專利名稱:新抗生素sp-120，sp-120a，sp-120b及其制備方法和農(nóng)業(yè)園藝用農(nóng)藥的制作方法
本發(fā)明是關(guān)于新抗生素SP-120，SP-120 A，SP-120 B和其制備方法，以及一種有效成份為SP-120，SP-120 A，SP-120 B或其復(fù)合體的農(nóng)業(yè)園藝用農(nóng)藥。
以往，農(nóng)業(yè)園藝用農(nóng)藥一直是使用如銅，汞，砷之類重金屬化合物制劑和有機(jī)氯，有機(jī)磷藥劑。但是這些藥劑對動物和人體都有害，對土壤有污染作用，并且殘留在自然界中的有害物質(zhì)又長期地作用于動、植物。這樣造成的環(huán)境污染已成了當(dāng)今重大的社會問題，從而導(dǎo)致了目前這種被禁止或限制使用的局面。此外，隨著選擇性藥劑的減少及抗藥菌的出現(xiàn)，各種植物病害一尤其是水稻的主要病害有明顯加重的趨勢。為此，人們迫切希望能開發(fā)出一些既有強(qiáng)選擇性效果，又有高度安全性的新型農(nóng)藥。
本發(fā)明的目的在于提供一種對各種植物病害均有效的抗生素SP-120，SP-120 A，SP-120 B及其制備方法。而且本發(fā)明的目的還在于提供一種以上述抗生素SP-120，SP-120 A，SP-120 B或其復(fù)合體為有效成份的農(nóng)業(yè)園藝用農(nóng)藥。
本發(fā)明所述的抗生素SP-120，SP-120 A，SP-120 B為未見文獻(xiàn)報(bào)道的新抗生素，其具有后述的理化性質(zhì)。同時(shí)，在后述的噴撒試驗(yàn)中，對水稻的主要病害如水稻紋枯病，稻瘟病及其它如黃瓜灰霉病，黃瓜炭疽病，茄黑斑病，葡萄晚腐病等各種植物病害都顯示了出色的防治效果。并且既無任何藥害，又對施用人員毫無影響，是一種優(yōu)良的農(nóng)業(yè)園藝用農(nóng)藥。
以下對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說明。
抗生素SP-120，SP-120 A，SP-120 B的制備使用的微生物用來生產(chǎn)本發(fā)明所述的抗生素SP-120，SP-120 A及SP-120 B的微生物是一種屬于鏈霉菌屬的菌種，其具有生產(chǎn)抗生素SP-120，SP-120 A及SP-120 B的能力。
鏈霉菌SP.SP-120(Streptomyces SP.SP-120)(中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物保藏中心的保藏號CGMCC0022)(以下簡稱為“SP-120菌株)就是其中一例。該菌株在與本申請相應(yīng)的日本專利申請中被命名為“鏈霉菌SP.RK-120。該微生物具有上述特性，適于生產(chǎn)本發(fā)明所述的抗生素SP-120，SP-120 A，SP-120 B，因而能有效地使用于本發(fā)明所述的制備方法中。
上述“SP-120菌株”是在中華人民共和國福建省三明地區(qū)土壤中分離而得。分離采用常規(guī)土壤稀釋法進(jìn)行。即先在天冬素-葡萄糖瓊脂上于28℃培養(yǎng)6天，挑取單菌落移至該培養(yǎng)基的斜面上。篩選的方法是在SP-120菌發(fā)酵后，取發(fā)酵液噴霧到植株上，然后在植株上接入致病菌，于溫室內(nèi)放置2～4天后檢查結(jié)果，發(fā)現(xiàn)有顯著的防治效果。這樣分離篩選出來的“SP-120菌株”實(shí)質(zhì)上是純的。
SP-120菌株屬于鏈霉菌屬，它在培養(yǎng)基上發(fā)育狀況及生理性質(zhì)如下1.形態(tài)特征SP-120菌株在麥片-瓊脂培養(yǎng)基，淀粉，酵母瓊脂培養(yǎng)基(其組分如下所述)上能極其良好地發(fā)育，氣生菌絲，孢子的附著很豐富，氣生菌絲呈白色到淡灰色。其在蔗糖硝酸鹽瓊脂培養(yǎng)基、酵母麥芽瓊脂培養(yǎng)基上的發(fā)育狀況及氣生菌絲、孢子的附著也都很好。在其它培養(yǎng)基，如在葡萄糖-天冬酰胺瓊脂培養(yǎng)基，甘油-天冬酰胺瓊脂培養(yǎng)基，淀粉-無機(jī)鹽瓊脂培養(yǎng)基，酪氨酸瓊脂培養(yǎng)基，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，胨-酵母鐵瓊脂培養(yǎng)基上也均能發(fā)育，但不充分。而在葡萄糖-天冬酰胺瓊脂培養(yǎng)基，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，以及胨-酵母鐵瓊脂培養(yǎng)基上，該菌的氣生菌絲的發(fā)育微弱或難以確認(rèn)。一般地講，可溶性色素的生成是很微弱的，僅能生產(chǎn)微黃色類色素。依靠酪氨酸瓊脂培養(yǎng)基及胨-酵母鐵瓊脂培養(yǎng)基，則很難生成黑色素?；鶅?nèi)菌絲在表面不呈現(xiàn)具有特征性的色調(diào)而呈微黃色或微褐色。氣生菌絲呈直鏈狀發(fā)育，再由這些直鏈狀菌絲上分枝出呈強(qiáng)螺旋狀的旋管，這就形成了長孢子鎖。孢子近似于球形，長度在1微米以內(nèi)，寬度約為0.5微米，球狀部分的表面平滑。
在用糖類進(jìn)行的碳源利用試驗(yàn)中，該菌株能很好地利用L-阿拉伯糖，D-果糖，棉子糖，乳糖，密二糖，其發(fā)育良好。在D-葡萄糖甘糖，肌醇，D-甘露醇中，雖然也能發(fā)育，但會有部分菌株生長較差。在D-木糖，鼠李糖中的發(fā)育不好，特別是在L-鼠李糖中艱難生成氣生菌絲。
本菌株在葡萄糖-胨-明膠培養(yǎng)基上能發(fā)育，但不能使明膠液化;能完全胨化脫脂乳形成近于透明的液體;在淀粉-無機(jī)鹽瓊脂培養(yǎng)基上能促使淀粉強(qiáng)烈水解。
在用鹽酸水解細(xì)胞壁時(shí)，用紙層析法檢測細(xì)胞的氨基酸組分，可以發(fā)現(xiàn)L-二氨基庚二酸，這就表明了本菌株是屬于鏈霉菌屬的菌種。
2.在各種培養(yǎng)基上的性質(zhì)在接種后第三星期，觀察菌株并記錄結(jié)果如下，顏色按照“顏色名稱描述詞典”(Descriptive color names dictionary)第4版的色名記號記述。
1)蔗糖硝酸鹽瓊脂培養(yǎng)基生長 良好氣生菌絲的附著 良好氣生菌絲的顏色 2ba 灰白色(pearl)基內(nèi)菌絲的顏色 3lc 琥珀色(amber)
可溶性色素 3ga 木瓜黃(melon yellow)2)葡萄糖-天冬酰胺瓊脂培養(yǎng)基生長 不良?xì)馍z的附著 無氣生菌絲的顏色 不明基內(nèi)菌絲的顏色 5ca 淺紅色(shell pink)可溶性色素 6ca 淺紅色(shell pink)3)甘油-天冬酰胺瓊脂培養(yǎng)基生長 普通氣生菌絲的附著 不良?xì)馍z的顏色 7cb 暗淺紅(cloud pink)基內(nèi)菌絲的顏色 5pe 赤褐色(意terra cotta)可溶性色素 61/2gc 灰珊瑚色(dust coral)4)淀粉-無機(jī)鹽瓊脂培養(yǎng)基生長 普通氣生菌絲的附著 普通氣生菌絲的顏色 a 白色(white)基內(nèi)菌絲的顏色 3ca 深粉色(pearl pink)可溶性色素 無5)酪氨酸瓊脂培養(yǎng)基生長 普通氣生菌絲的附著 普通氣生菌絲的顏色 b 亮灰色(light grey)基內(nèi)菌絲的顏色 4pi 槲褐色(oak brown)可溶性色素 5ie 銅褐色(copper tan)6)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基生長 普通氣生菌絲的附著 無氣生菌絲的顏色 不明基內(nèi)菌絲的顏色 2ea 亮黃色(light maize)可溶性色素 2ea 亮黃色(light maize)7)酵母-麥芽瓊脂培養(yǎng)基生長 良好氣生菌絲的附著 良好氣生菌絲的顏色 a 白色(white)基內(nèi)菌絲的顏色 2ea 亮黃色(light maize)可溶性色素 無8)麥片瓊脂培養(yǎng)基生長 良好氣生菌絲的附著 豐富氣生菌絲的顏色 c 亮灰色(light grey)基內(nèi)菌絲的顏色 3ba 灰白色(pearl)9)胨-酵母鐵瓊脂培養(yǎng)基生長 普通氣生菌絲的附著 無氣生菌絲的顏色 不明基內(nèi)菌絲的顏色 2ea 亮黃色(light maize)可溶性色素 無10)淀粉-酵母瓊脂培養(yǎng)基＊生長 良好氣生菌絲的附著 豐富氣生菌絲的顏色 a 白色(white)基內(nèi)菌絲的顏色 3pc 琥珀色(amber)可溶性色素 3ca 深粉紅(pearl pink)＊ 淀粉-酵母瓊脂培養(yǎng)基的組份可溶性淀粉 10克酵母膏 1克NZ氨基酸A 1克瓊脂 15克水 1升 PH7.43.碳源的利用(普戈瓊脂培養(yǎng)基)碳源 發(fā)育狀況＊L-阿拉伯糖 ++D-木糖 ±D-葡萄糖 +D-果糖 ++蔗糖 +肌醇 +
鼠李糖 ±棉子糖 ++D-甘露醇 +乳糖 +++密二糖 ++＊ 發(fā)育狀況+++ 發(fā)育非常好++ 發(fā)育良好+ 發(fā)育± 稍發(fā)育- 不發(fā)育4.其它生理性質(zhì)合適溫度 25～30℃明膠 不液化(葡萄糖-胨-明膠培養(yǎng)基)淀粉水解 水解(淀粉-無機(jī)鹽瓊脂培養(yǎng)基)脫脂乳的液化 完全液化黑色素的生成(酪氨酸瓊脂培養(yǎng)基及胨-酵母鐵瓊脂培 不生成養(yǎng)基)具有上述各性質(zhì)的鏈霉菌屬菌種的檢索來自野野村氏的報(bào)告，即按野野村氏所著的“發(fā)酵工藝雜志”(Joural of FermentationTechnology)第52卷2號所載的放線菌ISP458菌種分類法而記載。該分類法的名稱為“458種鏈霉菌種類分類和鑒別的線索”(Key for Classificat ion and Identificat ion of 458 Species of the Streptomyces Included in ISP)。
本菌屬于白色或灰色組屬，其氣生菌絲呈螺旋狀，孢子的表面平滑而不形成黑色素。同時(shí)其內(nèi)部和可溶性色素均不呈現(xiàn)顯著的色調(diào)。對糖類中的鼠李糖和D-木糖的利用較差，但對其它的糖類而言，則大多數(shù)均可利用。能滿足以上條件的菌種有生白鏈霉菌(Streptomyces albofacience)，因此，本菌屬于S.生白鏈霉菌的一個(gè)近種。但新菌種SP-120(Streptomyces SP.SP-120)與已知的生白鏈霉菌的不同點(diǎn)在于(1)在甘油-天冬素培養(yǎng)基上SP-120菌的背面為赤褐色，有灰褐色可溶性色素;
而S.生白鏈霉菌的背面無特征顏色，無可溶性色素。
(2)對糖類的利用SP-120菌可以稍利用鼠李糖，可利用蔗糖，并可很好地利用阿拉伯糖，棉子糖;
而S.生白鏈霉菌不可利用鼠李糖，可稍利用蔗糖，可利用阿拉伯糖，棉子糖。
SP-120菌的培養(yǎng)及SP-120，SP-120 A，SP-120 B的制取及提純用鏈霉菌屬的上述抗生素生產(chǎn)菌，通過常規(guī)的抗生素生產(chǎn)方法，可以培養(yǎng)SP-120菌并制得本發(fā)明所述的抗生素SP-120，SP-120 A，SP-120 B。培養(yǎng)方式既可為液體培養(yǎng)也可為固體培養(yǎng)。但為了有利于工業(yè)性生產(chǎn)時(shí)的培養(yǎng)，宜將上述生產(chǎn)菌的孢子懸浮液或培養(yǎng)液接種到培養(yǎng)基上并進(jìn)行通氣攪拌培養(yǎng)。
對培養(yǎng)基中的營養(yǎng)源并無特殊的規(guī)定，可含有常用于微生物培養(yǎng)的碳源，氮源及其它營養(yǎng)源。其中碳源可為淀粉，糊精，甘油，葡萄糖，蔗糖，乳糖，肌醇，甘露醇等。氮源可為胨，大豆粉，肉膏，米糖，麥皮，尿素，玉米漿，銨鹽，硝酸鹽，以及其它有機(jī)或無機(jī)含氮化合物。對于其它營養(yǎng)源來講，可適當(dāng)添加一些無機(jī)鹽類，例如，食鹽，磷酸鹽類及鉀，鈣，鋅，錳，鐵之類的金屬鹽，必要時(shí)也可添加些動，植，礦物油等作為消泡劑。
培養(yǎng)時(shí)的溫度，時(shí)間等培養(yǎng)條件，并無嚴(yán)格的限制，以適于使用菌的發(fā)育為準(zhǔn)，而以選擇SP-120，SP-120 A，SP-120 B的產(chǎn)量最高的條件為好。例如，培養(yǎng)基的PH范圍為4～9，以接近中性為好。培養(yǎng)溫度為25℃至35℃。當(dāng)然，包括培養(yǎng)組成物，培養(yǎng)基中氫離子的濃度，培養(yǎng)溫度，攪拌等等所有這些培養(yǎng)條件，均應(yīng)根據(jù)所使用的菌株的種類及外部條件等進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)節(jié)，以獲得最好的效果。
由上述所得的培養(yǎng)物出發(fā)，通過一些適當(dāng)?shù)姆椒ň湍苤频肧P-120，SP-120 A及SP-120 B。這些方法是常使用于提取代謝物的方法，例如，可利用SP-120，SP-120 A，SP-120 B與不純物在溶解度，離子結(jié)合力，吸附親和力及分子量等方面的差別進(jìn)行提取。這些方法可單獨(dú)使用，也可適當(dāng)配合或反復(fù)使用。具體地講，SP-120包括SP-120 A以及SP-120 B，它們大部分存在于培養(yǎng)濾液中。用丁醇反復(fù)提取培養(yǎng)液，或是用如Diaion HP10之類的合成吸附劑進(jìn)行吸附，然后再用50%的丙酰洗滌就可得到SP-120(其中含有SP-120 A及SP-120 B)的濃縮物。所得的濃縮物用硅膠進(jìn)行反復(fù)柱層析，溶劑選用正丁醇-甲醇-水的混合溶液，調(diào)節(jié)它們的組分比率，即可達(dá)到色譜分離的目的。這樣就得到兩個(gè)區(qū)分，其中一個(gè)區(qū)分主要含SP-120 A，另一個(gè)區(qū)分主要含SP-120 B。對這兩個(gè)區(qū)分，分別用凝膠過濾劑如葡萄糖凝膠LH-20等進(jìn)行柱色譜，此時(shí)所用的溶劑以用與上述溶劑同一類系的為適宜。使用凝膠過濾進(jìn)行進(jìn)一步精制，即可分別獲得白色粉末狀的SP-120 A及SP-120 B的精制品。
最后，采用高效液相色譜就能將SP-120 A及SP-120 B完全分離。充填劑選用Nucleosil 5C18，溶劑為異丙醇-甲醇-水，并加有少量醋酸。
如此所制取的新抗生素SP-120 A及SP-120 B分別具有下述的理化性質(zhì)。
SP-120 A及SP-120 B的理化性質(zhì)。
1.熔點(diǎn)A235～255℃分解呈褐色。
B235～265℃分解呈褐色。
2.元素分析A碳50.98%，氫7.11%，氮16.42%，硫3.55%，B碳50.91%，氫6.95%，氮16.12%，硫3.39%，3.比旋度A[α]25D-90° (C＝0.05，二甲亞砜)B[α]25D-59° (C＝0.03，二甲亞砜)4.紫外吸收光譜Aλ0.1N-HCl-MeOHmax220nm(E1%1cm186)峰肩(參見圖1)Bλ0.1N-HCl-MeOHmax220nm(E1%1cm293)峰肩(參見圖2)5.紅外吸收光譜按Br法A3300，2903，2850，1655，1520，1460，1395，1382，1320，1280，1250，1215，1163，1100，1020，1002，900，840，
760cm(參見圖3)B3300，2900，2850，1650，1520，1435，1392，1370，1342，1322，1285，1212，1185，1168，1100，1024，1004，958，903，846，825，765cm-1(參見圖4)6.溶解性SP-120 A及SP-120 B均不溶于甲醇，乙醇，丙酮，乙酸乙酯，氯仿，苯，正己烷，乙醚等有機(jī)溶劑;難溶于水;可溶于正丁醇-甲醇-水的混合液。
7.分子量按FAB質(zhì)譜A911B9238.顯色反應(yīng)SP-120 A及SP-120 B均與過錳酸鉀，茴香醛-硫酸，碘呈陽性。
9.物質(zhì)顏色SP-120 A及SP-120 B均為白色粉末。
10.薄層色譜(美國Merck公司制薄層板0.25m/m)纖維素(溶劑按正丁醇∶甲醇∶水＝4∶1∶2)Rf值A(chǔ)0.60B0.66硅膠(溶劑按正丁醇∶甲醇∶水＝4∶1∶2)
Rf值A(chǔ)0.51B0.5111.酸性水解在6N-HCl中于105℃加熱水解20小時(shí)，在SP-120 A中，能檢測出甘氨酸，亮氨酸的各氨基酸，在SP-120 B中能檢測出甘氨酸和纈氨酸。
12.抗菌譜采用通常的瓊脂平板稀釋法，以最低抑制濃度(MIC)來表示。細(xì)菌使用肉湯瓊脂培養(yǎng)基，霉菌使用馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基MIC(mcg/ml)A B金色葡萄球菌 12.5 12.5(Staphylococcus aureus)草分枝桿菌 12.5 12.5(Mycobacterium phlei)假單胞菌·銅綠菌 ＞100 ＞100(Pseudomonas aeruginosa)枯草桿菌 25 12.5(Bacilus subtilis)格鏈孢菌 12.5 12.5(Alternaria mali)水稻稻瘟病 25 12.5(Pyricularia oryzae)黃瓜炭疽病 12.5 12.5(Collectotrichum lagenarium)
黃瓜灰霉病菌 12.5 12.5(Botorytis cinerea)鐮孢菌·尖孢菌 50 25(Fusarium oxysporum)葡萄晚腐病菌 25 25(Glomeralla cingurata)旋孢菌 25 25(Cochliobolus miyabeanus)抗絲核菌·茄鐮孢菌 12.5 25(Rhizoctonia solani)曲霉菌 50 50(Aspergillus oryzae)作為與本發(fā)明的抗生素SP-120 A及SP-120 B相比較的，已知在分子中含有3～4%硫的肽類抗生素有波單霉素(Bottormycin)，(Enshumycin)，放線菌白素(Actinoleukin)，神戶霉素(Kobenomycin)，佐爾博霉素(Zorbomycin)及腐草霉素(Phleomycin)等等。但SP-120 A及SP-120 B與上述抗生素在紫外吸收光譜及抗菌活性方面有著明顯的差異。因此可以得出結(jié)論，即本發(fā)明所述的抗生素SP-120 A及SP-120 B是屬于未見諸于文獻(xiàn)記載的新抗生素。
SP-120，SP-120 A，SP-120 B或它們的復(fù)合體的農(nóng)業(yè)園藝用農(nóng)藥。
這里所說的SP-120 A及SP-120 B的復(fù)合體是指多少含有些SP-120 A及SP-120 B的濃縮物。該濃縮物是由合成吸附劑吸附上述培養(yǎng)濾液后，再用含水丙酮抽提而制得。該兩種物質(zhì)由于從一個(gè)培養(yǎng)物中同時(shí)制得，故能以復(fù)合體的形式作為有效成分進(jìn)行使用。這在經(jīng)濟(jì)方面極為有利，因而引人注目。當(dāng)然也可以單獨(dú)使用SP-120，SP-120 A或SP-120 B作為有效成分。
本發(fā)明所述的有效成分用于農(nóng)業(yè)園藝用農(nóng)藥等制劑時(shí)，可同樣使用該技術(shù)領(lǐng)域：
中已知農(nóng)藥所通用的固相載體，液相載體及乳化分散劑等制劑，并能配制成顆粒劑，粉劑，乳化劑，可濕性粉劑，片劑，油劑，噴霧劑，煙霧劑等任意的劑型。這些載體中固相載體可以是粘土，高嶺土，皂土，酸性白土，硅藻土，碳酸鈣，硝化纖維素，淀粉，阿拉伯膠等;波相載體可為甲醇，乙醇，丙酮，二甲基甲酰胺，乙二醇等。同時(shí)，在制劑中一般可適當(dāng)添加些輔助劑，如高級醇的硫酸酯，聚氧化乙烯，烷基-烯丙基醚，烷基烯丙基聚乙二醇醚，烷基烯丙基無水山梨糖醇月桂酸酯，烷基烯丙基磺酸鹽，季胺鹽，聚烯化氧等。
一般而言，各制劑中有效成分的配比，在乳劑及可濕性粉劑中為10～90%;在粉劑及油劑等中為0.1～10%;當(dāng)然，也可根據(jù)不同的使用目的而適當(dāng)增減。
本發(fā)明的制劑還可與其它的殺菌劑，除草劑，殺蟲劑，肥料物質(zhì)，土壤改良劑，等配合使用。
以下就本發(fā)明的制造，實(shí)施，試驗(yàn)事例作具體的說明，但并不意味著限定本發(fā)明。
其中，在實(shí)施例中的“比”為重量比。
制造例以葡萄糖2%，可溶性淀粉1%，肉汁浸膏0.1%，干燥酵母0.4%，大豆粉2.5%，食鹽0.2%，磷酸二氫鉀0.005%的配比制成培養(yǎng)基，將上述SP-120菌株(微生物儲存號碼CGMCC0022)接種于該培養(yǎng)基中，在28℃振蕩培養(yǎng)96小時(shí)。取其培養(yǎng)濾液25升，于4升甲醛類樹脂HP-10(三菱化成(株)制)層析柱中吸附出活性成分，用40升50%的丙酮提取，提取液在減壓下濃縮至2升，過濾沉淀并水洗。然后以正丁醇-甲醇-水(8∶1∶1)為溶劑平衡一根直徑為50mm，長度為40cm的硅膠柱。用0.1 NHCl-Me OH(1∶8)的試劑溶解沉淀，并把溶解液加于柱頂，然后進(jìn)行展開。正丁醇-甲醇-水的配比開始時(shí)為8∶1∶1，然后改為5∶1∶1，最后采用4∶1∶1。以每55ml為一計(jì)量，在最初No57～100里主要得到SP-120 B，此后，在No101～123里主要得到SP-120 A。
將這兩個(gè)活性區(qū)分分別減壓濃縮，冷凍干燥后分別得到產(chǎn)物990mg和170mg，此為粗制粉末。
把含有SP-120 A的粗制粉末裝入葡聚糖凝膠LH-20(瑞典，醫(yī)藥品公司制)層析柱中，該柱的直徑為50mm，長度為90cm，是以正丁醇-甲醇-水(4∶1∶2)平衡而得。然后，用上述同一溶劑展開，以每10ml為一管，在No28～35管，主要含有SP-120 A，將這些流出液減壓濃縮，并經(jīng)冷凍干燥得到76mg白色粉末。此后，用高效液相色譜對其進(jìn)行分離，得到SP-120 A和SP-120 B。色譜柱選用核苷5C18，直徑為20mm，長度為30cm。溶液采用異丙醇-甲醇-水(2∶2∶6)并添加0.15%的醋酸。流速為6.0ml/分，壓力為180kg/cm2，展開時(shí)間為30分鐘時(shí)出現(xiàn)SP-120 B，42分鐘時(shí)出現(xiàn)SP-120 A。收集SP-120 A的部分，減壓濃縮直至除盡異丙醇和甲醇時(shí)為止，然后冷凍干燥，得到白色粉末27mg。
SP-120 B的粗制粉末同樣也可采用葡聚糖凝膠LH-20柱層析及選用核苷5C18的高效液相進(jìn)行分離而制得SP-120 B。收集SP-120 B的部分，在減壓下濃縮除去溶劑，經(jīng)冷凍干燥后得到14.8mg SP-120 B的白色粉末。
然后采用下述方法進(jìn)行脫鹽。
將SP-120 A溶于正丁醇-甲醇-水(2∶1∶2)并加有0.15%醋酸的溶劑中，除去不溶物。邊加水邊減壓蒸餾除去正丁醇和水，使醋酸的濃度保持在0.15%以下，然后冷凍干燥。此后，用正丁醇-甲醇-水(2∶1∶2)200ml使其溶解，減壓濃縮至為10ml左右，過濾分出SP-120 A沉淀并充分水洗，再用丙酮和乙醚洗滌干凈后置于干燥中干燥，即得到12.8mg純SP-120 A粉末。
以同樣方法進(jìn)行SP-120 B的脫鹽處理，也可得4.2mg粉末狀純品。
實(shí)施例1 可濕性粉劑將10份SP-120 A(或SP-120，SP-120 B或復(fù)合體)與5份十二烷基磺酸鈉，2份二苯甲烷-二磺酸鈉-甲醛聚合物及83份陶土混合，粉碎，即得到100份制劑。
實(shí)施例2 乳劑將8份SP-120 A(或SP-120，SP-120 B或復(fù)合體)與10份乙二醇，20份二甲基甲酰胺，10份烷基二甲苯氯化胺及52份甲醇混合溶解，即得到100份乳劑。
實(shí)施例3 粉劑將0.2份SP-120 A(或SP-120，SP-120 B或復(fù)合體)與0.5份硬脂酸鈣，50份滑石粉及49.3份陶土混合粉碎，即得100份粉劑。
實(shí)施例4 顆粒劑將10份SP-120 A(或SP-120，SP-120 B，或復(fù)合體)與15份淀粉，72份皂土粉及3份硫酸十二烷基酯的鈉鹽混合粉碎，即得100份制劑。
試驗(yàn)例1對黃瓜灰霉病的防治試驗(yàn)將按實(shí)施例1所制成的可濕性粉劑稀釋至所定的濃度，然后噴灑到播種后生育15天的黃瓜(品種相橫半白)幼苗上，并進(jìn)行風(fēng)干。
將黃瓜霉病菌(Botorytis cinerea)置于土豆，葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)，用BLB光進(jìn)行照射使孢子誘發(fā)。將誘發(fā)后的孢子懸浮于10%葡萄糖和1%的酵母抽提溶液中。
藥液干燥后，將黃瓜移至接種箱，將上述懸浮液用噴霧器進(jìn)行噴霧接種，每10棵黃瓜幼苗約噴藥10cc。
接種后的黃瓜幼苗置于恒溫多濕的地方，4天后檢查發(fā)病的情況。
防治效果按下述方法進(jìn)行計(jì)算發(fā)病指數(shù) 發(fā)病程度0 不發(fā)病1 僅有病斑2 發(fā)病面積占10%以下3 發(fā)病面積占10%以上至20%以下4 發(fā)病面積占20%以上至30%以下5 發(fā)病面積占30%以上至40%以下6 發(fā)病面積占40%以上防治效果＝(1- (處理區(qū)發(fā)病指數(shù)總和)/(對照區(qū)發(fā)病指數(shù)總和) )×100其結(jié)果如表1所示表1試驗(yàn)化合物 噴灑濃度(ppm) 防治效果(%) 藥害SP-120 A 200 90 無SP-120 B 200 81 無SP-120復(fù)合體＊ 500 100 無SP-120復(fù)合體＊ 250 99 無SP-120復(fù)合體＊ 125 89 無苯萊特1) 250 92 無ロブラ-Ⅳ2) 250 90 無對照處理 - 0 -＊其中含有有效成份約30%1) 1-丁胺甲?；?-2-苯并咪唑氨基甲酸酯。
2) 1-異丙基氨基甲?；?3-(3，5-二氯苯基)乙內(nèi)酰脲(50%)試驗(yàn)例2對黃瓜炭疽病的防治試驗(yàn)把按實(shí)施例2所制成的乳劑稀釋至所定的濃度，然后噴灑到播種后生育期為15天的黃瓜(品種相橫半白)幼苗上，進(jìn)行風(fēng)干。
將黃瓜炭疽病菌(Colletotrichum lagenarium)置于土豆瓊脂平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)，并將生育后的孢子制成懸浮液(孢子濃度為一個(gè)視野[顯微鏡倍率×150]約200個(gè))。
藥液干燥后，將黃瓜幼苗移至接種箱內(nèi)，以上述懸浮液用噴霧器進(jìn)行噴霧接種，每10棵黃瓜幼苗約噴藥10cc。接種后的黃瓜幼苗在濕度為100%的接種箱內(nèi)放置24小時(shí)，然后移至自然光的溫室內(nèi)，4天后檢查病斑數(shù)。各藥劑處理區(qū)均使用10棵黃瓜幼苗。
防治效果按下述方法進(jìn)行計(jì)算防治效果＝1- (處理區(qū)病斑總數(shù))/(對照區(qū)病斑總數(shù)) ×100其結(jié)果如表2所示表2試驗(yàn)化合物 噴灑濃度(ppm) 防治效果(%) 藥害SP-120 A 200 98 無100 88 無50 62 無SP-120 B 200 89 無100 78 無50 63 無SP-120復(fù)合體＊ 500 100 無250 100 無125 98 無菌清3) 1000 90 無對照處理 - 0 -＊含有效成份約30%3)四氯間苯二腈試驗(yàn)例3對稻紋枯病的防治試驗(yàn)預(yù)先準(zhǔn)備若干盆栽(每盆7棵，每區(qū)10盆)水稻(品種十石)幼苗，在溫室內(nèi)培養(yǎng)至第五葉期。將按實(shí)施例1所制成的可濕性粉劑用甲醇及水稀釋至所定的濃度，再用噴霧器按平均每盆約40ml的劑量進(jìn)行噴灑。2小時(shí)后，將稻紋枯病菌(Pellicuaria sasakii)的菌叢插入水稻的新葉鞘間進(jìn)行接種，基葉都用塑料薄膜加以覆蓋，然后于溫室保溫7天后測定水稻發(fā)病總病斑長度。防治效果按下式進(jìn)行計(jì)算。
防治效果(%)＝1- (處理區(qū)的總病斑長度)/(對照區(qū)的總病斑長度) )×100其結(jié)果如表3所示表3試驗(yàn)化合物 噴灑濃度(ppm) 防治效果(%) 藥害SP-120 A 200 95 無SP-120 B 200 92 無SP-120復(fù)合體＊ 500 100 無250 100 無150 90 無田安4) 65 90 無對照處理 - 0 -＊含有效成份約30%4)甲基胂酸鐵銨(65%)本發(fā)明的效果根據(jù)以上試驗(yàn)的結(jié)果可以證明，本發(fā)明所述的農(nóng)業(yè)園藝用農(nóng)藥，提供了一種新的農(nóng)藥。這種農(nóng)藥既對各種植物病害具有極高的防治效果，又具有高度的安全性并且無任何藥害。
4.附圖的說明圖1為本發(fā)明所述抗生素SP-120 A的紫外吸收光譜圖。圖2為SP-120 B的紫外吸收光譜圖。圖3為抗生素SP-120 A的紅外吸收光譜圖。圖4為抗生素SP-120 B的紅外吸收光譜圖。
權(quán)利要求
1.一種新抗生素SP-120組合物，其特征在于它含有抗生素SP-120A抗生素SP-120B。
2.一種根據(jù)權(quán)項(xiàng)1所述的抗生素組合物，其特征在于，所述的新抗生素SP-120 A具有下述理化性質(zhì)和生物性質(zhì)(1)熔點(diǎn)于235～255℃分解呈褐色;(2)元素分析碳50.98%，氫7.11%，氮16.42%，硫3.55%;(3)比旋度[α]25D＝-90°(C＝0.05、二甲亞砜);(4)紫外吸收光譜λ0.1N-HCl-MeOHmax220nm(E1%1cm186)峰肩(5)紅外吸收光譜(KBr法)3300，2903，2850，1655，1520，1460，1395，1382，1320，1280，1250，1215，1163，1100，1020，1002，900，840，760cm-1(6)溶解性不溶于甲醇，乙醇，丙醇，乙酸乙酯，氯仿，苯，正己烷和乙醚;難溶于水;可溶于正丁醇-甲醇-水的混合液，(7)分子量(按FAB質(zhì)譜)911，(8)顯色反應(yīng)與過錳酸鉀，茴香醛-硫酸，碘呈陽性，(9)物質(zhì)顏色白色粉末，(10)酸性水解加酸水解，得亮氨酸及甘氨酸，(11)抗菌譜對革蘭陽性菌，抗酸性菌，陰性菌及植物病原菌呈抗菌活性。
3.一種根據(jù)權(quán)項(xiàng)1所述的抗生素組合物，其特征在于，所述的新抗生素SP-120 B具有下述理化性質(zhì)和生物性質(zhì)(1)熔點(diǎn)235～265℃分解呈褐色;(2)元素分析碳50.91%，氫6.95%，氮16.12%，硫3.39%;(3)比旋度[α]25D＝-59°(C＝0.03、二甲亞砜);(4)紫外線吸收光譜λ0.1N-HCl-MeOHmax220nm(E1%1cm293)峰肩(5)紅外吸收光譜(KBr法)3300，2900，2850，1650，1520，1435，1392，1370，1342，1322，1285，1212，1185，1168，1100，1024，1004，958，903，846，825，765cm-1(6)溶解性不溶于甲醇，乙醇，丙醇，乙酸乙酯，氯仿，苯，正己烷和乙醚;難溶于水;可溶于正丁醇-甲醇-水的混合液，(7)分子量(按FAB質(zhì)譜)923，(8)顯色反應(yīng)與過錳酸鉀，茴香醛-硫酸，碘呈陽性，(9)物質(zhì)顏色白色粉末，(10)酸性水解加酸水解，得纈氨酸及甘氨酸，(11)抗菌譜對革蘭氏陽性菌，抗酸性菌，陰性菌及植物病原菌呈抗菌活性。
4.新抗生素SP-120的制備方法，其特征在于，培養(yǎng)屬于鏈霉菌(Streptomyces)屬的抗生素SP-120的生產(chǎn)菌，再從這些培養(yǎng)物中分離提取新抗生素SP-120。
5.新抗生素SP-120 A及SP-120 B的制備方法，其特征在于，培養(yǎng)屬于鏈霉菌(Spreptomyces)屬的抗生素SP-120 A及SP-120 B的生產(chǎn)菌，再從這些培養(yǎng)物中分離提取新抗生素SP-120 A及SP-120 B。
6.根據(jù)權(quán)項(xiàng)4或5所述的方法，其特征在于所述的抗生素SP-120，-120 A及SP-120 B的生產(chǎn)菌為鏈霉菌SP.SP-120(Streptomyces SP.SP-120)。
7.一種農(nóng)業(yè)園藝用農(nóng)藥組合物，其特征在于，所含有的有效成分為新抗生素SP-120或SP-120 A、SP-120 B。
專利摘要
本發(fā)明提供了一新抗生素SP-120，SP-120A，SP-120B及其制備方法，還提供了有效成分為SP-120，SP-120A，SP-120B或其復(fù)合體的農(nóng)業(yè)園藝用農(nóng)藥。它們具有強(qiáng)選擇性，又有高度安全性，對施用人員毫無影響并且無任何藥害。是通過培養(yǎng)鏈霉菌SP.SP-120(Streptomyces SP.SP—120)來生產(chǎn)本發(fā)明的物質(zhì)。
文檔編號C12P19/54GK85106596SQ85106596
公開日1987年3月25日 申請日期1985年9月3日
發(fā)明者戴仙文, 謝松元, 沈寅初, 倪長春, 黃瑞珊, 楊慧心, 見里朝正, 磯野清, 黃耿堂, 浦本昌和, 日下部寬南, 小日間君代 申請人:化學(xué)工業(yè)部科學(xué)技術(shù)局, 日本科技廳導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan