本發(fā)明屬于細(xì)胞培養(yǎng)，具體涉及一種人源神經(jīng)干細(xì)胞保存液及其制備方法。
背景技術(shù)：
1、神經(jīng)干細(xì)胞(neural?stem?cells，nsc)是干細(xì)胞家族中的重要成員，來(lái)源于發(fā)育早期的外胚層，具有自我更新和分化潛能，可以部分替代丟失和受損的神經(jīng)細(xì)胞，用于修復(fù)受損的神經(jīng)系統(tǒng)。盡管神經(jīng)干細(xì)胞在治療阿爾茨海默癥等神經(jīng)退行性疾病的詳細(xì)機(jī)理尚不清楚，但其臨床應(yīng)用越來(lái)越受到關(guān)注，并且取得一定的成果，目前已成為未來(lái)生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域廣泛關(guān)注的焦點(diǎn)。
2、目前，有資質(zhì)實(shí)現(xiàn)高通量分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增人源神經(jīng)干細(xì)胞的國(guó)內(nèi)機(jī)構(gòu)很少，但是人源神經(jīng)干細(xì)胞的臨床應(yīng)用范圍十分廣泛。神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)已趨向成熟，神經(jīng)干細(xì)胞治療應(yīng)用也很深入，然而神經(jīng)干細(xì)胞臨床項(xiàng)目和受眾面廣泛的神經(jīng)干細(xì)胞治療往往涉及細(xì)胞制備單位和細(xì)胞移植單位之間的長(zhǎng)途運(yùn)輸。活細(xì)胞是細(xì)胞制品的關(guān)鍵有效成分，長(zhǎng)時(shí)間的運(yùn)輸對(duì)細(xì)胞活力的維持提出高質(zhì)量的要求。因此，迫切需要開發(fā)一種神經(jīng)干細(xì)胞保存液，使神經(jīng)干細(xì)胞在此保護(hù)液中活性持久維持，滿足運(yùn)輸?shù)絿?guó)內(nèi)大多數(shù)地區(qū)及周邊國(guó)家的需求，同時(shí)能夠直接用于人體，安全無(wú)毒。
3、目前，國(guó)內(nèi)干細(xì)胞機(jī)構(gòu)通常采用生理鹽水、細(xì)胞培養(yǎng)基作為臨床干細(xì)胞應(yīng)用的溶液介質(zhì)。生理鹽水安全便利，常作為輸注介質(zhì)，然而在生理鹽水中的干細(xì)胞活力下降速度快，僅用生理鹽水作細(xì)胞保存液的方法只適合短暫保存或即時(shí)使用的干細(xì)胞制品。細(xì)胞培養(yǎng)基也常作為細(xì)胞保護(hù)液的主要成分，其提供細(xì)胞生長(zhǎng)代謝所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，包括氨基酸、糖類、無(wú)機(jī)鹽、維生素等，對(duì)于維持細(xì)胞滲透壓及活力有較好的作用。然而，目前國(guó)內(nèi)大部分細(xì)胞培養(yǎng)基是科研級(jí)應(yīng)用，不能應(yīng)用于臨床研究。同時(shí)由于生產(chǎn)廠家、生產(chǎn)方法的不同，細(xì)胞培養(yǎng)基的成本、質(zhì)量也不等，較好質(zhì)量的細(xì)胞培養(yǎng)基價(jià)格更貴。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問(wèn)題，本發(fā)明的主要目的是提供一種人源神經(jīng)干細(xì)胞保存液，其能使人源神經(jīng)干細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中保持高的細(xì)胞活率。
2、本發(fā)明的另一目的是提供所述人源神經(jīng)干細(xì)胞保存液的制備方法。
3、本發(fā)明的再一目的是提供一種人源神經(jīng)干細(xì)胞懸液，保存72小時(shí)后細(xì)胞活率仍不低于90％。
4、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
5、本發(fā)明提供一種人源神經(jīng)干細(xì)胞保存液，其包含：30mm鉀離子，30mm鈉離子，0.5mm鎂離子，5mm磷酸二氫根離子，5mm氫氧根離子，20mm醋酸根離子，32mm氯離子，5mm葡萄糖，200mm山梨醇和純水。
6、作為優(yōu)選，所述葡萄糖為臨床批準(zhǔn)使用的葡萄糖溶液。
7、作為優(yōu)選，所述鉀離子來(lái)自于氯化鉀；
8、所述鎂離子來(lái)自于六水合氯化鎂；
9、所述磷酸二氫根離子來(lái)自于二水合磷酸二氫鈉；
10、所述氫氧根離子來(lái)自于氫氧化鈉；
11、所述醋酸根離子來(lái)自于丙酮酸鈉；
12、所述鈉離子來(lái)自于氫氧化鈉、二水合磷酸二氫鈉和丙酮酸鈉；
13、所述氯離子來(lái)自于氯化鉀和六水合氯化鎂。
14、作為優(yōu)選，所述人源神經(jīng)干細(xì)胞保存液為無(wú)細(xì)菌、病毒、支原體污染且內(nèi)毒素含量<5eu/ml的液態(tài)介質(zhì)。
15、本發(fā)明還提供所述人源神經(jīng)干細(xì)胞保存液的制備方法，包括：將氯化鉀、氫氧化鈉、二水合磷酸二氫鈉、六水合氯化鎂、丙酮酸鈉、葡萄糖和山梨醇混合，邊加純水邊攪拌均勻，定容至100ml后，用250ml的0.22μm濾器過(guò)濾，即得。
16、本發(fā)明還提供一種人源神經(jīng)干細(xì)胞懸液，制備方法包括：所述人源神經(jīng)干細(xì)胞500g離心3min，棄去上清后，所得保存液重懸人源神經(jīng)干細(xì)胞，調(diào)整其濃度為1-9×10^6/ml，懸液分裝，轉(zhuǎn)移至2-8℃保存。
17、作為優(yōu)選，所述人源神經(jīng)干細(xì)胞懸液中人源神經(jīng)干細(xì)胞的濃度為2-5×10^6/ml。
18、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明的人源神經(jīng)干細(xì)胞保存液延長(zhǎng)神經(jīng)干細(xì)胞的活率維持時(shí)間，利用現(xiàn)有交通工具擴(kuò)大神經(jīng)干細(xì)胞的物理應(yīng)用范圍，降低保護(hù)液的制備成本，來(lái)源廣泛、方法簡(jiǎn)單且安全可靠，臨床可以直接應(yīng)用，經(jīng)測(cè)試神經(jīng)干細(xì)胞在該保護(hù)液中保存72小時(shí)后，細(xì)胞活率仍不低于90％。
1.一種人源神經(jīng)干細(xì)胞保存液，其特征在于，
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人源神經(jīng)干細(xì)胞保存液，其特征在于，所述葡萄糖為臨床批準(zhǔn)使用的葡萄糖溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人源神經(jīng)干細(xì)胞保存液，其特征在于，所述鉀離子來(lái)自于氯化鉀；
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人源神經(jīng)干細(xì)胞保存液，其特征在于，所述人源神經(jīng)干細(xì)胞保存液為無(wú)細(xì)菌、病毒、支原體污染且內(nèi)毒素含量<5eu/ml的液態(tài)介質(zhì)。
5.權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述人源神經(jīng)干細(xì)胞保存液的制備方法，其特征在于，包括：將氯化鉀、氫氧化鈉、二水合磷酸二氫鈉、六水合氯化鎂、丙酮酸鈉、葡萄糖和山梨醇混合，邊加純水邊攪拌均勻，定容至100ml后，用250ml的0.22μm濾器過(guò)濾，即得。
6.一種人源神經(jīng)干細(xì)胞懸液，其特征在于，其包含權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述人源神經(jīng)干細(xì)胞保存液，濃度為1-9×10^6/ml；
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的人源神經(jīng)干細(xì)胞懸液，其特征在于，所述人源神經(jīng)干細(xì)胞懸液中人源神經(jīng)干細(xì)胞的濃度為2-5×10^6/ml。