本發(fā)明屬于組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種金錢蒲的組織培養(yǎng)繁育方法。

背景技術(shù)：

金錢蒲(acorusgramineussoland)是天南星科菖蒲屬，多年生挺水草本植物，分枝叢生。產(chǎn)江蘇、浙江、江西、湖北、湖南、廣東、廣西、陜西、甘肅、四川、貴州、云南。金錢蒲常綠、葉叢翠綠而具光澤，端莊秀麗，具有香氣，適宜水景岸邊及水體綠化。也可盆栽觀賞或作布景用。葉、花序還可作插花材料。全株芳香，可作香料或驅(qū)蚊蟲；根莖可入藥，味辛，性溫。化濕開胃，開竅豁痰，醒神益智。除作挺水植物觀賞外，還可作沉水植物或地被植物觀賞，是一種新優(yōu)的觀葉水生花卉。具有較高的觀賞及經(jīng)濟價值。隨著室內(nèi)觀賞植物的發(fā)展，其產(chǎn)品供應(yīng)一直處于緊缺的狀況。

金錢蒲繁殖方法主要是根莖分株繁殖，但分株繁殖數(shù)量少，易損壞株型，恢復(fù)很慢且受季節(jié)限制，不能在短期內(nèi)獲得大量種苗；難以進行規(guī)?；?、標準化生產(chǎn)和大面積的推廣。因此探索一種快速有效金錢蒲的繁育方法勢在必行。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有的根莖繁殖的傳統(tǒng)繁殖種苗的方法，導(dǎo)致繁殖速度慢，繁殖系數(shù)低，材料要求高、用量大、難以規(guī)模化生產(chǎn)等缺陷和不足，從而提供一種能適宜金錢蒲工廠化組培快繁的方法及專用培養(yǎng)基，以滿足金錢蒲優(yōu)質(zhì)種苗的大規(guī)模生產(chǎn)需要。

即本發(fā)明的第一目的在于提供一種金錢蒲的組織培養(yǎng)方法，包括以下步驟：

1)外植體消毒：對金錢蒲外植體進行消毒；

2)誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)：將消毒的金錢蒲外植體接入到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至長成莖尖苗，繼續(xù)培養(yǎng)誘導(dǎo)增殖叢生芽的分化；

3)繼代培養(yǎng)：將分化誘導(dǎo)的外植體轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中，繼代培養(yǎng)25～30d后，轉(zhuǎn)入相同增殖培養(yǎng)基相同條件下繼代1次～2次，將培養(yǎng)出誘導(dǎo)分化的苗轉(zhuǎn)入步驟(4)培養(yǎng)；未成苗的叢生芽轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中，并在與繼代培養(yǎng)所述的相同的培養(yǎng)條件下繼續(xù)培養(yǎng)，待培養(yǎng)出誘導(dǎo)分化的苗轉(zhuǎn)入步驟(4)培養(yǎng)；

4)生根培養(yǎng)：將獲得的苗接種到生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至植株基部長出根；

5)煉苗與移栽：將植株基部有根的幼苗進行常規(guī)煉苗，消毒后移栽至裝育苗袋中生長，即得金錢蒲移栽苗。

優(yōu)選地，在本發(fā)明的所述金錢蒲的組織培養(yǎng)方法中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基與增殖培養(yǎng)基相同，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)與繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件相同。

優(yōu)選地，在本發(fā)明的所述金錢蒲的組織培養(yǎng)方法中，所述步驟1)的金錢蒲外植體為金錢蒲根莖兩側(cè)萌發(fā)的莖尖。

優(yōu)選地，在本發(fā)明的所述金錢蒲的組織培養(yǎng)方法中，所述步驟1)的消毒方法為用洗衣粉清洗干凈，流動的自來水沖洗1小時，再用72％硫酸鏈霉素浸泡3小時。再用在超凈環(huán)境下用質(zhì)量分數(shù)為75％的酒精浸泡30-40s后，依次放入質(zhì)量分數(shù)為0.1％的氯化汞溶液中消毒20min，吐溫兩滴，次氯酸鈉混合液中消毒15min，再用無菌水沖洗4～5次，每次1～2min；其中所述的次氯酸鈉混合液是由次氯酸鈉溶液加入吐溫20混合而成，次氯酸鈉溶液與吐溫20的配比是：質(zhì)量分數(shù)為2％的次氯酸鈉溶液100ml中加入2滴吐溫20。

優(yōu)選地，在本發(fā)明的所述金錢蒲的組織培養(yǎng)方法中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基的配方為:

ms基本培養(yǎng)液

優(yōu)選地，在本發(fā)明的所述金錢蒲的組織培養(yǎng)方法中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)與繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為在溫度為25℃±2℃，光照強度為1800lx～2000lx，，光照時間為10～12h/d；所述誘導(dǎo)培養(yǎng)、生根培養(yǎng)的條件為溫度為25℃±2℃，光照強度為2000lx，，光照時間為10～12h/d。

優(yōu)選地，在本發(fā)明的所述金錢蒲的組織培養(yǎng)方法中，所述步驟4)中生根培養(yǎng)基的配方為

ms基本培養(yǎng)液

因此，本發(fā)明還提供了用于金錢蒲的組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，包括述誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基與生根培養(yǎng)基。

優(yōu)選地，本發(fā)明的用于金錢蒲的組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基的配方為:

ms基本培養(yǎng)液

所述生根培養(yǎng)基的配方為

ms基本培養(yǎng)液

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點：

1、本發(fā)明所述的金錢蒲繁育的專用培養(yǎng)基和金錢蒲的繁育方法，配置了特別適宜金錢蒲的組培繁育的專用培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件及方法，采用該專用培養(yǎng)基及方法繁殖速度快，25～30天為一個周期，一個周期繁殖倍數(shù)可達4～5倍；生根培養(yǎng)25～30天左右，每株植株即可生長出5～7條根，其苗健壯，根系發(fā)達，利于出瓶后生長。

2、本發(fā)明首次提出了對整個金錢蒲種苗生產(chǎn)技術(shù)流程中關(guān)鍵環(huán)節(jié)的技術(shù)方案，同步進行芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)基與芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)基相同，培養(yǎng)條件基本相同，既達到了好的效果又簡化了組培技術(shù)的培養(yǎng)程序，大大節(jié)約了成本和生產(chǎn)時間，還解決了常規(guī)繁育體系生產(chǎn)的種苗親本來源復(fù)雜，種苗質(zhì)量不穩(wěn)定的難題，本發(fā)明方法，能使種苗性狀穩(wěn)定，種苗來源單一，適宜標準化、工廠化規(guī)?；a(chǎn)，為市場提供了統(tǒng)一標準的優(yōu)良種苗。

3、本發(fā)明方法生產(chǎn)的無菌生根苗直接移栽進入育苗袋中管理，省去了組培苗營養(yǎng)缽移栽的環(huán)節(jié)，移栽成活的種苗便于運輸，移栽苗適應(yīng)性強，摘去育苗袋后即可直接栽種。

4、本發(fā)明繁育方法在培養(yǎng)室內(nèi)即可實現(xiàn)周年生產(chǎn)，既節(jié)約了土地資源，又提高了經(jīng)濟效益，克服了金錢蒲種苗無法周年進行生產(chǎn)的難點。

說明書附圖

圖1為本發(fā)明的一個實施例中的金錢蒲外植體消毒及誘導(dǎo)外觀圖；

圖2為本發(fā)明的一個實施例中的金錢蒲繼代培養(yǎng)圖；

圖3為本發(fā)明的一個實施例中的金錢蒲生根培養(yǎng)圖；

圖4為本發(fā)明的一個實施例中的金錢蒲煉苗與移栽效果圖。

具體實施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明中的實施例，對本發(fā)明中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述。顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。

實施例1

(1)如圖1所示，取健康的金錢蒲根莖兩側(cè)萌發(fā)的莖尖為外植體用洗衣粉清洗干凈，流動的自來水沖洗1小時，再用72％硫酸鏈霉素浸泡3小時。再用在超凈環(huán)境下用質(zhì)量分數(shù)為75％的酒精浸泡40s后，依次放入質(zhì)量分數(shù)為0.1％的氯化汞溶液中消毒20min，吐溫兩滴，次氯酸鈉混合液中消毒15min，吐溫兩滴，再用無菌水沖洗4～5次，每次1～2min；其中所述的次氯酸鈉混合液是由次氯酸鈉溶液加入吐溫20混合而成，次氯酸鈉溶液與吐溫20的配比是：質(zhì)量分數(shù)為2％的次氯酸鈉溶液100ml中加入2滴吐溫20。

(2)誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)：如圖2所示，將步驟(1)獲得的金錢蒲根莖的側(cè)株的萌發(fā)的無菌莖尖接入盛有下列誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中：

ms基本培養(yǎng)液

在溫度為25℃條件下培養(yǎng)20天，光照強度為2000lx，光照時間為12h/d的條件下，培養(yǎng)至長成莖尖苗，繼續(xù)培養(yǎng)誘導(dǎo)增殖叢生芽的分化；

(3)繼代培養(yǎng)：將步驟(2)分化誘導(dǎo)的芽轉(zhuǎn)接到盛有與步驟(2)所述的誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基配方相同的新的誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，在光照強度為2000lx，溫度為25℃，光照時間為12h/d的條件下，繼代培養(yǎng)30天后，再轉(zhuǎn)接到盛有與步驟(2)所述的誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基配方相同的新的誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，并在與繼代培養(yǎng)所述的相同的培養(yǎng)條件下繼代培養(yǎng)30天，如此反復(fù)，待增殖基數(shù)達到所需的數(shù)量時，將培養(yǎng)出誘導(dǎo)分化的苗轉(zhuǎn)入步驟(4)培養(yǎng)；繼代培養(yǎng)的次數(shù)可以根據(jù)需要的組培苗的數(shù)量而定，可以只繼代培養(yǎng)一次，也可以繼代培養(yǎng)2次以上。

未成苗的叢生芽轉(zhuǎn)接到盛有與步驟(2)所述的誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基配方相同的新的誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，并在與繼代培養(yǎng)所述的相同的培養(yǎng)條件下繼續(xù)培養(yǎng)，待成苗后，將培養(yǎng)出的苗轉(zhuǎn)入步驟(4)培養(yǎng)；

(4)生根培養(yǎng)基：將步驟(3)獲得的苗接種到盛有下列生根培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中：

ms基本培養(yǎng)液

如圖3所示，在光照強度為2000lx，溫度為25℃，光照時間為12h/d的條件下培養(yǎng)至植株基部長出根；

(5)如圖4所示，將步驟(4)植株已長有根的培養(yǎng)瓶置于大棚內(nèi)進行常規(guī)煉苗5天，再將培養(yǎng)瓶內(nèi)的苗取出，按常規(guī)洗凈苗上的培養(yǎng)基，放入質(zhì)量分數(shù)為0.1％的多菌靈溶液中消毒2min后，移栽至裝有下列基質(zhì)的育苗袋中，所述基質(zhì)由泥炭、珍珠巖和蛭石混合而成，泥炭、珍珠巖和蛭石的質(zhì)量比為：泥炭：珍珠巖：蛭石＝7:2:1；在噴灌噴水、遮陰和常規(guī)施肥管理條件下，生長35天后，即得金錢蒲移栽苗。

實施例2

(1)實施例2除以下措施不同外其余措施與實施例1相同，不再贅述。

取健康的金錢蒲根莖兩側(cè)萌發(fā)的莖尖為外植體，在超凈環(huán)境下用質(zhì)量分數(shù)為75％的酒精浸泡30s后，依次放入質(zhì)量分數(shù)為0.1％的氯化汞溶液中消毒18min，吐溫兩滴，次氯酸鈉混合液中消毒16min，吐溫兩滴。

(2)誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)：將步驟(1)獲得的金錢蒲根莖的側(cè)株的萌發(fā)的無菌莖尖接入盛有下列誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中：

ms基本培養(yǎng)液

在溫度為23℃條件下培養(yǎng)15天，光照強度為1800lx，光照時間為10h/d的條件下，培養(yǎng)至長成莖尖苗，繼續(xù)培養(yǎng)誘導(dǎo)增殖叢生芽的分化；

(3)繼代培養(yǎng)：將步驟(2)分化誘導(dǎo)的芽轉(zhuǎn)接到盛有與步驟(2)所述的誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基配方相同的新的誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，在光照強度為1800lx，溫度為23℃，光照時間為10h/d的條件下，繼代培養(yǎng)25天后，再轉(zhuǎn)接到盛有與步驟(2)所述的誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基配方相同的新的誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，并在與繼代培養(yǎng)所述的相同的培養(yǎng)條件下繼代培養(yǎng)25天，如此反復(fù)，待增殖基數(shù)達到所需的數(shù)量時，將培養(yǎng)出誘導(dǎo)分化的苗轉(zhuǎn)入步驟(4)培養(yǎng)；未成苗的叢生芽轉(zhuǎn)接到盛有與步驟(2)所述的誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基配方相同的新的誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，并在與繼代培養(yǎng)所述的相同的培養(yǎng)條件下繼續(xù)培養(yǎng)，待成苗后，將培養(yǎng)出的苗轉(zhuǎn)入步驟(4)培養(yǎng)；

(4)生根培養(yǎng)基：將步驟(3)獲得的苗接種到盛有下列生根培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中：

ms基本培養(yǎng)液

在光照強度為1800lx，溫度為23℃，光照時間為10h/d的條件下培養(yǎng)至植株基部長出根；

(5)將步驟(4)植株已長有根的培養(yǎng)瓶置于大棚內(nèi)進行常規(guī)煉苗3天，再將培養(yǎng)瓶內(nèi)的苗取出，按常規(guī)洗凈苗上的培養(yǎng)基，放入質(zhì)量分數(shù)為0.2％的多菌靈溶液中消毒1min后，移栽至裝有下列基質(zhì)的育苗袋中，所述基質(zhì)由泥炭和珍珠巖混合而成，泥炭、腐質(zhì)土、珍珠巖和蛭石的質(zhì)量比為：泥炭：珍珠巖＝7:3:1:0.5，在噴灌噴水、遮陰和常規(guī)施肥管理條件下，生長40天后，即得金錢蒲移栽苗。

以上各實施例繁殖速度快，25～30天為一個繁殖周期，一個周期繁殖倍數(shù)可達4～5倍；生根培養(yǎng)25～30天左右，每株植株即可生長出5～7條根，其苗健壯，根系發(fā)達，利于出瓶后生長

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。