chǎn)規(guī)模進(jìn)入生產(chǎn)性應(yīng)用，因而我們的85104069號(hào)專利申請(qǐng)亦放棄了。因?yàn)槲⑸锇l(fā)酵，存在各種細(xì)菌混生，使紫菜腐爛變質(zhì)，游離細(xì)胞少，死亡率高；用機(jī)械研磨使絕大多數(shù)紫菜細(xì)胞損傷死亡；酶法分離紫菜細(xì)胞和原生質(zhì)體雖能獲得再生幼苗，但制酶工藝復(fù)雜，成本高，而且紫菜酶解細(xì)胞在載體上附著率低，附著時(shí)間長(zhǎng)。
本發(fā)明的目的在于克服酶法育苗中上述兩大障礙，提供一種新的制酶工藝和利用光溫生物反應(yīng)器，使酶解細(xì)胞固定于載體上，附著率超過(guò)生產(chǎn)要求，育苗成本低于常規(guī)育苗，能夠形成生產(chǎn)規(guī)模的酶法解離紫菜葉狀體細(xì)胞育苗方法。
根據(jù)紫菜生態(tài)特點(diǎn)，針對(duì)已有技術(shù)中存在的主要問(wèn)題，本發(fā)明的基本構(gòu)思是在85104059號(hào)專利申請(qǐng)的基礎(chǔ)上進(jìn)一步改革，即利用光溫生物反應(yīng)器對(duì)用酶法解離的紫菜單細(xì)胞和原生質(zhì)體進(jìn)行細(xì)胞固定化培養(yǎng)從而實(shí)現(xiàn)發(fā)明目的。
本發(fā)明所述的酶法解離紫菜葉狀體細(xì)胞育苗方法，包括下列步驟(1)把食藻海螺類動(dòng)物經(jīng)破碎加水勻漿過(guò)濾后再加葡萄糖或者蔗糖配制成紫菜細(xì)胞解離酶液，(2)把紫菜葉狀體置于上述的(1)制得的解離酶液中制得紫菜單細(xì)胞和原生質(zhì)體，其特征在于(3)在光溫生物反應(yīng)器中控制水溫在18～23℃條件下對(duì)上述(2)制得的紫菜單細(xì)胞和原生質(zhì)體進(jìn)行附著性固定培養(yǎng)，(4)經(jīng)3～4天上述(3)的紫菜單細(xì)胞和原生質(zhì)體被培養(yǎng)成幼苗放入海上養(yǎng)殖。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是變先將有性生殖產(chǎn)生二倍體果孢子，再進(jìn)行絲狀體培養(yǎng)的常規(guī)育苗為單倍體葉狀體細(xì)胞無(wú)性繁殖育苗，從而省去了果孢子采集、貝殼絲狀體培養(yǎng)等一系列繁瑣工序，避免了許多絲狀體病害，育苗周期由半年左右縮短為3～4天，不受季節(jié)限制并可利用海水養(yǎng)殖綜合育苗場(chǎng)的廢棄能源進(jìn)行常年工廠化育苗，既可降低成本，又可形成規(guī)?；a(chǎn)，還可避免絲狀體育苗的基因重組分離，有利于保持優(yōu)良品種的種質(zhì)特性，能有效地利用海區(qū)，根據(jù)海水溫度開展多茬養(yǎng)殖，解決了壇紫菜和條斑紫菜的養(yǎng)殖受地區(qū)限制的技術(shù)難題。
本發(fā)明的最佳實(shí)施例是取食藻海螺1千克砸碎，加2升蒸餾水勻漿浸出酶液濾去殼和肉，低溫離心收集酶液后加1.5mol葡萄糖即制得酶解液；將紫菜切碎后放入上述酶解液中，在20℃溫度下解離2小時(shí)左右，用400目篩絹過(guò)濾解離細(xì)胞并用離心機(jī)沉淀收集解離細(xì)胞；把上述收集到的解離細(xì)胞放入光溫生物反應(yīng)器中壇紫菜控制水溫在20～23℃條斑紫菜在18～20℃，在強(qiáng)光下充氣培養(yǎng)1天后將載體(紫菜養(yǎng)殖網(wǎng))放入光溫生物反應(yīng)器中讓細(xì)胞在其上附著固定，再放入另一培養(yǎng)池中培養(yǎng)2天即可放入海區(qū)養(yǎng)殖。
作為本實(shí)施例的變更1、食藻海螺和水的比例可適當(dāng)調(diào)整；2、解離細(xì)胞在光溫生物反應(yīng)器中培養(yǎng)的時(shí)間長(zhǎng)短可隨控制水溫的高低而變；3、在冬季和初春可用海水綜合育苗場(chǎng)排出的廢棄海水熱能或用太陽(yáng)能給海水加溫，而夏天則可用海帶育苗的廢棄低溫海水加天然海水調(diào)溫并加常量營(yíng)養(yǎng)鹽，作為紫菜育苗用水。
權(quán)利要求
1 、一種酶法解離紫菜葉狀體細(xì)胞育苗方法，包括下列步驟(1)把食藻海螺類動(dòng)物經(jīng)破碎加水勻漿過(guò)濾后再加葡萄糖配制成紫菜細(xì)胞解離酶液，(2)把紫菜葉狀體置于上述的(1)制得的解離酶液中制得紫菜單細(xì)胞和原生質(zhì)體，其特征在于(3)在光溫生物反應(yīng)器中控制水溫在18～23℃條件下對(duì)上述(2)制得的紫菜單細(xì)胞和原生質(zhì)體進(jìn)行附著性固定培養(yǎng)，(4)經(jīng)3～4天上述(3)的紫菜單細(xì)胞和原生質(zhì)體被培養(yǎng)成幼苗放入海上養(yǎng)殖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法解離紫菜葉狀體細(xì)胞育苗方法，其特征在于上述的(1)中的葡萄糖可用蔗糖代替。
全文摘要
一種酶法解離紫菜葉狀體細(xì)胞育苗方法，屬水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)，用于培育紫菜幼苗。其特征在于該方法包括用食藻海螺加水和葡萄糖制紫菜細(xì)胞解離酶液、把紫菜葉狀體置于解離酶液中解離單細(xì)胞、在光溫生物反應(yīng)器內(nèi)進(jìn)行固定培養(yǎng)、3～4天后放入海區(qū)養(yǎng)殖四個(gè)步驟。具有省去果孢子采集和貝殼絲狀體培養(yǎng)等工序培養(yǎng)周期短，避免病害，不受季節(jié)限制，成本低，利于保持優(yōu)良品種種質(zhì)特性，能形成規(guī)模生產(chǎn)多薦養(yǎng)殖等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK1153212SQ96116039
公開日1997年7月2日 申請(qǐng)日期1996年11月4日 優(yōu)先權(quán)日1996年11月4日
發(fā)明者戴繼勛, 劉萬(wàn)順, 唐延林 申請(qǐng)人:青島海洋大學(xué)