本發(fā)明屬于煙草鑒定處理技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種煙草品種耐旱性快速鑒定方法。

背景技術(shù)：

煙草是重要的經(jīng)濟(jì)作物之一，尤其是烤煙，我國(guó)的烤煙面積和產(chǎn)量均居世界第一。目前我國(guó)煙區(qū)主要集中在灌溉條件較差的丘陵山地，水資源短缺和不平衡是制約現(xiàn)代煙草農(nóng)業(yè)發(fā)展的一個(gè)重要因素，不同烤煙品種的耐旱能力不同，受干旱的影響程度也不同。因此，篩選耐旱品種尤為重要。

耐旱鑒定技術(shù)在其它作物如小麥、玉米等中研究較多。由于作物不同，鑒定方法差異很大。目前煙草耐旱鑒定技術(shù)一直不成熟。主要表現(xiàn)在：1）現(xiàn)有煙草品種耐旱性鑒定多采用盆栽控水試驗(yàn)，雖然結(jié)果可靠，但周期長(zhǎng)，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，僅適合個(gè)別品種耐旱性鑒定，不適宜大批量試驗(yàn)。2）王仁剛等公開(kāi)了一種“苗期鑒定煙草抗旱性的方法（cn201110106454.3）”，其較大田鑒定相對(duì)快速省力，但需要在溫室里進(jìn)行，也有一定局限性：①需要特殊的設(shè)施和場(chǎng)地；②需要人為觀察煙苗干旱情況，每個(gè)人判斷萎蔫情況有差異，因此，復(fù)水時(shí)間不好掌握；③需要反復(fù)控水、復(fù)水，需要大量人力物力，也不適宜大批量鑒定煙草品種耐旱性。3耐旱鑒定方法多、指標(biāo)多，沒(méi)有統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種煙草品種耐旱性快速鑒定方法，該方法在試驗(yàn)過(guò)程中一次加入peg溶液、后續(xù)無(wú)需補(bǔ)充，試驗(yàn)方便簡(jiǎn)捷，又不受試驗(yàn)人員和場(chǎng)地限制，適宜大批量煙草種質(zhì)資源的耐旱性鑒定。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

1）選擇干凈無(wú)污染的河沙，用清水沖洗干凈，121℃高壓滅菌；

2）在培養(yǎng)皿中加入滅菌過(guò)的河沙，河沙高度不超過(guò)培養(yǎng)皿高度的1/3，再加入15%peg（聚乙二醇）溶液，每8mlpeg溶液添加22－24g河沙；同時(shí)以蒸餾水作對(duì)照；

3）在河沙表面鋪一層濾紙，要求濾紙直徑與培養(yǎng)皿大小一致，在濾紙上點(diǎn)消毒過(guò)的煙草種子（9cm的濾紙上約可點(diǎn)100粒煙草種子），蓋上培養(yǎng)皿蓋，用封口膜密封，放入培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)；

4）每天調(diào)查發(fā)芽率，每天調(diào)查后用封口膜密封，于第14天調(diào)查完后計(jì)算發(fā)芽指數(shù)gi、及相對(duì)發(fā)芽指數(shù)a：

gi=∑（gt/dt），式中g(shù)t為第t天的發(fā)芽種子數(shù)，dt為調(diào)查天數(shù)；

a=15%peg處理的發(fā)芽指數(shù)/正常條件下發(fā)芽指數(shù)；

5）同時(shí)于第14天取代表性幼苗，測(cè)量根長(zhǎng)和莖高，并稱(chēng)量鮮重；

計(jì)算相對(duì)根長(zhǎng)b：b=15%peg處理的根長(zhǎng)/正常條件下根長(zhǎng)；

計(jì)算相對(duì)莖高c：c=15%peg處理的莖高/正常條件下莖高；

計(jì)算相對(duì)鮮重d：d=15%peg處理的鮮重/正常條件下鮮重；

6）取上述相對(duì)發(fā)芽指數(shù)a、相對(duì)根長(zhǎng)b、相對(duì)莖高c和相對(duì)鮮重d的平均值，即為該煙草品種的干旱脅迫指數(shù)，干旱脅迫指數(shù)越大，說(shuō)明該煙草品種的耐旱性越強(qiáng)。為了保證不同批次試驗(yàn)結(jié)果的可比性，試驗(yàn)過(guò)程中也可以選用耐旱煙草品種“牛津26”或“農(nóng)大202”作為對(duì)照品種。

優(yōu)選的，步驟1）中河沙粒徑為0.2－2mm。

本發(fā)明主要解決快速鑒定煙草品種耐旱性問(wèn)題，本發(fā)明方法采用15%peg溶液對(duì)煙草品種進(jìn)行耐旱性鑒定，適合批量種質(zhì)資源篩選。本發(fā)明中，發(fā)芽床定量加入河沙和peg溶液，保證試驗(yàn)條件的一致性；試驗(yàn)過(guò)程中無(wú)需補(bǔ)充peg溶液，試驗(yàn)方便簡(jiǎn)捷。此外，本發(fā)明為了消除種子之間的自然差異，用蒸餾水作對(duì)照，選用發(fā)芽指數(shù)、根長(zhǎng)、莖高和苗鮮重四個(gè)指標(biāo)的相對(duì)值來(lái)鑒定品種耐旱性，和大田表現(xiàn)高度相關(guān)，鑒定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

和現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：

1）本發(fā)明主要解決速鑒定煙草品種耐旱性問(wèn)題，與盆栽控水鑒定和溫室控水復(fù)水鑒定相比，本發(fā)明方法更加方便快捷，適合批量種質(zhì)資源的篩選鑒定；

2）本發(fā)明與紙床做發(fā)芽床相比，河沙具有良好的蓄水保水功能，能夠一次性加入足夠量peg高滲溶液，無(wú)需后期補(bǔ)加溶液，試驗(yàn)更簡(jiǎn)便；

3）本發(fā)明用蒸餾水作對(duì)照，消除了種子之間的自然差異，選用發(fā)芽指數(shù)、莖高、根長(zhǎng)和苗鮮重等四個(gè)指標(biāo)的相對(duì)值來(lái)鑒定品種耐旱性，和大田表現(xiàn)高度相關(guān)，鑒定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步地詳細(xì)介紹，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此。

實(shí)施例采用15%peg溶液鑒定煙草品種的耐旱性。

1、peg溶液配制

采用peg-6000作為處理劑，用蒸餾水作溶劑，按照15%的質(zhì)量濃度進(jìn)行配制，形成一定滲透勢(shì)的干旱脅迫處理。

2、發(fā)芽床的制備：

1）選擇干凈無(wú)污染的河沙（粒徑0.2-2mm），用清水沖洗干凈，于121℃高壓滅菌；

2）選用直徑9cm的培養(yǎng)皿，在培養(yǎng)皿中定量加入24g滅菌過(guò)的河沙。平行搖動(dòng)培養(yǎng)皿，使沙子均勻平鋪培養(yǎng)皿底部；

3）定量加入8ml15%peg溶液，同時(shí)用8ml的蒸餾水作對(duì)照；

4）15%peg溶液完全浸潤(rùn)河沙后，在河沙表面鋪一張直徑9.0cm的定性濾紙。

3、種子干旱脅迫處理

試驗(yàn)選用烤煙品種“豫煙13號(hào)”、“中煙100”、“豫煙9號(hào)”、“牛津26”和“農(nóng)大202”。種子預(yù)先用75%酒精消毒后用清水洗3次，播于發(fā)芽床（即將煙草種子點(diǎn)在濾紙上，每一個(gè)煙草品種點(diǎn)100粒種子）。種子置床后，蓋上培養(yǎng)皿蓋，用封口膜密封培養(yǎng)皿。置于人工光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，黑暗20?c（12h），光照30?c（12h），恒溫培養(yǎng)14天，逐日調(diào)查發(fā)芽率（每日調(diào)查結(jié)束后用封口膜密封培養(yǎng)皿），于第14天調(diào)查結(jié)束后計(jì)算發(fā)芽指數(shù)，并取50株代表性幼苗，測(cè)量根長(zhǎng)和莖高，及稱(chēng)量鮮重，計(jì)算出相對(duì)發(fā)芽指數(shù)a、相對(duì)根長(zhǎng)b、相對(duì)莖高c和相對(duì)鮮重d。試驗(yàn)重復(fù)三次，每次重復(fù)100粒。結(jié)果見(jiàn)表1至4。

4、試驗(yàn)結(jié)果。

4.1不同品種發(fā)芽指數(shù)比較

表1不同烤煙品種的發(fā)芽指數(shù)比較

表1顯示，15%peg處理下五個(gè)品種發(fā)芽指數(shù)差異較大，牛津26相對(duì)發(fā)芽指數(shù)最高，中煙100最低。

4.2不同品種幼苗根長(zhǎng)和莖高比較

表2不同烤煙品種莖高比較

表2的結(jié)果顯示：15%peg處理下五個(gè)品種莖高受影響程度不同，其中，中煙100受影響程度最大，農(nóng)大202、豫煙9號(hào)和牛津26的莖高生長(zhǎng)受影響程度較小。

表3不同烤煙品種根長(zhǎng)比較

表3的結(jié)果顯示：15%peg處理下五個(gè)品種根長(zhǎng)受影響程度不同，其中，中煙100受影響程度最大，豫煙13號(hào)根系生長(zhǎng)受影響程度較小。

4.3不同品種幼苗鮮重比較

表4不同烤煙品種幼苗鮮重比較

表4的結(jié)果顯示：15%peg處理下五個(gè)品種幼苗鮮重受影響程度不同，其中，中煙100受影響程度最大，豫煙9號(hào)幼苗鮮重受影響程度較小。

為了消除種子本身發(fā)芽率的誤差，對(duì)相對(duì)發(fā)芽指數(shù)、相對(duì)根長(zhǎng)、相對(duì)莖高和相對(duì)苗鮮重四個(gè)指標(biāo)進(jìn)行分析，并取四個(gè)指標(biāo)的平均值作為該品種的干旱脅迫指數(shù)。經(jīng)計(jì)算獲知：豫煙13號(hào)、中煙100、豫煙9號(hào)、農(nóng)大202和牛津26的干旱脅迫指數(shù)分別為73.78%，62.45%、79.47%、78.99%和78.71%。說(shuō)明牛津26、豫煙9號(hào)和農(nóng)大202耐旱性較強(qiáng)，其次為豫煙13號(hào)，中煙100耐旱性相對(duì)較差。該試驗(yàn)結(jié)果與前人研究結(jié)論及大田表現(xiàn)結(jié)果一致。

本試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，用peg能夠?qū)Σ煌瑹煵萜贩N進(jìn)行耐旱鑒定，且試驗(yàn)簡(jiǎn)捷，可用于快速篩選耐旱種質(zhì)資源，尤其適合大批量煙草種質(zhì)資源的耐旱性鑒定。