本發(fā)明涉及一種改良黃顙魚生長性狀的復(fù)合育種方法，屬于黃顙魚遺傳育種領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：黃顙魚(pelteobagrusfulvidraco)隸屬于鲇形目(siluriformes)、鲿科(bagridae)、黃顙魚屬(pelteobagrus)，是我國重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖品種，在長江水系廣為分布，是我國較重要的底層小型經(jīng)濟(jì)魚類。由于肉味鮮美，肉質(zhì)細(xì)嫩，營養(yǎng)豐富，肌間刺少，離水后可存活一段時(shí)間，可鮮活上市，已越來越受到我國人民的喜愛和歡迎，并保持較高的市場需求和銷售價(jià)格。因此，已成為我國很有養(yǎng)殖前途的主導(dǎo)品種之一。目前，隨著黃顙魚養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大，該魚開始出現(xiàn)種質(zhì)退化、生長個(gè)體變小、抗逆性變差等現(xiàn)象，急需對(duì)黃顙魚進(jìn)行遺傳改良，培育出生長速度快、當(dāng)年苗種能長到商品規(guī)格、適應(yīng)性強(qiáng)的黃顙魚新品系(種)來滿足市場需求。鑒于雜交育種已成為提高魚類產(chǎn)量和改善魚類品質(zhì)的重要手段，目前已有關(guān)于黃顙魚×烏蘇里擬鲿、黃顙魚×粗唇鮠、黃顙魚×瓦氏黃顙魚遠(yuǎn)緣雜交和黃顙魚和yy超雄黃顙魚選育的相關(guān)報(bào)道。黃顙魚雌魚和yy超雄黃顙魚雄魚的子代(“全雄1號(hào)”黃顙魚)已達(dá)到規(guī)?；庇?，但其生產(chǎn)成本過高，已報(bào)道的黃顙魚雌魚和瓦氏黃顙魚雄魚雜交子代體型厚實(shí)，生長優(yōu)勢極其顯著，但同時(shí)也存在受精率低、畸形率高、孵化率低的問題。鑒于近些年全國各地繁養(yǎng)殖戶對(duì)雜交黃顙魚的認(rèn)可和市場需求的不斷擴(kuò)大，有必要對(duì)現(xiàn)在已有的關(guān)于黃顙魚雌魚和瓦氏黃顙魚雄魚雜交制種技術(shù)進(jìn)一步改良。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：發(fā)明目的：針對(duì)上述技術(shù)問題，本發(fā)明對(duì)現(xiàn)有的一種黃顙魚雌魚和瓦氏黃顙魚雄魚雜交育種方法進(jìn)行改進(jìn)，通過對(duì)親本的群體選育，并用微衛(wèi)星標(biāo)記和金屬數(shù)碼芯片技術(shù)篩選出供雜交繁育的親本，保證了雜交黃顙魚的生長性狀和雜種優(yōu)勢均高于普通黃顙魚，為黃顙魚新品種的培育提供了一條新的途徑。技術(shù)方案：本發(fā)明公開了一種改良黃顙魚生長性狀的復(fù)合育種方法，包括以下步驟：首先，通過二代群體選育獲得優(yōu)質(zhì)的黃顙魚和瓦氏黃顙魚親本庫；接著利用微衛(wèi)星標(biāo)記檢測黃顙魚和瓦氏黃顙魚親本，挑選遺傳相似度在90％以上的親本個(gè)體作為繁殖群體；然后以黃顙魚雌魚為母本，瓦氏黃顙魚雄魚為父本進(jìn)行雜交制種。優(yōu)選，所述二代群體選育的方法為：選擇不同來源的黃顙魚和瓦氏黃顙魚通過人工催產(chǎn)和人工授精，分段培育到至少2齡，培育分三階段選擇，第一階段選擇率60％，第二階段分雌雄選擇，選擇率50％，第三階段選擇率40％?？傔x擇率為1.2％；將一代選育的黃顙魚和瓦氏黃顙魚按上述方法再選擇一次，得到二代選育的黃顙魚和瓦氏黃顙魚群體。優(yōu)選，所述利用微衛(wèi)星標(biāo)記檢測黃顙魚和瓦氏黃顙魚親本，挑選遺傳相似度在90％以上的親本個(gè)體作為繁殖群體的方法為：使用seqidno:1～41所示的擴(kuò)增引物，分別以選育的黃顙魚和瓦氏黃顙魚基因組dna為模板進(jìn)行熒光pcr擴(kuò)增，經(jīng)基因分析儀進(jìn)行基因型分析，利用cervus3.0等軟件對(duì)所選微衛(wèi)星進(jìn)行群體遺傳多樣性分析和聚類圖的構(gòu)建，篩選出遺傳相似度在90％以上的親本個(gè)體作為繁殖群體。優(yōu)選，所述黃顙魚雌魚與瓦氏黃顙魚雄魚雜交制種配比比例數(shù)量為300:2。優(yōu)選，所述雜交制種過程中包括親本培育、親本選擇、親本催產(chǎn)、人工授精、人工孵化和魚苗培育及養(yǎng)成。進(jìn)一步優(yōu)選，所述親本選擇的標(biāo)準(zhǔn)為：二代選育的黃顙魚繁殖群體至少1000尾，其中黃顙魚雌魚體質(zhì)量不低于80g；二代選育的瓦氏黃顙魚繁殖群體至少200尾，其中瓦氏黃顙魚雄魚體質(zhì)量不低于500g。進(jìn)一步優(yōu)選，所述親本催產(chǎn)的方法為：對(duì)黃顙魚雌魚和瓦氏黃顙魚雄魚采用激素藥物外源注射法進(jìn)行人工催產(chǎn)。具體的育種方法如下：1、黃顙魚和瓦氏黃顙魚的群體選育選擇不同來源的黃顙魚和瓦氏黃顙魚通過人工催產(chǎn)和人工授精，分段培育到至少2齡，培育分三階段選擇，第一階段選擇率60％，第二階段分雌雄選擇，選擇率50％，第三階段選擇率40％?？傔x擇率為1.2％(見圖1和圖2)。將一代選育的黃顙魚和瓦氏黃顙魚按上述方法再選擇一次，得到二代選育的黃顙魚和瓦氏黃顙魚群體。2、黃顙魚和瓦氏黃顙魚的遺傳檢測利用微衛(wèi)星標(biāo)記(見表1)對(duì)二代選育的黃顙魚和瓦氏黃顙魚群體抽樣進(jìn)行遺傳相似度檢測，分別挑選出遺傳相似度在90％以上的親本個(gè)體作為繁殖群體。表1用于檢測黃顙魚和瓦氏黃顙魚親魚群體遺傳相似度的微衛(wèi)星引物其中pcr所用的熒光通用引物核苷酸序列為：m13(-21)：5’-tgtaaaacgacggccagt-3’(seqidno.41)。使用在線軟件misa(microsatellite,http://pgrc.ipk-gatersleben.de/misa)挖掘瓦氏黃顙魚轉(zhuǎn)錄組序列中的微衛(wèi)星標(biāo)記；采用primer5.0設(shè)計(jì)軟件對(duì)篩選出的ssr序列設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行pcr擴(kuò)增，確定各個(gè)引物的退火溫度。引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成。pcr體系為20μl體系，包括：dna模板(1μl)，正反引物各(0.8μl)，ddh2o(7.4μl)，2×taqmix(10μl)。pcr擴(kuò)增的反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性5min；32個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)包括94℃變性30s，退火30s，72℃延伸30s；72℃延伸5min，4℃保存。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠法檢驗(yàn)后，4℃保存。將符合要求的est-ssr引物利用黃顙魚和瓦氏黃顙魚的32個(gè)體進(jìn)行pcr擴(kuò)增，采用8％的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳驗(yàn)證多態(tài)性，從中篩選出多態(tài)性高的est-ssr位點(diǎn)(見表1)。3、雜交黃顙魚制種(見圖3)(1)親本培育雌雄親魚單養(yǎng)或混養(yǎng)，可適當(dāng)搭配濾食性魚類。時(shí)間選擇在10月份或翌年的3月，水溫要求在15℃以上。繁殖季節(jié)放養(yǎng)密度以200kg/667m3～400kg/667m3為宜，非繁殖季節(jié)放養(yǎng)密度以500kg/667m3～750kg/667m3為宜。保持水質(zhì)清新，透明度以40cm～50cm為宜，溶氧量達(dá)到5.0mg/l以上，催產(chǎn)前的一個(gè)月間隔5d～7d沖新水一次，以刺激親魚性腺發(fā)育。(2)親本選擇選擇80克以上體色黃黑間隔明顯、活力強(qiáng)的、體型正常，體格健壯，體表光滑、無疾病、無畸形的2齡黃顙魚雌魚作為雌性親本。選擇500克以上體表無損傷的、體型正常、活力強(qiáng)的、健康的2齡以上瓦氏黃顙魚作為雄性親本。(3)親本催產(chǎn)水溫在22℃～30℃時(shí)，選擇腹部膨大，仰腹可見卵巢輪廓明顯，生殖孔擴(kuò)張、紅腫、寬而圓，用手輕輕擠壓魚腹，腹部松軟而富彈性，體色較艷，體型短粗的黃顙魚雌魚，體型瘦長，腹部不膨大，生殖突尖而長、末端有細(xì)孔呈紅色充血狀的，體表?xiàng)l紋明顯的瓦氏黃顙魚雄魚采用激素藥物外源注射法進(jìn)行人工催產(chǎn)。母本的注射量依據(jù)水溫而定(見表2)，父本注射劑量為母本的30％～50％。水溫高于26℃時(shí)雄魚可不注射催產(chǎn)激素。肌肉直射在親魚背部肌肉或腹腔注射，注射部位為胸鰭基部或背部肌肉。注射后將親魚放入小網(wǎng)箱或面積在4m2～20m2之內(nèi)，水深0.6m～0.8m的培育池中培育，配備充氣式增氧設(shè)備。不同水溫下的效應(yīng)時(shí)間不同，效應(yīng)時(shí)間的長短依據(jù)表3確定。表2黃顙魚雌魚在不同水溫下的推薦注射次數(shù)、針距和劑量表3水溫與效應(yīng)時(shí)間的關(guān)系水溫，℃20～2122～2324～2526～2728～2930～32效應(yīng)時(shí)間，h28～3222～2420～2416～1912～1510～12(4)人工授精輕壓雌魚腹部，泄殖孔中有卵粒流出時(shí)，即可人工授精。將成熟度適中的雄性親本剖腹，取出精巢并剪成碎片，稱重后放在孔徑0.25mm～0.35mm的金屬絲網(wǎng)篩上研磨，濾去精巢組織殘?jiān)?。每克精巢?ml，ph＝7.17的精子稀釋液(表4)攪拌后在4℃～8℃下避光保存?zhèn)溆?。與此同時(shí)，將開始排卵的雌性親本用紗布裹住，使其腹部外露，用手由前向后擠壓其腹部，將卵全部擠出，放入已滅菌的干燥玻璃器皿中。取卵子體積約1/3左右濃度為0.8％的生理鹽水，將精子放入生理鹽水中攪拌3s～5s，激活精子，再放入到卵中攪拌30s～40s進(jìn)行受精。每1000g卵加入2ml稀釋后的精子，受精后的卵均勻地撒在規(guī)格60cm×40cm、孔徑0.35mm～0.45mm的網(wǎng)片上，轉(zhuǎn)移至孵化池孵化，或經(jīng)10％～15％的黃泥漿脫粘處理后放入孵化桶孵化。表4精子稀釋液配制方法配方劑量nacl7.8gcacl20.21gkcl0.2gnahco30.021g蒸餾水1000ml(5)人工孵化將已粘附卵的魚巢，使用10ppm高錳酸鉀浸泡15min后，置于孵化池中流水充氧孵化或直接放入經(jīng)清塘消毒后的池塘中孵化；在受精8小時(shí)后使用10ppm亞甲基藍(lán)浸泡3min。水泥池靜水孵化放卵密度為每立方米水體4×104粒～6×104粒，微流水孵化放卵密度為每立方米水體1.5×105?！?×105粒。孵化桶孵化放卵密度為每立方米水體1×106?！?.5×106粒。孵化用水應(yīng)用網(wǎng)孔尺寸0.25mm的尼龍或乙綸網(wǎng)布過濾，嚴(yán)防敵害生物進(jìn)入。池水溫差≤1.5℃，溶氧在6mg/l以上。70h后移出孵化設(shè)備，移至培育池內(nèi)進(jìn)行培育。魚苗孵化時(shí)間依水溫高低、孵化方式而定(表5)。在魚苗出膜15h后，將水泥池水位降至30cm左右，孵化桶孵化的魚苗轉(zhuǎn)移至水泥池暫養(yǎng)。暫養(yǎng)過程保持微流水和充氣式增氧。表5水溫、孵化方式和脫膜時(shí)間的關(guān)系(6)魚苗培育及下塘魚苗的培育采取分段式培育，第一階段：魚苗破膜至全長1cm，放養(yǎng)密度一般為0.5×104尾/立方米～1.5×104尾/立方米。仔魚脫膜后1～3d不需要進(jìn)食，3天后投喂3～4克/立方米水體鹵蟲作為開口餌料。仔魚開口后，每天進(jìn)行吸污，日換水1/4～1/3。第二階段：夏花的培育，放養(yǎng)密度為每畝1.5～2萬尾，水花下池后每畝用2㎏～3㎏定點(diǎn)豆?jié){潑灑一周，5～6d后用粉料成團(tuán)池塘四周投喂，養(yǎng)殖20天左右，長至3厘米以上，及時(shí)分池。第三階段：幼魚到成魚的培育，放養(yǎng)密度為每畝1～1.2萬尾，分苗后需要重新馴化飼料。每天投喂前需要抽污，投喂時(shí)關(guān)氣泵。每隔15d～20d加換新水一次，保持水透明度在25cm～30cm之間。也可參照《黃顙魚養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)程》水產(chǎn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(ny/t1351-2007)進(jìn)行養(yǎng)殖。技術(shù)效果：相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明采用經(jīng)二代群體選育的黃顙魚雌魚和瓦氏黃顙魚雄魚可將雜交受精率提高至80％以上，還能減少親本雄魚的宰殺數(shù)量，提高雄魚的使用效率，間接性的提高經(jīng)濟(jì)效益。對(duì)雜交魚苗采用分段式培育，明顯提高了魚苗的成活率，雜交魚苗畸形減少至2％以下，雜交黃顙魚的生長速度比普通黃顙魚快20％以上，達(dá)到改良了普通黃顙魚的生長性狀的目的。附圖說明圖1：瓦氏黃顙魚群體選育技術(shù)路線圖；圖2：黃顙魚群體選育技術(shù)路線圖；圖3：雜交黃顙魚制種技術(shù)路線與工藝圖。具體實(shí)施方式下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明所述的技術(shù)方案給予進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但有必要指出以下實(shí)施例只用于對(duì)
發(fā)明內(nèi)容的描述，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制。實(shí)施例1：一、黃顙魚和瓦氏黃顙魚的群體選育選擇不同來源的黃顙魚和瓦氏黃顙魚通過人工催產(chǎn)和人工授精，分段培育到至少2齡，培育分三階段選擇，第一階段選擇率60％，第二階段分雌雄選擇，選擇率50％，第三階段選擇率40％?？傔x擇率為1.2％(見圖1和圖2)。將一代選育的黃顙魚和瓦氏黃顙魚按上述方法再選擇一次，得到二代選育的黃顙魚和瓦氏黃顙魚群體。二、黃顙魚和瓦氏黃顙魚的遺傳檢測利用微衛(wèi)星標(biāo)記(見表1)對(duì)二代選育的黃顙魚和瓦氏黃顙魚群體抽樣進(jìn)行遺傳相似度檢測，分別挑選出遺傳相似度在90％以上的親本個(gè)體作為繁殖群體。三、雜交黃顙魚制種(見圖3)1、親本選擇2月底，選擇2年齡體表無損傷的、體型正常、活力強(qiáng)的、健康的、規(guī)格在80克以上選育二代以上的黃顙魚雌魚作為雌性親本。選擇3年齡體表無損傷的、體型正常、活力強(qiáng)的、健康的、規(guī)格在500克以上選育二代以上的瓦氏黃顙魚雄魚作為雄性親本，在面積20m2，水深1.5m的水泥池塘馴養(yǎng)。早晚各巡塘一次，觀察天氣、水質(zhì)變化、親魚活動(dòng)和攝食情況，定期檢查性腺發(fā)育情況。2、人工催產(chǎn)5月下旬，當(dāng)水溫高于22℃時(shí)開始人工催產(chǎn)，選擇腹部膨大，仰腹可見卵巢輪廓明顯，生殖孔擴(kuò)張、紅腫、寬而圓，用手輕輕擠壓魚腹，腹部松軟而富彈性，體色較艷，體型短粗的黃顙魚雌魚，體型瘦長，腹部不膨大，生殖突尖而長、末端有細(xì)孔呈紅色充血狀的，體表?xiàng)l紋明顯的瓦氏黃顙魚雄魚采用激素藥物外源注射法進(jìn)行人工催產(chǎn)。在親魚背部肌肉分兩次注射。黃顙魚第一針的注射量為：22μg/kg促黃體素釋放激素(lhrh-a2)、3mg/kg馬來酸地歐酮(dom)。第二針的注射量為：22μg/kg促黃體素釋放激素(lhrh-a2)、10mg/kg馬來酸地歐酮(dom)，2200iu/kg絨毛膜促性腺激素(hcg)，瓦氏黃顙魚的激素用量為黃顙魚的30％。注射后將親魚放入面積為10m2，水深0.6m～0.8m，氧氣充足的水泥池中培育，24h后檢查催產(chǎn)效果，達(dá)到產(chǎn)卵時(shí)期進(jìn)行人工取卵取精。3、人工授精雌性黃顙魚到達(dá)效應(yīng)期后，取瓦氏黃顙魚雄魚，剪斷下頜處動(dòng)脈放血30s，取出精巢，擦干精巢表面液體，稱重后放在孔徑0.35mm的金屬絲網(wǎng)篩上研磨，濾去精巢組織殘?jiān)?。每克精巢?ml的精子稀釋液加入ph7.17的精子稀釋液攪拌后在4℃下避光保存?zhèn)溆?。與此同時(shí)，將開始排卵的雌性親本用紗布裹住，使其腹部外露，用手由前向后擠壓其腹部，將卵擠入到干燥、干凈的容器中。取卵子體積約1/3左右0.5％的生理鹽水，將精子放入生理鹽水中攪拌5s，激活精子，再放入到卵中攪拌40s進(jìn)行受精。每500g卵加入2ml稀釋后的精子。受精后的卵均勻地撒在規(guī)格60cm×40cm、孔徑0.35mm～0.45mm的網(wǎng)片上，轉(zhuǎn)移至孵化池孵化。4、人工孵化孵化用水用網(wǎng)孔尺寸0.25mm的尼龍或乙綸網(wǎng)布過濾，嚴(yán)防敵害生物進(jìn)入。將人工授精卵放入25℃水溫的孵化網(wǎng)進(jìn)行流水孵化，將已粘附卵的魚巢，使用10ppm高錳酸鉀浸泡15min后，置于孵化池中流水充氧孵化；孵化期間為防治受精卵得水霉病，在受精8小時(shí)后使用10ppm亞甲基藍(lán)浸泡3min，在出膜前的10小時(shí)以上進(jìn)行“抖卵”，將發(fā)霉的卵和死卵，抖掉并用吸管虹吸出來，防止水質(zhì)變壞，留下好的受精卵等待出膜；將已脫粘的魚卵放入孵化缸中孵化，放卵密度為每立方米水體1×106?！?.5×106粒。池水溫差≤1.5℃，溶氧在6mg/l以上。在魚苗出膜15h后，將水泥池水位降至30cm左右，70h后移出孵化設(shè)備，移至培育池內(nèi)進(jìn)行培育。5、雜交黃顙魚魚苗培育及養(yǎng)成魚苗破膜至全長1cm，放養(yǎng)密度一般為0.5×104尾/立方米～1.5×104尾/立方米。仔魚脫膜后1～3d不需要進(jìn)食，3天后按照3～4克/立方米水體投喂鹵蟲作為開口餌料。仔魚開口后，每天進(jìn)行吸污，日換水1/4～1/3。待魚苗生長至3cm長左右進(jìn)行分池，放養(yǎng)密度為1.5～2萬尾/畝，水花下池后水花下池后每畝用2kg～3kg定點(diǎn)豆?jié){潑灑一周，5～6d后用粉料成團(tuán)池塘四周投喂。魚苗下塘3天后，加注新水10cm～15cm，以后每4d～5d加一次，等水位達(dá)到90cm左右時(shí)，采取換水方式來調(diào)節(jié)水質(zhì)，保持水透明度在25cm～30cm之間。雜交魚苗養(yǎng)殖到60天左右便可看出其兼具了雙親的優(yōu)良性狀，具有顯著雜交優(yōu)勢：體色誘人(偏母本)、生長快速(偏父本)。一冬齡魚抽樣檢測30條，雜交黃顙魚平均規(guī)格達(dá)到150克以上，平均生長速度比普通黃顙魚快20％以上(見表6)。表61冬齡雜交黃顙魚和普通黃顙魚的體重及形態(tài)差異比較體重和形態(tài)體征比較雜交黃顙魚普通黃顙魚平均體重(g)150.485.6體型生長快，體型大生長慢，體型小吻部吻部突出，呈馬蹄型吻鈍，呈月牙型胸鰭后緣有鋸齒，前緣不太明顯前后緣都有鋸齒sequencelisting<110>南京師范大學(xué)<120>一種改良黃顙魚生長性狀的復(fù)合育種方法<130>2017.04<160>41<170>patentinversion3.3<210>1<211>20<212>dna<213>人工序列<400>1ggactggaacacaacaggct20<210>2<211>20<212>dna<213>人工序列<400>2cccaaaccgcacattatttc20<210>3<211>21<212>dna<213>人工序列<400>3gctttttatcatgcagtgtgg21<210>4<211>21<212>dna<213>人工序列<400>4gaaaattcagcatttccaagc21<210>5<211>20<212>dna<213>人工序列<400>5caggctaaccttggcttgac20<210>6<211>19<212>dna<213>人工序列<400>6cagtcccagtcagctctgc19<210>7<211>20<212>dna<213>人工序列<400>7ccgtacacagttgctctcca20<210>8<211>20<212>dna<213>人工序列<400>8caaaacactccagcagtcca20<210>9<211>20<212>dna<213>人工序列<400>9ctgtcacactcgccttcaaa20<210>10<211>20<212>dna<213>人工序列<400>10ttactcgcagtgcattttgg20<210>11<211>20<212>dna<213>人工序列<400>11gctgagaactgaaaccctgc20<210>12<211>20<212>dna<213>人工序列<400>12acatggacctcccattgtgt20<210>13<211>20<212>dna<213>人工序列<400>13tttcaatggcctcctgattt20<210>14<211>20<212>dna<213>人工序列<400>14ttcttccctttttccctcgt20<210>15<211>20<212>dna<213>人工序列<400>15gccaagacgacatcacagaa20<210>16<211>20<212>dna<213>人工序列<400>16tgtgccaggttgtgtacgtt20<210>17<211>20<212>dna<213>人工序列<400>17tcggtcagttcagatcacca20<210>18<211>20<212>dna<213>人工序列<400>18cacacaacacaatctgccaa20<210>19<211>20<212>dna<213>人工序列<400>19gatgaaagaaacccggaaca20<210>20<211>20<212>dna<213>人工序列<400>20tggagagaaagaaggccaga20<210>21<211>20<212>dna<213>人工序列<400>21caacgactggaggtcaaaca20<210>22<211>21<212>dna<213>人工序列<400>22agctgacggaactgttactgc21<210>23<211>20<212>dna<213>人工序列<400>23tgaaatagcttgccgttgtg20<210>24<211>20<212>dna<213>人工序列<400>24tggattgttgtgaggttgga20<210>25<211>20<212>dna<213>人工序列<400>25gggattagggtgtagggagc20<210>26<211>20<212>dna<213>人工序列<400>26ccctaagttgagcgccttta20<210>27<211>20<212>dna<213>人工序列<400>27tcactaccggggactgactt20<210>28<211>20<212>dna<213>人工序列<400>28taaaaattcaccggccattc20<210>29<211>20<212>dna<213>人工序列<400>29agcattggagccgatcatac20<210>30<211>20<212>dna<213>人工序列<400>30aggcaccctcagtaagagca20<210>31<211>20<212>dna<213>人工序列<400>31agcagcctcttcaaccgtta20<210>32<211>21<212>dna<213>人工序列<400>32caggtagagtgggagtgatgg21<210>33<211>20<212>dna<213>人工序列<400>33tcaaactgggcaaaaactcc20<210>34<211>20<212>dna<213>人工序列<400>34aacgaagggggttttcagat20<210>35<211>20<212>dna<213>人工序列<400>35ttttctgaaggagacgtcgg20<210>36<211>19<212>dna<213>人工序列<400>36ccaggcaggatggttacct19<210>37<211>20<212>dna<213>人工序列<400>37cttcccagaagtctgaacgg20<210>38<211>20<212>dna<213>人工序列<400>38tccaggatcaggacatcaca20<210>39<211>20<212>dna<213>人工序列<400>39ccactggcaaaacattgaaa20<210>40<211>20<212>dna<213>人工序列<400>40tcagacccgccttaatatgc20<210>41<211>18<212>dna<213>人工序列<400>41tgtaaaacgacggccagt18當(dāng)前第1頁12