專利名稱:一種黃姑魚的人工催產(chǎn)受精及家系建立方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及魚類的養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種黃姑魚的人工催產(chǎn)受精及家系建立方法。
背景技術(shù)：
黃姑魚(Nibea albiflora)，俗稱黃婆雞，屬鱸形目，石首魚科，黃姑魚屬，近海中下水層魚類，為我國東南沿海重要的增殖和養(yǎng)殖品種，具有較高的營養(yǎng)和藥用價(jià)值，市場(chǎng)需求量在不斷上升。目前黃姑魚的繁殖大多依靠親本自然成熟來實(shí)現(xiàn)產(chǎn)卵，由于黃姑魚親本成熟度的差異，造成產(chǎn)卵的不同步性，無法實(shí)現(xiàn)對(duì)產(chǎn)卵時(shí)間及產(chǎn)卵量的人為控制，既不利于生產(chǎn)，也無法滿足魚類遺傳育種定向交配的要求。人工催產(chǎn)在一定程度上解決了黃姑魚等魚類親本群體性腺成熟度差異造成的排卵不集中、排卵周期較長的問題，通過人工催產(chǎn)，可以促使親魚一次性產(chǎn)卵，產(chǎn)卵多，出苗整齊。如中國發(fā)明專利申請(qǐng)《黃姑魚提早繁育方法》，發(fā)明公開號(hào)102257978A，公開了一種黃姑魚的提早繁育方法，步驟包括選400g以上雄性親魚和600g以上雌性親魚，按I :1于培養(yǎng)池中，每立方米水體放養(yǎng)2飛對(duì)雌雄親魚；控制光照時(shí)間和水溫溫度一月內(nèi)光照時(shí)間從10小時(shí)/天延至14小時(shí)/天，光照強(qiáng)度在300-5001ux ;水溫從10°C始，1°C /天升至18°C 19°C穩(wěn)定七天；然后O. 5°C 1°C /天升至22°C停止升溫；維持14小時(shí)/天、22°C—個(gè)月，得性腺成熟的雌雄親魚；雌性親魚用激素按O. 3-1. 5微克/千克劑量注射催產(chǎn)，雄性減半；親魚在激素誘導(dǎo)下自然受精得受精卵，然后進(jìn)行常規(guī)人工育苗。然而該方法未詳細(xì)確定親本的最佳催產(chǎn)期和催產(chǎn)劑，也未建立明確的催產(chǎn)親體培育溫度和催產(chǎn)效應(yīng)時(shí)間的關(guān)系，無法形成一個(gè)黃姑魚系統(tǒng)的長期的優(yōu)良家系。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明在黃姑魚性腺發(fā)育規(guī)律的基礎(chǔ)上，確定親本的最佳催產(chǎn)期和催產(chǎn)劑，建立催產(chǎn)親體培育溫度和催產(chǎn)效應(yīng)時(shí)間的關(guān)系。
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供一種黃姑魚的人工催產(chǎn)受精及家系建立方法，其特征在于按以下步驟
(1)將黃姑魚親本移入室內(nèi)大棚中養(yǎng)殖，養(yǎng)殖過程中控制水溫在14 19°C之間，溶解氧5. Omg/L以上，養(yǎng)殖密度10 15尾/立方米，日常投喂料中，每隔2 5天加投喂一次冰鮮小雜魚，投喂量控制在魚體質(zhì)量2 3%，所述的冰鮮小雜魚以帶魚和小黃魚為主；
(2)將選取的黃姑魚親本轉(zhuǎn)入室內(nèi)水泥池進(jìn)行營養(yǎng)強(qiáng)化，養(yǎng)殖期間控制養(yǎng)殖密度5 10尾/立方米,采用沙濾海水,每天早上換水90%以上,24h充氧，保持水體溶解氧5. Omg/L以上，日常投喂料中，每天加投喂I次縊経，投喂量為魚體質(zhì)量4 7%，并在投喂的縊蟶中加入O. 2%的維生素E ；
(3)挑選腹部有隆起，用手輕輕觸摸腹部較柔軟，泄殖孔有微微的突起并且顏色略帶紅色的親本作為待催產(chǎn)的親魚，即性腺發(fā)育成熟至IV期的親本，用注射用促黃體激素釋放激素作為催產(chǎn)劑，對(duì)黃姑魚雌魚采用兩次注射法進(jìn)行腹腔注射，第一次催產(chǎn)時(shí)注射劑量為Ikg親本注射I μ g催產(chǎn)素，第二次注射時(shí)注射劑量為Ikg親本注射I. 5-2 μ g催產(chǎn)素，對(duì)黃姑魚雄魚采用一次注射法進(jìn)行腹腔注射，注射劑量為Ikg親本注射I μ g催產(chǎn)素；
(4)待親魚注射完催產(chǎn)素后，立即將它們分別放到不同的催產(chǎn)池中培育，雌魚的培育池要用黑布將池口遮住，等效應(yīng)時(shí)間過后，對(duì)催產(chǎn)后的雄魚采精，用淡水沖洗雄魚的泄殖孔，擦凈，輕輕擠壓腹部，用吸管將精液收集到離心管中暫存，再對(duì)催產(chǎn)后的雌魚取卵，同樣用淡水沖洗雌魚的泄殖孔，擦凈，輕輕擠壓腹部，用塑料杯收集卵子，將收集好的精液用Hank’s液，按照I :30比例稀釋，然后與卵子按照每IOOg卵子加入IOml精液的比例混合，并立即混勻，然后加入海水完成受精，所述的Hank’ s液配方為NaCl 8.01 g/1 ；KC1 0.4g/1 ；CaCl2 0. 14 g/1 ；NaHCO3 0. 35 g/1 ；KH2P04 0 . 06 g/1 ；Glucose 0. 34 g/1 ； pH 8. 0 ；
(5)收集精液和卵子時(shí)，分別把每一條雄魚的精液和雌魚的卵子都單獨(dú)保存，在顯微鏡下分別觀察，選取精子活力好的雄魚和卵子形狀完整規(guī)則并且透明的雌魚進(jìn)行I對(duì)I人工受精，并把雌性和雄性親魚分別剪取尾鰭低溫保存，并做好記錄，用于建立家系。所述的一種黃姑魚的人工催產(chǎn)受精及家系建立方法，其特征在于步驟(I)中當(dāng)水溫在16°C以上時(shí)日常投喂料中，每隔2 3天加投喂一次冰鮮小雜魚，投喂量控制在魚體質(zhì)量2 3%，當(dāng)水溫低于16°C時(shí)日常投喂料中，每隔3 5天加投喂一次冰鮮小雜魚，投喂量控制在魚體質(zhì)量2 3%。
所述的一種黃姑魚的人工催產(chǎn)受精及家系建立方法，其特征在于步驟(2)中在水泥池的四周和頂部以黑布遮光，并在上方Im安裝2只60W的日光燈，盡量使燈光在培育池的水面分布均勻，開始每天連續(xù)照射8小時(shí)，并每隔5天增加I小時(shí)，至每日照射14個(gè)小時(shí)，后維持14小時(shí)/天，光照強(qiáng)度為50 lOOLx。
所述的一種黃姑魚的人工催產(chǎn)受精及家系建立方法，其特征在于步驟(3)所述的注射用促黃體激素釋放激素選用注射用促黃體素釋放激素A2。
所述的一種黃姑魚的人工催產(chǎn)受精及家系建立方法，其特征在于步驟(3)所述的雌魚的第二次注射時(shí)間和雄魚的注射時(shí)間都要選在早上的8 00o
所述的一種黃姑魚的人工催產(chǎn)受精及家系建立方法，其特征在于步驟(4)所述的效應(yīng)時(shí)間為當(dāng)培育水溫為20°C時(shí)催產(chǎn)效應(yīng)時(shí)間為31-32h，當(dāng)培育溫度為22°C時(shí)催產(chǎn)效應(yīng)時(shí)間為29-30h。
所述的一種黃姑魚的人工催產(chǎn)受精及家系建立方法，其特征在于步驟(5)所述的I對(duì)I人工受精采用的是干法受精。
本發(fā)明的一種黃姑魚的人工催產(chǎn)受精及家系建立方法，詳細(xì)確定親本的最佳催產(chǎn)期和催產(chǎn)劑，建立明確的催產(chǎn)親體培育溫度和催產(chǎn)效應(yīng)時(shí)間的關(guān)系，且催產(chǎn)成功率高，產(chǎn)卵時(shí)間統(tǒng)一，產(chǎn)卵量多，解決了黃姑魚排卵不同步的問題，實(shí)現(xiàn)對(duì)親本的按需供卵，也便于建立黃姑魚系統(tǒng)的長期的優(yōu)良家系。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
實(shí)施例在11月下旬將黃姑魚親本移入室內(nèi)大棚中養(yǎng)殖，池壁和池底均用水泥修聾，養(yǎng)殖水深為I. 5-2. 0m，養(yǎng)殖密度10 15尾/立方米，控制水溫在14 19°C之間，根據(jù)水體的溫度調(diào)整投喂量，當(dāng)水溫在16°C以上時(shí)，日常投喂料中，每隔2-3天加投喂一次冰鮮小雜魚，以帶魚和小黃魚為主。當(dāng)水溫低于16°C時(shí)，日常投喂料中，每隔3-5天加投喂一次冰鮮小雜魚，投喂量控制在魚體重的2 3%，并且在室內(nèi)大棚內(nèi)放置增氧機(jī)兩臺(tái)，保持水體中的溶解氧充足。次年3月中旬將親魚運(yùn)至室內(nèi)水泥池中培育和營養(yǎng)強(qiáng)化,采用沙濾海水，每天早上換水90%以上，24h充氧，保持水體溶解氧5. Omg/L以上，在日常投喂料中，每天加投喂I次縊蟶,投喂量為魚體重的4 7%，并在投喂的縊蟶中加入O. 2%的維生素E。在培育池四周和頂部以黑布遮光，并在親魚培育池的上方Im安裝2只60W的日光燈，盡量使燈光在培育池的水面分布均勻，開始每天連續(xù)照射8小時(shí)，并每隔5天增加I小時(shí)，至每日照射14個(gè)小時(shí)，后維持14小時(shí)/天，光照強(qiáng)度為50 lOOLx。
親本經(jīng)營養(yǎng)強(qiáng)化后，至次年5月上旬，挑選性腺發(fā)育較好的黃姑魚雌魚200尾和雄魚100尾轉(zhuǎn)移至各自催產(chǎn)池中培育。挑選雌魚時(shí)要選擇個(gè)體較大、體色正常、健康的親本，輕摸魚體的腹部可以清晰地感覺到性腺的輪廓，且腹部較松軟。挑選雄魚時(shí)用毛巾裹住魚 體的頭部，輕輕的擠壓腹部略有乳白色的精液流出。在親本的挑選和轉(zhuǎn)移過程中，可適當(dāng)?shù)挠肕S-222麻醉，以減少對(duì)親本的刺激和傷害。
催產(chǎn)劑選用的是寧波第二激素廠生產(chǎn)的注射用促黃體素釋放激素A2，利用O. 7%的生理鹽水稀釋催產(chǎn)素來進(jìn)行腹腔注射。對(duì)于雌魚選用兩次注射法，第一次催產(chǎn)時(shí)注射劑量為Ikg親本注射I μ g催產(chǎn)素，第二次注射時(shí)注射劑量為Ikg親本注射I. 5-2 μ g催產(chǎn)素。對(duì)黃姑魚雄魚采用一次注射法，注射劑量為Ikg親本注射I μ g催產(chǎn)素。待親本注射完催產(chǎn)素后，立即將它們分別放到不同的催產(chǎn)池中培育，即催產(chǎn)后雌魚和雄魚是分開培育的，并且雌魚的培育池要用黑布將池口遮住。當(dāng)培育水溫為20°C時(shí)親本的催產(chǎn)效應(yīng)時(shí)間為31-32h，而當(dāng)培育溫度為22°C時(shí)親本的催產(chǎn)效應(yīng)時(shí)間為29-30h，雌魚的第二次注射時(shí)間和雄魚的注射時(shí)間都要選在早上的8 :00，使親本在第二天晚上的19:00前后產(chǎn)卵，與黃姑魚自然產(chǎn)卵時(shí)間相近。5月中旬至六月中旬，共催產(chǎn)親本11批次，共催產(chǎn)雌魚120尾和雄魚80尾，經(jīng)人工催產(chǎn)的養(yǎng)殖親魚，雄魚的催產(chǎn)成功率達(dá)到100%，雌魚的催產(chǎn)成功率達(dá)到60%-80%，有效地提高了親魚的年供卵量，共提供給育苗場(chǎng)達(dá)20000ml優(yōu)質(zhì)受精卵，實(shí)現(xiàn)經(jīng)濟(jì)效益可達(dá)300余萬。
對(duì)催產(chǎn)后的親本分別進(jìn)行精子和卵子的收集。首先用淡水沖洗完雄魚的泄殖孔，擦凈，輕輕擠壓腹部，用吸管將精液收集到2ml離心管中，放置在保溫冰盒中暫存。精液收集完后，再對(duì)雌魚取卵，同樣要將雌魚的泄殖孔擦拭干凈，防止海水污染，擠壓腹部，用塑料杯收集卵子。將收集好的精液用Hank’s液按照I :30比例稀釋，然后與卵子按照每IOOg卵子加入IOml精液的比例混合，并立即混勻，然后加入少量的海水完成受精，所述的Hank’ s液配方為NaCl 8. 01 g/1 ；KC1 O. 4 g/1 ；CaCl2 0. 14 g/1 ；NaHCO3 0. 35 g/1 ；KH2P04 0 . 06g/1 ；Glucose 0. 34 g/1 ； pH 8.0。
收集精液和卵子時(shí)，分別把每一條雄魚的精液和雌魚的卵子都單獨(dú)保存，在顯微鏡下分別觀察，選取精子活力好的雄魚和卵子形狀完整規(guī)則并且透明的雌魚進(jìn)行I對(duì)I人工干法受精，并把雌性和雄性親魚分別剪取尾鰭低溫保存，并做好記錄。在5月至6月共對(duì)人工催產(chǎn)后的16000ml卵子進(jìn)行人工受精，受精率達(dá)到60% ;共構(gòu)建黃姑魚全同胞家系28個(gè)，此方法特別適用于黃姑魚的遺傳育種。
權(quán)利要求
1.一種黃姑魚的人工催產(chǎn)受精及家系建立方法，其特征在于按以下步驟 (1)將黃姑魚親本移入室內(nèi)大棚中養(yǎng)殖，養(yǎng)殖過程中控制水溫在14 19°C之間，溶解氧5. Omg/L以上，養(yǎng)殖密度10 15尾/立方米，日常投喂料中，每隔2 5天加投喂一次冰鮮小雜魚，投喂量控制在魚體質(zhì)量2 3%，所述的冰鮮小雜魚以帶魚和小黃魚為主； (2)將選取的黃姑魚親本轉(zhuǎn)入室內(nèi)水泥池進(jìn)行營養(yǎng)強(qiáng)化，養(yǎng)殖期間控制養(yǎng)殖密度5 10尾/立方米,采用沙濾海水,每天早上換水90%以上,24h充氧，保持水體溶解氧5. Omg/L以上，日常投喂料中，每天加投喂I次縊経，投喂量為魚體質(zhì)量4 7%，并在投喂的縊蟶中加入O. 2%的維生素E ； (3)挑選腹部有隆起，用手輕輕觸摸腹部較柔軟，泄殖孔有微微的突起并且顏色略帶紅色的親本作為待催產(chǎn)的親魚，即性腺發(fā)育成熟至IV期的親本，用注射用促黃體激素釋放激素作為催產(chǎn)劑，對(duì)黃姑魚雌魚采用兩次注射法進(jìn)行腹腔注射，第一次催產(chǎn)時(shí)注射劑量為Ikg親本注射I μ g催產(chǎn)素，第二次注射時(shí)注射劑量為Ikg親本注射I. 5-2 μ g催產(chǎn)素，對(duì)黃姑魚雄魚采用一次注射法進(jìn)行腹腔注射，注射劑量為Ikg親本注射I μ g催產(chǎn)素； (4)待親魚注射完催產(chǎn)素后，立即將它們分別放到不同的催產(chǎn)池中培育，雌魚的培育池要用黑布將池口遮住，等效應(yīng)時(shí)間過后，對(duì)催產(chǎn)后的雄魚采精，用淡水沖洗雄魚的泄殖孔，擦凈，輕輕擠壓腹部，用吸管將精液收集到離心管中暫存，再對(duì)催產(chǎn)后的雌魚取卵，同樣用淡水沖洗雌魚的泄殖孔，擦凈，輕輕擠壓腹部，用塑料杯收集卵子，將收集好的精液用Hank’s液，按照I :30比例稀釋，然后與卵子按照每IOOg卵子加入IOml精液的比例混合，并立即混勻，然后加入少量的海水完成受精，所述的Hank’s液配方為=NaCl 8.01 g/1 ；KC1O.4 g/1 ；CaCl2 0. 14 g/1 ；NaHCO3 0. 35 g/1 ；KH2P04 0 . 06 g/1 ；Glucose 0. 34 g/1 ； pH8.0 ； (5)收集精液和卵子時(shí)，分別把每一條雄魚的精液和雌魚的卵子都單獨(dú)保存，在顯微鏡下分別觀察，選取精子活力好的雄魚和卵子形狀完整規(guī)則并且透明的雌魚進(jìn)行I對(duì)I人工受精，并把雌性和雄性親魚分別剪取尾鰭低溫保存，并做好記錄，用于建立家系。
2.如權(quán)利要求
I所述的一種黃姑魚的人工催產(chǎn)受精及家系建立方法，其特征在于步驟(1)中當(dāng)水溫在16°C以上時(shí)日常投喂料中，每隔2 3天加投喂一次冰鮮小雜魚，投喂量控制在魚體質(zhì)量2 3%，當(dāng)水溫低于16°C時(shí)日常投喂料中，每隔3 5天加投喂一次冰鮮小雜魚，投喂量控制在魚體質(zhì)量2 3%。
3.如權(quán)利要求
I所述的一種黃姑魚的人工催產(chǎn)受精及家系建立方法，其特征在于步驟(2)中在水泥池的四周和頂部以黑布遮光，并在上方Im安裝2只60W的日光燈，盡量使燈光在培育池的水面分布均勻，開始每天連續(xù)照射8小時(shí)，并每隔5天增加I小時(shí)，至每日照射14個(gè)小時(shí)，后維持14小時(shí)/天，光照強(qiáng)度為50 IOOLx。
4.如權(quán)利要求
I所述的一種黃姑魚的人工催產(chǎn)受精及家系建立方法，其特征在于步驟(3)所述的注射用促黃體激素釋放激素選用注射用促黃體素釋放激素A2。
5.如權(quán)利要求
I所述的一種黃姑魚的人工催產(chǎn)受精及家系建立方法，其特征在于步驟(3)所述的雌魚的第二次注射時(shí)間和雄魚的注射時(shí)間都要選在早上的8:00。
6.如權(quán)利要求
I所述的一種黃姑魚的人工催產(chǎn)受精及家系建立方法，其特征在于步驟(4)所述的效應(yīng)時(shí)間為當(dāng)培育水溫為20°C時(shí)催產(chǎn)效應(yīng)時(shí)間為31-32h，當(dāng)培育溫度為22°C時(shí)催產(chǎn)效應(yīng)時(shí)間為29-30h。
7.如權(quán)利要求
I所述的一種黃姑魚的人工催產(chǎn)受精及家系建立方法，其特征在于步驟(5)所述的I對(duì)I人工受精采用的是干法受精。
專利摘要
一種黃姑魚的人工催產(chǎn)受精及家系建立方法，屬于魚類的養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域：
。步驟包括1.親魚的培育及營養(yǎng)強(qiáng)化；2.催產(chǎn)親魚的選擇；3.催產(chǎn)劑的選擇以及劑量；4.催產(chǎn)時(shí)間及溫度的選擇；5.人工受精及家系建立。本發(fā)明在黃姑魚性腺發(fā)育規(guī)律的基礎(chǔ)上，確定親本的最佳催產(chǎn)期和催產(chǎn)劑，建立催產(chǎn)親體培育溫度和催產(chǎn)效應(yīng)時(shí)間的關(guān)系，催產(chǎn)成功率高，產(chǎn)卵時(shí)間統(tǒng)一，產(chǎn)卵量多，實(shí)現(xiàn)了對(duì)親本的按需供卵。
文檔編號(hào)A01K61/00GKCN102870719SQ201210420294
公開日2013年1月16日 申請(qǐng)日期2012年10月29日
發(fā)明者樓寶, 薛寶貴, 徐冬冬, 史會(huì)來, 詹煒, 辛儉, 毛國民, 祝家俊 申請(qǐng)人:浙江省海洋水產(chǎn)研究所導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan