本發(fā)明屬于生物技術(shù)中植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域,具體涉及一種加速向日葵世代進程的方法和應(yīng)用。
背景技術(shù):
向日葵(helianthusannuusl.)屬于菊科,為一年生草本雙子葉植物。向日葵原產(chǎn)于北美洲,分為油用型和食用型,染色體條數(shù)為34條,野生向日葵包括二倍體、四倍體和六倍體,栽培向日葵為二倍體。向日葵中富含優(yōu)質(zhì)的植物油脂和蛋白質(zhì),尤其含有豐富的亞油酸,是世界上重要的油料作物之一。由于向日葵具有耐鹽堿、抗干旱和耐貧瘠的優(yōu)良特性,對土壤有非常廣泛的適應(yīng)性,因此,在我國北方干旱、降雨少和土壤鹽堿化嚴重的地區(qū)如內(nèi)蒙古、新疆等地,向日葵的種植已經(jīng)成為了一種趨勢。向日葵既可以作為油料作物,也可以作為茶余飯后的休閑食品,還可以發(fā)展為生物柴油,而向日葵秸稈還可以作為青儲飼料,具有非常重要的經(jīng)濟價值,是非常重要的經(jīng)濟作物。
在向日葵育種中,雜交種的農(nóng)藝性狀表現(xiàn)良好是一個非常重要的目標,獲得優(yōu)良商品性雜交種的關(guān)鍵在于短時間內(nèi)獲得配制雜交種的純合親本。一個純合不育系材料的獲得至少需要6代,但是,傳統(tǒng)的向日葵育種一年一般只能做一代,如果結(jié)合南繁,一年也只能做2代。此外,向日葵在授粉6天后開始萌發(fā),在授粉16天后就開始休眠,一般休眠期保持45-60天,種子成熟占整個生育期的50%-60%。因此,向日葵育種時間比較長,在短時間內(nèi)難以獲得雜交種的純合親本。為了縮短向日葵育種時間,研究人員采用幼胚培養(yǎng)技術(shù)培育純合不育系,在育種過程中可以減少從開花到種子成熟的這段時間,縮短了整個生育周期,加快每一代的時間,進而可以實現(xiàn)在短時間內(nèi)獲得雜交種純合親本的目的。如《向日葵幼胚培養(yǎng)關(guān)鍵技術(shù)的研究》(崔良基,張鑒,劉秋,沈軍,遼寧省農(nóng)科院油料研究所)中公開了采用向日葵幼胚育種,可在不影響世代間選擇進度及遺傳背景的前提下,大大縮短育種周期,其中對幼胚培養(yǎng)基、取胚時期、溫度光照、脫分化培養(yǎng)、煉苗等條件進行了篩選優(yōu)化,最終得到,選擇授粉后8-10天的幼胚培養(yǎng)最佳,在25℃、光照7000lx條件下,幼胚在砂胚上即可順利萌動,為了協(xié)調(diào)根莖發(fā)育,使用含有生長素與細胞分裂素比例為1:1的幼胚培養(yǎng)基,在幼胚萌發(fā)后,需要將所述幼胚轉(zhuǎn)入脫分化培養(yǎng)基中脫分化培養(yǎng)10天,然后進行移栽煉苗轉(zhuǎn)至大田中。然而上述方案中還存在如下缺陷:(1)在幼胚培養(yǎng)時期,其溫度和光照的控制僅有利于幼胚子葉發(fā)綠,無法促進幼胚生根發(fā)育,需要借助植物激素協(xié)調(diào)根莖發(fā)育,而植物激素的使用,使得成本提高,且使用植物激素獲得的植株在后期發(fā)育中根系不發(fā)達,成活率較低;(2)由于在幼胚培養(yǎng)時期采用強光培育,幼胚在短時間內(nèi)萌發(fā),適應(yīng)性差,需要進行脫分化培養(yǎng)后才能進行煉苗移栽,不能直接進行煉苗移栽,步驟繁瑣,導(dǎo)致整個育種周期延長,且育成的植株成活率較低。
技術(shù)實現(xiàn)要素:
因此,本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于克服現(xiàn)有技術(shù)中利用幼胚培育技術(shù)進行向日葵幼胚培育周期長、成活率低和成本高的問題,從而提供一種培育周期短、成活率高和成本低的加速向日葵世代進程的方法。
為此,本發(fā)明提供了一種加速向日葵世代進程的方法,包括如下步驟:
(1)選取授粉后10-15天的向日葵種子進行消毒滅菌,然后從所述種子中取出幼胚并接種于裝有向日葵幼胚培養(yǎng)基的器皿中,封口,備用;
(2)將步驟(1)中所述的接種于培養(yǎng)基中的幼胚置于中在常溫條件下黑暗培養(yǎng),然后在常溫條件下交替進行光照培養(yǎng)和黑暗培養(yǎng),得到小植株,備用;
(3)將步驟(2)獲得的小植株進行煉苗移栽;
(4)將步驟(3)中得到的小植株進行溫室栽培。
所述的加速向日葵世代進程的方法,在所述步驟(2)中,所述的接種于培養(yǎng)基中的幼胚黑暗培養(yǎng)1-2天。優(yōu)選的,所述的接種于培養(yǎng)基中的幼胚黑暗培養(yǎng)2天。
所述的加速向日葵世代進程的方法,在所述步驟(2)中,所述的接種于培養(yǎng)基中的幼胚黑暗培養(yǎng)期間,在無菌條件下所述幼胚進行轉(zhuǎn)接一次。優(yōu)選的,所述的接種于培養(yǎng)基中的幼胚置于培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)1天后,在無菌條件下將所述幼胚進行轉(zhuǎn)接,所述轉(zhuǎn)接采取根尖向下半埋插入培養(yǎng)。
所述的加速向日葵世代進程的方法,在所述步驟(2)中,所述接種于培養(yǎng)基中的幼胚在常溫條件下交替進行光照培養(yǎng)和黑暗培養(yǎng)3-5天,每天光照13-19h,光照強度為1800-2200lx。
所述的加速向日葵世代進程的方法,在所述步驟(2)中,所述接種于培養(yǎng)基中的幼胚交替進行光照培養(yǎng)和黑暗培養(yǎng)4天,每天光照16h,光照強度為2000lx。
所述的加速向日葵世代進程的方法,在所述步驟(3)中,將步驟(2)獲得的小植株移栽到育苗塊中,在日光溫室中進行煉苗5-8天。優(yōu)選的,控制所述日光溫室中白天的平均溫度為33-38℃,濕度為28-32%,夜間的平均溫度為13-18℃,濕度為48-52%。優(yōu)選的,控制所述日光溫室中白天的平均溫度為36℃,濕度為30%,夜間的平均溫度為15℃,濕度為50%。優(yōu)選的,在煉苗期間,每天施予水溶肥和水質(zhì)量比為1:1800-2200的水溶肥溶液,所述水溶肥中的n、p、k元素各自所占的質(zhì)量百分數(shù)分別為20%。
所述的加速向日葵世代進程的方法,在所述步驟(3)中,將煉苗后的小植株移栽到含有所述混合土和沙土的混合物中繼續(xù)固根壯苗5-10天,所述混合土中含有蛭石、珍珠巖和基質(zhì)的質(zhì)量比為1:1-2:1-3。優(yōu)選的,所述混合土和沙土的質(zhì)量比為2:1,所述混合土中含有蛭石、珍珠巖和基質(zhì)的質(zhì)量比為1:1:2。
所述的加速向日葵世代進程的方法,在所述步驟(4)中,將煉苗移栽后的小植株移栽含有所述混合土和沙土的混合物中進行溫室栽培,所述混合土和沙土的質(zhì)量比為1-3:1。優(yōu)選的,所述混合土和沙土的質(zhì)量比為2:1。優(yōu)選的,在所述溫室栽培中,控制溫室的最低溫度保持在14-16℃,濕度為48-52%。優(yōu)選的,在所述溫室栽培中,在所述小植株的整個生育期均施予水溶肥:水=1:2000的水溶肥溶液,每2-3天施肥一次,所述水溶肥中n、p、k元素各自所占的質(zhì)量百分數(shù)分別為20%。
所述的加速向日葵世代進程的方法,在所述步驟(1)中,所述向日葵種子在無菌條件下,先用無菌水清洗,然后用體積濃度為70-80%的乙醇浸泡0.5-1.5min,然后用質(zhì)量濃度為1-3%的次氯酸鈉和吐溫80的混合溶液消毒13-18min,再用無菌水清洗3-5次,最后加入無菌水浸泡,備用。優(yōu)選的,采用質(zhì)量濃度為1-3%的次氯酸鈉和吐溫80體積比為90-110:1的混合溶液消毒。更優(yōu)選的,采用質(zhì)量濃度為1-3%的次氯酸鈉和吐溫80體積比為100:1的混合溶液消毒。
優(yōu)選的,在所述步驟(1)中,所述向日葵種子在無菌條件下,先用無菌水清洗,然后用體積濃度為75%的乙醇浸泡1min,然后用質(zhì)量濃度為2%的次氯酸鈉和吐溫80的混合溶液消毒15min,再用無菌水清洗3-5次,最后加入無菌水浸泡,備用。
優(yōu)選的,在所述步驟(1)中,選取授粉后12-14天的向日葵種子進行消毒滅菌。
所述的加速向日葵世代進程的方法,所述幼胚培養(yǎng)基為改良b5培養(yǎng)基或改良ms培養(yǎng)基,所述改良b5培養(yǎng)基為b5培養(yǎng)基中含有25-35g/l的蔗糖和5-9g/l的瓊脂,ph值為5.5-6;所述改良ms培養(yǎng)基為ms培養(yǎng)基中含有25-35g/l蔗糖和5-9g/l瓊脂,ph值為5.5-6。
優(yōu)選的,所述的加速向日葵世代進程的方法,所述幼胚培養(yǎng)基為改良b5培養(yǎng)基或改良ms培養(yǎng)基,所述改良b5培養(yǎng)基為b5培養(yǎng)基中含有30g/l的蔗糖和7g/l的瓊脂,ph值為5.8;所述改良ms培養(yǎng)基為ms培養(yǎng)基中含有30g/l蔗糖和7g/l瓊脂,ph值為5.8。
本發(fā)明技術(shù)方案,具有如下優(yōu)點:
(1)本發(fā)明所述的加速向日葵世代進程的方法,包括如下步驟:(1)選取授粉后10-15天的向日葵的種子進行消毒滅菌,然后從所述種子中取出幼胚并接種到裝有向日葵的幼胚培養(yǎng)基的器皿中,封口,備用;(2)將步驟(1)中所述的接種于培養(yǎng)基中的幼胚先置于常溫條件下黑暗培養(yǎng),然后在常溫條件下交替進行光照培養(yǎng)和黑暗培養(yǎng),得到小植株,備用;(3)將步驟(2)獲得的小植株進行煉苗移栽;(4)將步驟(3)中得到的小植株進行溫室栽培;在上述方法中,通過先將幼胚進行黑暗培養(yǎng),使得幼胚的根尖開始萌發(fā),逐漸向培養(yǎng)基扎入,然后交替進行光照培養(yǎng)和黑暗培養(yǎng),小植株的主根發(fā)達,須根逐漸增多,胚軸伸長,兩片子葉變綠,向兩側(cè)伸展,并開始抽出真葉,可以得到根系發(fā)達,子葉健壯的小植株,顯著提高植株生根和育苗成活率,而且在幼胚培養(yǎng)后可以直接進行煉苗移栽,省略了將植株進行脫分化培養(yǎng)的步驟,步驟簡單,縮短了育苗周期,所用培養(yǎng)基中未添加植物激素,不僅顯著降低了成本,而且避免了植株依賴植物激素生根,保證植株根系發(fā)達在后續(xù)的移栽煉苗和溫室培養(yǎng)中適應(yīng)性更強,育苗成活率更高。
(2)本發(fā)明所述的加速向日葵世代進程的方法,在所述步驟(2)中,所述的接種于培養(yǎng)基中的幼胚黑暗培養(yǎng)2天,進一步使得幼胚的根尖開始萌發(fā),逐漸向培養(yǎng)基扎入。
(3)本發(fā)明所述的加速向日葵世代進程的方法,在所述步驟(2)中,所述的接種于培養(yǎng)基中的幼胚黑暗培養(yǎng)期間,在無菌條件下所述幼胚進行轉(zhuǎn)接一次,通過轉(zhuǎn)接保證所述的幼胚在萌發(fā)生根時有足夠的營養(yǎng)成分,使得小植株的根系生長更加健壯。
(4)本發(fā)明所述的加速向日葵世代進程的方法,在所述步驟(2)中,所述接種于培養(yǎng)基中的幼胚在常溫條件下交替進行光照培養(yǎng)和黑暗培養(yǎng)3-5天,每天光照培養(yǎng)13-19h,光照強度為1800-2200lx,進一步使得小植株的主根發(fā)達,須根逐漸增多,胚軸伸長,兩片子葉變綠,向兩側(cè)伸展,開始抽出真葉。
(5)本發(fā)明所述的加速向日葵世代進程的方法,在所述步驟(3)中,將步驟(2)獲得的小植株移栽到育苗塊中,在日光溫室中進行煉苗5-8天,將煉苗后的小植株移栽到含有所述混合土和沙土的混合物中固根壯苗5-10天,所述混合土中含有蛭石、珍珠巖和基質(zhì)的質(zhì)量比為1:1-2:1-3;采用上述方法進行煉苗移栽獲得的植株能夠保證在后期植株根系繼續(xù)保持發(fā)達,生長健壯。
具體實施方式
下述實施例中所使用的主要設(shè)備如下:
電子天平生產(chǎn)廠家為上海精密科學(xué)儀器有限公司,型號為:ja1003n;
微波爐生產(chǎn)廠家為美的,型號為m1-l213b;
高壓滅菌鍋生產(chǎn)廠家為上海申安醫(yī)療器械廠,型號為ldzx-50kbs;
雙人單面超凈工作臺生產(chǎn)廠家為蘇州凈化設(shè)備有限公司,型號為sw-cj-2d;
智能光照培養(yǎng)箱生產(chǎn)廠家為浙江托普儀器有限公司,型號為gtop-500d;
溫控電熱硫磺蒸發(fā)器生產(chǎn)廠家為溫州康泰蒸發(fā)器有限公司,型號為sjn-500。
本發(fā)明所使用的主要試劑如下:
b5基本培養(yǎng)基(干粉)生產(chǎn)廠家為sigma,型號為50l;
ms基本培養(yǎng)基(干粉)生產(chǎn)廠家為sigma,型號為10l;
蔗糖生產(chǎn)廠家為上海生工生物有限公司,型號為:s2792-500g;
瓊脂粉生產(chǎn)廠家為上海生工生物有限公司,型號為250g;
泥炭育苗塊生產(chǎn)廠家為捷菲,型號為33cm;
花朵朵水溶肥生產(chǎn)廠家為易樂施國際公司,型號為20-20-20。
砂培培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家為丹麥品氏托普,型號為0-6mm;
脫分化培養(yǎng)基:為ms培養(yǎng)基中含有0.05mg/l的naa,0.05mg/l的iba,30g/l的蔗糖,7g/l的瓊脂,ph=5.8;所述脫分化培養(yǎng)基按照常規(guī)方法配制。
植物生長調(diào)節(jié)劑naa(萘乙酸)生產(chǎn)廠家sigma,型號為5g;
iba(3-吲哚乙酸)生產(chǎn)廠家sigma,型號為5g;
下述實施例中所使用的向日葵品種為sh363。
下述實施例中,涉及到的所述改良b5培養(yǎng)基的配制方法為:稱量3.21gb5培養(yǎng)基干粉在盛有200ml水的大燒杯中攪拌溶解;之后,稱量30g蔗糖和7g瓊脂放于另一個盛有300ml水的燒杯中在微波爐中加熱溶解;然后,將完全溶解的蔗糖和瓊脂溶液倒入盛有b5培養(yǎng)基的燒杯中攪拌均勻,加水定容到1000ml,用1mol/l的naoh溶液調(diào)節(jié)ph值至5.8;最后將配制好的培養(yǎng)基裝入錐形瓶,用封口膜封口放于121℃高壓鍋中滅菌20min。
所述改良ms培養(yǎng)基的配制方法為:稱量4.74gms培養(yǎng)基干粉在盛有200ml水的大燒杯中攪拌溶解;之后,稱量30g蔗糖和7g瓊脂放于另一個盛有300ml水的燒杯中在微波爐中加熱溶解;然后,將完全溶解的蔗糖和瓊脂溶液倒入盛有ms培養(yǎng)基的燒杯中攪拌均勻,加水定容到1000ml,用1mol/l的naoh溶液調(diào)節(jié)ph值至5.8;最后將配制好的培養(yǎng)基裝入錐形瓶,用封口膜封口放于121℃高壓鍋中滅菌20min。
實施例1
本實施例所述的一種加速向日葵世代進程的方法,包括如下步驟:
(1)在向日葵授粉后10天,將向日葵的管狀花剝除,用小鑷子將未成熟的籽粒輕輕取出,放入小自封袋中,寫好編號,將封好的自封袋放于裝有冰塊的冰盒中,放于實驗室的4℃冰箱,備用,此時向日葵種子(籽粒)中的幼胚大小為完整胚的2/3;取上述向日葵種子,在無菌條件下,先用無菌水清洗1次,然后用體積濃度為75%的乙醇浸泡1min,質(zhì)量濃度為2%的次氯酸鈉和吐溫80以體積比100:1混合后的混合溶液消毒15min,再用無菌水清洗3-5次,最后,加入無菌水浸泡以防止向日葵種子快速氧化,備用;將上述消毒處理后的種子置于無菌濾紙上,用已滅菌和消毒好的小鑷子和解剖刀剝?nèi)シN皮和果皮,取出幼胚接種于裝有幼胚培養(yǎng)基的大培養(yǎng)皿中,每皿接種30枚幼胚,將接滿30枚幼胚的培養(yǎng)皿用封口膜將其封好,并在培養(yǎng)皿上寫好材料編號及接種日期,備用;所述幼胚培養(yǎng)基為改良b5培養(yǎng)基,所述改良b5培養(yǎng)基中含有30g/l蔗糖和7g/l瓊脂,ph值為5.8;
(2)將步驟(1)中接種于培養(yǎng)基中的幼胚先在25℃條件下全暗培養(yǎng)1天,再將其取出,在無菌條件下進行轉(zhuǎn)接,轉(zhuǎn)接采取根尖向下半埋插入培養(yǎng),將轉(zhuǎn)接好的幼胚繼續(xù)在25℃全暗培養(yǎng)1天,然后將其轉(zhuǎn)入25℃條件下交替進行光照培養(yǎng)和黑暗培養(yǎng)3天,每天光照培養(yǎng)16h,黑暗培養(yǎng)8h,在光照培養(yǎng)時控制光照強度為2000lx,得到根系發(fā)達、子葉健壯的小植株,所述植株生根成活率高達95%;
(3)將步驟(2)獲得的小植株進行煉苗移栽前,先將所需育苗塊提前半天用自來水浸泡1h,將步驟(2)獲得的小植株移栽到育苗塊中,在日光溫室中進行煉苗7天,在本實施例中煉苗的具體步驟為,將步驟(2)獲得的小植株根部的瓊脂洗去,用大鑷子將小植株的根尖向下,輕輕移入泡好的所述育苗塊中,將周圍的基質(zhì)完全覆蓋于所述小植株的根部,將移有小植株的育苗塊放于太空杯中,用保鮮膜將太空杯頂部封好,大鑷子在頂部扎大約10個洞,放于日光溫室培養(yǎng),控制日光溫室中白天的平均溫度為36℃,濕度為30%,夜間的平均溫度為15℃,濕度為50%,在育苗前三天避免強光直射,在培養(yǎng)過程中,育苗兩天時揭去一半所述保鮮膜,育苗三天時,將所述保鮮膜全部揭除,每天早上施肥:水質(zhì)量比為1:2000的水溶肥溶液,所述水溶肥中n、p、k元素各自所占的質(zhì)量百分數(shù)分別為20%,此時,小植株有四片真葉,真葉的長度大約為4cm,育苗成活率高達99%;將上述開瓶煉苗后的小植株移入盛有混合土:沙土質(zhì)量比為2:1的小花盆中固根壯苗10天,將所述小花盆放入托盤中,在施肥時將所述水溶肥溶液澆入大托盤中,這樣可以促使根系發(fā)達,所述混合土包括蛭石、珍珠巖和基質(zhì),所述蛭石、珍珠巖和基質(zhì)質(zhì)量比為1:1:2,育苗成活率高達99.8%;
(4)將步驟(3)中得到的6片真葉的小植株進行溫室栽培,移入盛有混合土:沙土為2:1的大花盆中,進行日常的溫室栽培管理,待所述小植株生長至下一次授粉10-15天為一個周期,即一個世代。所述溫室栽培管理,包括水肥管理和病蟲害管理,所述水肥管理:所述溫室的最低溫度保持在15℃,濕度為50%,在所述小植株整個生育期均澆水溶肥:水=1:2000的水肥混合液,水溶肥中n、p、k元素各自所占的質(zhì)量百分數(shù)分別為20%,平均2-3天澆一次水溶肥溶液,澆水時禁止從花盆上表面澆,而是要澆入放于花盆底部的托盤中,有利于根系的生長,只有發(fā)達的根系,植株才能生長健壯。所述病害管理可以使用硫磺熏蒸法,將硫磺加入溫控電熱蒸發(fā)器中,在夜間進行熏蒸,嚴重的情況下,兩天熏蒸一次,不嚴重時,一周熏蒸一次,直到白粉病完全消失,停止熏蒸。
所述蟲害管理可以噴施呋蟲胺,每周在夜間噴一次,直至白粉虱全部殺死,停止噴藥。
防治病蟲害的方法,一方面要用化學(xué)藥劑來防治;另一方面,要采用綜合方法進行預(yù)防。盡量將每一次用過的土壤進行高溫滅菌,防止土傳病害的發(fā)生,例如:菌核病和向日葵列當?shù)?。?月份開始,夜間最低溫度高于15度時,將溫室的上下風(fēng)口均打開,使空氣流通,晝夜溫差盡可能大。
實施例2
本實施例所述的一種加速向日葵世代進程的方法,包括如下步驟:
(1)在向日葵授粉后15天,將向日葵的管狀花剝除,用小鑷子將未成熟的籽粒輕輕取出,放入小自封袋中,寫好編號,將封好的自封袋放于裝有冰塊的冰盒中,放于實驗室的4℃冰箱,備用,此時向日葵種子(籽粒)中的幼胚大小為完整胚的2/3;取上述向日葵種子,在無菌條件下,先用無菌水清洗1次,然后用體積濃度為70%的乙醇浸泡0.5min,然后用質(zhì)量濃度為3%的次氯酸鈉和吐溫80以體積比90:1混合后的溶液消毒13min,再用無菌水清洗3-5次,最后,加入無菌水中浸泡,備用;將上述消毒處理后的種子置于無菌濾紙上,用已滅菌和消毒好的小鑷子和解剖刀剝?nèi)シN皮和果皮,取出幼胚接種于裝有幼胚培養(yǎng)基的大培養(yǎng)皿中,每皿接種30枚幼胚,將接滿30枚幼胚的培養(yǎng)皿用封口膜將其封好,并在培養(yǎng)皿上寫好材料編號及接種日期,備用;所述幼胚培養(yǎng)基為改良ms培養(yǎng)基,所述改良ms培養(yǎng)基中含有30g/l蔗糖和7g/l瓊脂,ph值為5.8;
(2)將步驟(1)中接種于培養(yǎng)基中的幼胚先在28℃條件下全暗培養(yǎng)1天,再將其取出,在無菌條件下進行轉(zhuǎn)接,所述轉(zhuǎn)接采取根尖向下半埋插入新配制的所述幼胚培養(yǎng)基中,然后封口,將轉(zhuǎn)接好的幼胚繼續(xù)在28℃全暗培養(yǎng)1天,然后將其轉(zhuǎn)入28℃條件下交替進行光照培養(yǎng)和黑暗培養(yǎng)5天,每天光照培養(yǎng)19h,黑暗培養(yǎng)5h,在光照培養(yǎng)時控制光照強度為1800lx,得到根系發(fā)達、子葉健壯的小植株,所述植株生根成活率高達94.5%;
(3)將步驟(2)獲得的小植株進行煉苗移栽前,先將所需育苗塊提前半天用自來水浸泡0.5h,將步驟(2)獲得的小植株移栽到育苗塊中,在日光溫室中進行開瓶煉苗5天,在本實施例中開瓶煉苗的具體步驟為,將步驟(2)獲得的小植株根部的瓊脂洗去,用大鑷子將小植株的根尖向下,輕輕移入泡好的所述育苗塊中,將周圍的基質(zhì)完全覆蓋于所述小植株的根部,將移有小植株的育苗塊放于太空杯中,用保鮮膜將太空杯頂部封好,大鑷子在所述保鮮膜上扎若干個小孔,放于日光溫室培養(yǎng),控制日光溫室中白天的平均溫度為38℃,濕度為32%,夜間的平均溫度為18℃,濕度為52%,在育苗前三天避免強光直射,在培養(yǎng)過程中,育苗兩天后揭去一半所述保鮮膜,育苗三天后,將所述保鮮膜全部揭除,每天早上施水溶肥和水質(zhì)量比為1:1800的水溶肥溶液,所述水溶肥中n、p、k元素各自所占的質(zhì)量百分數(shù)分別為20%,此時,小植株有四片真葉,真葉的長度大約為4cm,育苗成活率高達98.8%;將上述開瓶煉苗后的小植株移入盛有混合土和沙土質(zhì)量比為2:1的小花盆中固根壯苗5天,將所述小花盆放入托盤中,在施肥時將所述水溶肥溶液澆入大托盤中,這樣可以促使根系發(fā)達,所述混合土包括蛭石、珍珠巖和基質(zhì),所述蛭石、珍珠巖和基質(zhì)質(zhì)量比為1:2:3,育苗成活率高達99%;
(4)將步驟(3)中得到的6片真葉的小植株進行溫室栽培,移入盛有混合土:沙土為3:1的大花盆中,進行日常的溫室栽培管理,待所述小植株生長至下一次授粉10-15天為一個周期,即一個世代。
實施例3
本實施例所述的一種加速向日葵世代進程的方法,包括如下步驟:
(1)在向日葵授粉后12天,將向日葵的管狀花剝除,用小鑷子將未成熟的籽粒輕輕取出,放入小自封袋中,寫好編號,將封好的自封袋放于裝有冰塊的冰盒中,放于實驗室的4℃冰箱,備用,此時向日葵種子(籽粒)中的幼胚大小為完整胚的2/3;取上述向日葵種子,在無菌條件下,先用無菌水清洗1次,然后用體積濃度為80%的乙醇浸泡1.5min,用質(zhì)量濃度為1%的次氯酸鈉和吐溫80的以體積比110:1混合后的混合溶液消毒18min,再用無菌水清洗3-5次,最后,加入無菌水中浸泡,備用;將上述消毒處理后的種子置于無菌濾紙上,用已滅菌和消毒好的小鑷子和解剖刀剝?nèi)シN皮和果皮,取出幼胚接種于裝有幼胚培養(yǎng)基的大培養(yǎng)皿中,每皿接種30枚幼胚,將接滿30枚幼胚的培養(yǎng)皿用封口膜將其封好,并在培養(yǎng)皿上寫好材料編號及接種日期,備用;所述幼胚培養(yǎng)基為改良ms培養(yǎng)基,所述改良ms培養(yǎng)基中含有25g/l蔗糖和9g/l瓊脂,ph值為5.8;
(2)將步驟(1)中接種于培養(yǎng)基中的幼胚先在23℃條件下全暗培養(yǎng)1天,再將其取出,在無菌條件下進行轉(zhuǎn)接,所述轉(zhuǎn)接采取根尖向下半埋插入新配制的所述幼胚培養(yǎng)基中,然后封口,將轉(zhuǎn)接好的幼胚繼續(xù)在23℃全暗培養(yǎng)1天,然后將其轉(zhuǎn)入23℃條件下交替進行光照培養(yǎng)和黑暗培養(yǎng)5天,每天光照培養(yǎng)13h,黑暗培養(yǎng)11h,在光照培養(yǎng)時控制光照強度為2200lx,得到根系發(fā)達、子葉健壯的小植株,所述植株生根成活率高達93%;
(3)將步驟(2)獲得的小植株進行煉苗移栽前,先將所需育苗塊提前半天用自來水浸泡1h,將步驟(2)獲得的小植株移栽到育苗塊中,在日光溫室中進行開瓶煉苗8天,在本實施例中開瓶煉苗的具體步驟為,將步驟(2)獲得的小植株根部的瓊脂洗去,用大鑷子將小植株的根尖向下,輕輕移入泡好的所述育苗塊中,將周圍的基質(zhì)完全覆蓋于所述小植株的根部,將移有小植株的育苗塊放于太空杯中,用保鮮膜將太空杯頂部封好,大鑷子在所述保鮮膜上扎若干個小孔,放于日光溫室培養(yǎng),控制日光溫室中白天的平均溫度為33℃,濕度為28%,夜間的平均溫度為13℃,濕度為48%,在育苗前三天避免強光直射,在培養(yǎng)過程中,育苗兩天后揭去一半所述保鮮膜,育苗三天后,將所述保鮮膜全部揭除,每天早上施水溶肥和水質(zhì)量比為1:2200的水溶肥溶液,所述水溶肥中n、p、k元素各自所占的質(zhì)量百分數(shù)分別為20%,此時,小植株有四片真葉,真葉的長度大約為3.8cm,育苗成活率高達97.8%;將上述開瓶煉苗后的小植株移入盛有混合土和沙土質(zhì)量比為2:1的小花盆中固根壯苗8天,將所述小花盆放入托盤中,在施肥時將所述水溶肥溶液澆入大托盤中,這樣可以促使根系發(fā)達,所述混合土包括蛭石、珍珠巖和基質(zhì),所述蛭石、珍珠巖和基質(zhì)質(zhì)量比為1:1:1,育苗成活率高達98.5%;
(4)將步驟(3)中得到的6片真葉的小植株進行溫室栽培,移入盛有混合土:沙土為1:1的大花盆中,進行日常的溫室栽培管理,待所述小植株生長至下一次授粉10-15天為一個周期,即一個世代。
實施例4
本實施例所述的一種加速向日葵世代進程的方法,包括如下步驟:
(1)選取授粉后14天的向日葵種子,在無菌條件下,先用無菌水清洗1次,然后用體積濃度為78%的乙醇浸泡1.2min,質(zhì)量濃度為1.5%的次氯酸鈉和吐溫80以體積比100:1混合后的的混合溶液消毒14min,再用無菌水清洗3-5次,最后,加入無菌水中浸泡,然后在無菌條件下取出幼胚接種于裝有幼胚培養(yǎng)基的大培養(yǎng)皿中,然后用封口膜對所述培養(yǎng)皿進行封口,并在培養(yǎng)皿上寫好材料編號及接種日期,備用;所述幼胚培養(yǎng)基為改良b5培養(yǎng)基,所述改良b5培養(yǎng)基中含有35g/l蔗糖和5g/l瓊脂,ph值為5.8;
(2)將步驟(1)中接種于培養(yǎng)基中的幼胚先在26℃條件下全暗培養(yǎng)1天,再將其取出,在無菌條件下進行轉(zhuǎn)接,所述轉(zhuǎn)接采取根尖向下半埋插入裝有新配制的所述幼胚培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中,然后封口,將轉(zhuǎn)接好的幼胚繼續(xù)在26℃全暗培養(yǎng)1天,然后將其轉(zhuǎn)入26℃條件下交替進行光照培養(yǎng)和黑暗培養(yǎng)4天,每天光照培養(yǎng)15h,黑暗培養(yǎng)9h,在光照培養(yǎng)時控制光照強度為2200lx,得到根系發(fā)達、子葉健壯的小植株,所述植株生根成活率94%;
(3)將步驟(2)獲得的小植株進行煉苗移栽前,先將所需育苗塊提前半天用自來水浸泡1h,將步驟(2)獲得的小植株移栽到育苗塊中,在日光溫室中進行開瓶煉苗6天,在本實施例中開瓶煉苗的具體步驟為,將步驟(2)獲得的小植株根部的瓊脂洗去,用大鑷子將小植株的根尖向下,輕輕移入泡好的所述育苗塊中,將周圍的基質(zhì)完全覆蓋于所述小植株的根部,將移有小植株的育苗塊放于太空杯中,用保鮮膜將太空杯頂部封好,大鑷子在所述保鮮膜上扎若干個小孔,放于日光溫室培養(yǎng),控制日光溫室中白天的平均溫度為34℃,濕度為29%,夜間的平均溫度為14℃,濕度為51%,在育苗前三天避免強光直射,在培養(yǎng)過程中,育苗兩天后揭去一半所述保鮮膜,育苗三天后,將所述保鮮膜全部揭除,每天早上施水溶肥和水質(zhì)量比為1:2100的水溶肥溶液,所述水溶肥中n、p、k元素各自所占的質(zhì)量百分數(shù)分別為20%,此時,小植株有四片真葉,真葉的長度大約為3.8cm,育苗成活率高達98%;將上述開瓶煉苗后的小植株移入盛有混合土和沙土質(zhì)量比為2:1的小花盆中固根壯苗8天,將所述小花盆放入托盤中,在施肥時將所述水溶肥溶液澆入大托盤中,這樣可以促使根系發(fā)達,所述混合土包括蛭石、珍珠巖和基質(zhì),所述蛭石、珍珠巖和基質(zhì)質(zhì)量比為1:2:1,此時,育苗成活率高達99%;
(4)將步驟(3)中得到的6片真葉的小植株進行溫室栽培,移入盛有混合土:沙土為2:1的大花盆中,進行日常的溫室栽培管理,待所述小植株生長至下一次授粉10-15天為一個周期,即一個世代。
對比例1
本實施例所述的一種加速向日葵世代進程的方法,包括如下步驟:
(1)選取授粉后10天的向日葵種子,在無菌條件下,先用無菌水清洗1次,然后用體積濃度為78%的乙醇浸泡1.2min,質(zhì)量濃度為1.5%的次氯酸鈉和吐溫80的混合溶液消毒14min,再用無菌水清洗3-5次,最后,加入無菌水中浸泡,然后在無菌條件下取出幼胚接種于裝有砂培培養(yǎng)基的大培養(yǎng)皿中,然后用封口膜對所述培養(yǎng)皿進行封口,并在培養(yǎng)皿上寫好材料編號及接種日期,備用;
(2)將步驟(1)中接種于砂培培養(yǎng)基的幼胚在25℃條件下光照培養(yǎng)3天,光照強度為7000lx,得到小植株,所述植株生根成活率為80%;
(3)將步驟(2)獲得的小植株轉(zhuǎn)入脫分化培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)10天,培養(yǎng)溫度為25℃,所述脫分化培養(yǎng)基中含有naa0.05、ba0.05、2.4-d0,得到有四片真葉的小植株,真葉的長度大約為3cm,育苗成活率為95%;
(4)將步驟(2)獲得的小植株進行煉苗移栽前,先將所需育苗塊提前半天用自來水浸泡1h,將步驟(2)獲得的小植株移栽到育苗塊中,在日光溫室中進行開瓶煉苗6天,在本實施例中開瓶煉苗的具體步驟為,將步驟(2)獲得的小植株根部的瓊脂洗去,用大鑷子將小植株的根尖向下,輕輕移入泡好的所述育苗塊中,將周圍的基質(zhì)完全覆蓋于所述小植株的根部,將移有小植株的育苗塊放于太空杯中,用保鮮膜將太空杯頂部封好,大鑷子在所述保鮮膜上扎若干個小孔,放于日光溫室培養(yǎng),控制日光溫室中白天的平均溫度為34℃,濕度為29%,夜間的平均溫度為14℃,濕度為51%,在育苗前三天避免強光直射,在培養(yǎng)過程中,育苗兩天后揭去一半所述保鮮膜,育苗三天后,將所述保鮮膜全部揭除,每天早上施水溶肥和水質(zhì)量比為1:2100的水溶肥溶液,所述水溶肥中n、p、k元素各自所占的質(zhì)量百分數(shù)分別為20%,此時,育苗成活率高達90%;將上述開瓶煉苗后的小植株移入盛有混合土和沙土質(zhì)量比為2:1的小花盆中固根壯苗8天,將所述小花盆放入托盤中,在施肥時將所述水溶肥溶液澆入大托盤中,這樣可以促使根系發(fā)達,所述混合土包括蛭石、珍珠巖和基質(zhì),所述蛭石、珍珠巖和基質(zhì)質(zhì)量比為1:2:1,此時,育苗成活率為90.2%;
(5)將步驟(3)中得到的6片真葉的小植株進行溫室栽培,移入盛有混合土:沙土為2:1的大花盆中,進行日常的溫室栽培管理,待所述小植株生長至下一次授粉10-15天為一個周期,即一個世代。
對比例2
本實施例所述的一種加速向日葵世代進程的方法,包括如下步驟:
(1)選取授粉后10天的向日葵種子,在無菌條件下,先用無菌水清洗1次,然后用體積濃度為78%的乙醇浸泡1.2min,質(zhì)量濃度為1.5%的次氯酸鈉和吐溫80的混合溶液消毒14min,再用無菌水清洗3-5次,最后,加入無菌水中浸泡,然后在無菌條件下取出幼胚接種于裝有砂培培養(yǎng)基的大培養(yǎng)皿中,然后用封口膜對所述培養(yǎng)皿進行封口,并在培養(yǎng)皿上寫好材料編號及接種日期,備用;
(2)將步驟(1)中接于砂培培養(yǎng)基的幼胚在25℃條件下光照培養(yǎng)3天,每天光照16h,光照強度為7000lx,得到小植株,所述植株生根成活率為90%;
(3)將步驟(2)獲得的小植株轉(zhuǎn)入脫分化培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)10天,培養(yǎng)溫度為25℃,所述脫分化培養(yǎng)基中含有naa0.05、ba0.05、2.4-d0,得到有四片真葉的小植株,真葉的長度大約為3cm,育苗成活率為95%;
(4)將步驟(2)獲得的小植株根部的瓊脂洗去,用大鑷子將小植株的根尖向下,移入通透性好的蛭石體內(nèi),放于日光溫室培養(yǎng)6天,控制日光溫室中白天的平均溫度為34℃,濕度為29%,夜間的平均溫度為14℃,濕度為51%,每天早上施水溶肥和水質(zhì)量比為1:2100的水溶肥溶液,所述水溶肥中n、p、k元素各自所占的質(zhì)量百分數(shù)分別為20%,此時,育苗成活率為80%;
(5)將步驟(3)中得到的6片真葉的小植株進行溫室栽培,移入盛有混合土:沙土為2:1的大花盆中,進行日常的溫室栽培管理,待所述小植株生長至下一次授粉10-15天為一個周期,即一個世代。
對比例3
本實施例所述的一種加速向日葵世代進程的方法,包括如下步驟:
(1)選取授粉后10天的向日葵種子,在無菌條件下,先用無菌水清洗1次,然后用體積濃度為78%的乙醇浸泡1.2min,質(zhì)量濃度為1.5%的次氯酸鈉和吐溫80的混合溶液消毒14min,再用無菌水清洗3-5次,最后,加入無菌水中浸泡,然后在無菌條件下取出幼胚接種于裝有砂培培養(yǎng)基的大培養(yǎng)皿中,然后用封口膜對所述培養(yǎng)皿進行封口,并在培養(yǎng)皿上寫好材料編號及接種日期,備用;
(2)將步驟(1)中接種于砂培培養(yǎng)基的幼胚在25℃條件下光照培養(yǎng)5天,每天光照16h,光照強度為4000lx,得到小植株,所述植株生根成活率為85%;
(3)將步驟(2)獲得的小植株進行煉苗移栽前,先將所需育苗塊提前半天用自來水浸泡1h,將步驟(2)獲得的小植株移栽到育苗塊中,在日光溫室中進行開瓶煉苗6天,在本實施例中開瓶煉苗的具體步驟為,將步驟(2)獲得的小植株根部的瓊脂洗去,用大鑷子將小植株的根尖向下,輕輕移入泡好的所述育苗塊中,將周圍的基質(zhì)完全覆蓋于所述小植株的根部,將移有小植株的育苗塊放于太空杯中,用保鮮膜將太空杯頂部封好,大鑷子在所述保鮮膜上扎若干個小孔,放于日光溫室培養(yǎng),控制日光溫室中白天的平均溫度為34℃,濕度為29%,夜間的平均溫度為14℃,濕度為51%,在育苗前三天避免強光直射,在培養(yǎng)過程中,育苗兩天后揭去一半所述保鮮膜,育苗三天后,將所述保鮮膜全部揭除,每天早上施水溶肥和水質(zhì)量比為1:2100的水溶肥溶液,所述水溶肥中n、p、k元素各自所占的質(zhì)量百分數(shù)分別為20%,此時,育苗成活率高達78%;將上述開瓶煉苗后的小植株移入盛有混合土和沙土質(zhì)量比為2:1的小花盆中固根壯苗8天,將所述小花盆放入托盤中,在施肥時將所述水溶肥溶液澆入大托盤中,這樣可以促使根系發(fā)達,所述混合土包括蛭石、珍珠巖和基質(zhì),所述蛭石、珍珠巖和基質(zhì)質(zhì)量比為1:2:1,此時,育苗成活率為80%;
(4)將步驟(3)中得到的6片真葉的小植株進行溫室栽培,移入盛有混合土:沙土為2:1的大花盆中,進行日常的溫室栽培管理,待所述小植株生長至下一次授粉10-15天為一個周期,即一個世代。
對比例4
本實施例所述的一種加速向日葵世代進程的方法,包括如下步驟:
(1)選取授粉后10天的向日葵種子,在無菌條件下,先用無菌水清洗1次,然后用體積濃度為78%的乙醇浸泡1.2min,質(zhì)量濃度為1.5%的次氯酸鈉和吐溫80的混合溶液消毒14min,再用無菌水清洗3-5次,最后,加入無菌水中浸泡,然后在無菌條件下取出幼胚接種于裝有砂培培養(yǎng)基的大培養(yǎng)皿中,然后用封口膜對所述培養(yǎng)皿進行封口,并在培養(yǎng)皿上寫好材料編號及接種日期,備用;
(2)將步驟(1)中接種于砂培培養(yǎng)基的幼胚在25℃條件下光照培養(yǎng)5天,每天光照16h,光照強度為4000lx,得到小植株,所述植株生根成活率為88%;
(3)將步驟(2)獲得的小植株根部的瓊脂洗去,將上述的小植株移入盛有混合土和沙土質(zhì)量比為2:1的小花盆中煉苗6天,將所述小花盆放入托盤中,在施肥時將所述水溶肥溶液澆入大托盤中,這樣可以促使根系發(fā)達,所述混合土包括蛭石、珍珠巖和基質(zhì),所述蛭石、珍珠巖和基質(zhì)質(zhì)量比為1:2:1,此時,育苗成活率為85%;
(4)將步驟(3)中得到的6片真葉的小植株進行溫室栽培,移入盛有混合土:沙土為2:1的大花盆中,進行日常的溫室栽培管理,待所述小植株生長至下一次授粉10-15天為一個周期,即一個世代。
顯然,上述實施例僅僅是為清楚地說明所作的舉例,而并非對實施方式的限定。對于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說,在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動。這里無需也無法對所有的實施方式予以窮舉。而由此所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處于本發(fā)明創(chuàng)造的保護范圍之中。