本發(fā)明涉及白及苗育種領(lǐng)域，具體而言，涉及一種快速節(jié)能培育白及苗的方法。

背景技術(shù)：

白及(芨)屬(bleattareichb.f.)是蘭科(orchidaceae)地生草本植物，具有較高的藥用價(jià)值和觀賞價(jià)值。其假鱗莖是一種傳統(tǒng)的中藥材，具有斂氣、滲痰、止血、消癰等功效，白及屬?gòu)V泛分布于亞洲國(guó)家，其在中國(guó)共有四個(gè)種，分別是白及(bletillastriata(thunb.)reichb.f.)、華白及(bletillakinesis(rolfe)schltr.)、黃花白及(bletillaochraceaschltr.)和小白及(bletillaformosana(hayata)schltr.)。白及主要生長(zhǎng)在我國(guó)分布華東、中南、西南及甘肅、陜西等地。以貴州產(chǎn)量最大，質(zhì)量最好。

白及的塊莖供藥用，能收斂止血，消腫生肌；內(nèi)服在治肺結(jié)核咳血，支氣管擴(kuò)張咯血、胃潰瘍吐血、尿血、便血等癥方面有非常好的效果；外用治外傷出血、燒燙傷、手足皸裂等癥也有作用。因此、白及在生物醫(yī)藥、保健食品、紡織印染、特種涂料和日用化工等方面有巨大的商業(yè)利用價(jià)值。隨著白及食品的開(kāi)發(fā)利用和印染業(yè)、美容業(yè)的需求，白及用量日趨增多，現(xiàn)已列入《瀕危動(dòng)植物種國(guó)際貿(mào)易公約》予以保護(hù)。其價(jià)格在國(guó)內(nèi)中藥市場(chǎng)上十分走俏，比如在2016國(guó)內(nèi)中藥市場(chǎng)的貴州白及選貨在1200元人民幣/kg左右，而統(tǒng)貨在800元人民幣/kg左右，但仍有上升趨勢(shì)，且表現(xiàn)為供不應(yīng)求的暢銷態(tài)勢(shì)。

白及種子的自然萌發(fā)率低，加之人類對(duì)生境的破壞和過(guò)度的采挖，白及植物野生資源遭到嚴(yán)重破壞，對(duì)其野生資源的保護(hù)迫在眉睫。

然而，利用白及果莢外植體的數(shù)量?jī)?yōu)勢(shì)來(lái)獲得白及大田種植的最常用的方法。主要有直接播種法(直播苗)和組織培養(yǎng)法(組培苗)。其中直播法(專利公開(kāi)號(hào)：cn104126397a，白及直播育苗方法，專利公開(kāi)號(hào)：cn106068790a，一種白及種子直播育苗的方法)主要存在的技術(shù)問(wèn)題是生根率不高，生產(chǎn)周期長(zhǎng)、苗的品質(zhì)不一和萌發(fā)藥品(激素)使用多等，但其也具有其自身的優(yōu)勢(shì)，如消耗能量低和大田定植成活率高。組織培養(yǎng)法(專利號(hào)：cn105145352a,一種白及種苗高效組培快繁技術(shù)；cn104719152a，白及工廠化育苗方法)主要存在培養(yǎng)成本過(guò)高，消耗能源(電力)高、直接定植成活率低和馴化苗還需要大棚等不足。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供一種白及工廠化育苗的快速(9-11個(gè)月)方法，其成本低，獲得苗品質(zhì)高，生產(chǎn)周期短(組培室2個(gè)月+緩苗室(15天)+大棚培養(yǎng)6～8)個(gè)月)，成功解決了當(dāng)前白及工廠化育苗成本高(人工成本+培養(yǎng)室的能源成本)和生產(chǎn)周期長(zhǎng)(組培室6～8個(gè)月+大棚練苗培養(yǎng)6個(gè)月)等問(wèn)題，大田種植成活率98％以上。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：

一種快速節(jié)能培育白及苗的方法，包括以下步驟：

(a)、將無(wú)菌白及種子播種，進(jìn)行萌發(fā)培養(yǎng)，至萌發(fā)培養(yǎng)的白及苗高度為1-2cm，將其移栽到育苗盤中，蓋上保鮮膜，放置于緩苗室過(guò)渡培養(yǎng)；

(b)、緩苗室培養(yǎng)完成后搬運(yùn)至大棚內(nèi)，至白及苗長(zhǎng)至16-20cm，根部假鱗莖直徑為1-2cm，進(jìn)行大田定植前緩苗10-15天，然后直接進(jìn)行大田定植；

步驟(a)中，所述萌發(fā)培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基成分為：1/2ms培養(yǎng)基中含有鉀離子15-20mm、蔗糖58-62g/l、6-ba0.8-1.2mg/l、naa1.5-2.5mg/l和瓊脂粉4.3-4.7g/l。

針對(duì)以前的直播和組培法生產(chǎn)白及苗周期長(zhǎng)、人力成本高、消耗能源高和占用土地面積多等等不足。本發(fā)明選用白及種子進(jìn)行無(wú)菌播種組培，將傳統(tǒng)的“四步(階段)白及組培快繁法(萌發(fā)培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和大棚馴化培養(yǎng))”改進(jìn)為“兩步白及組培快繁法(萌發(fā)生根培養(yǎng)和育苗盤大棚培養(yǎng))”，整個(gè)過(guò)程更為簡(jiǎn)便易行，所需勞動(dòng)力大幅減少，不但節(jié)約能源消耗和培養(yǎng)成本，而且使工廠化快繁生產(chǎn)白及苗的時(shí)間周期縮短為9-11個(gè)月，整個(gè)生產(chǎn)成品周期縮短，大田移栽存活率為98％以上，比現(xiàn)有的大田移栽存活率提升8％以上。采用本發(fā)明提供的白及苗種植，生產(chǎn)成品周期在3～4年左右，經(jīng)鑒定，得到的白及品質(zhì)優(yōu)越，明顯高于現(xiàn)有技術(shù)中的白及品質(zhì)。

具體地，本發(fā)明特定限定了萌發(fā)培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基成分，該成分根據(jù)白及在最初的生長(zhǎng)階段對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求不同，改進(jìn)了白及組培的萌發(fā)培養(yǎng)基，特別地，確定了不同鉀離子濃度的1/2ms培養(yǎng)基對(duì)白及早期的生長(zhǎng)影響。最終經(jīng)過(guò)本發(fā)明的培養(yǎng)基進(jìn)行萌發(fā)培養(yǎng)，能有效促進(jìn)根的萌發(fā)，且生長(zhǎng)狀態(tài)佳，為移栽至育苗盤中提供良好的基礎(chǔ)。采用本發(fā)明提供的萌發(fā)培養(yǎng)基培養(yǎng)后，不再需要之前單獨(dú)的壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)，并配合其他步驟，將傳統(tǒng)的“四步(階段)白及組培快繁法”改進(jìn)為“兩步白及組培快繁法”，大大縮短了白及組培時(shí)間，整個(gè)步驟更簡(jiǎn)便，減少了用工量和能源成本，且還能獲得優(yōu)質(zhì)的白及苗，有利于大規(guī)模工廠化快速組培育苗。

需要說(shuō)明的是，本發(fā)明提供的培養(yǎng)基成分為：1/2ms培養(yǎng)基中含有鉀離子15-20mm、蔗糖58-62g/l、6-ba0.8-1.2mg/l、naa1.5-2.5mg/l和瓊脂粉4.3-4.7g/l，其中的鉀離子濃度是將1/2ms培養(yǎng)基中的鉀離子濃度升高至本發(fā)明的濃度，如可添加氯化鉀、硫酸鉀等，其他成分蔗糖、6-ba、naa和瓊脂粉也是額外添加的成分。

優(yōu)選地，在步驟(a)中，所述無(wú)菌白及種子通過(guò)以下步驟獲得：

將完全成熟并且開(kāi)裂的白及果莢剪開(kāi)，得到的白及種子用75％乙醇浸泡4-6min，然后去除75％乙醇。

進(jìn)一步地，所述無(wú)菌白及種子通過(guò)以下步驟獲得：

將收集的完全成熟并且未開(kāi)裂的白及果莢的外皮清洗干凈，然后在無(wú)菌條件下用75％乙醇浸泡4-6min，用無(wú)菌水沖洗3-4次，之后用酒精燈外焰灼傷3-5次，置于無(wú)菌紙上吸干水分，剪開(kāi)得到無(wú)菌白及種子。

在自然狀態(tài)下，白及在每年的4月中旬左右開(kāi)花，授粉后大約在9月份左右成熟，但是要完全成熟直至開(kāi)裂大約在11月份左右。因此，選擇在10月份左右收集完全成熟但未開(kāi)裂的白及果莢，放置在4℃冰箱冷藏備用。使用時(shí)，取出白及果莢，將未開(kāi)裂的白及蒴果用洗衣粉溶液洗凈，在自來(lái)水下沖洗5～10min，白及果莢的外皮清洗干凈。

本發(fā)明首次利用75％的酒精對(duì)白及果莢和種子進(jìn)行消毒，避免以前利用升汞消毒對(duì)組培人員身體健康和環(huán)境污染潛在危害的影響。

未開(kāi)裂的白及種子直接播撒到配置好的900mm直徑培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基上，每個(gè)果莢播撒培養(yǎng)皿處理10～12個(gè)，每培養(yǎng)皿培養(yǎng)基的種子約200～300粒，然后用封口膜將培養(yǎng)基的口封住。

而開(kāi)裂的白及果莢種子滅菌消毒后，用牙簽將種子點(diǎn)在培養(yǎng)基上，點(diǎn)種完畢后，將培養(yǎng)基用封口膜密封。

優(yōu)選地，在步驟(a)中，所述萌發(fā)培養(yǎng)的條件為：溫度為22-24℃，光強(qiáng)為1500-2500lx，光照時(shí)間為11-13h/d。

進(jìn)一步地，所述萌發(fā)培養(yǎng)的時(shí)間為55-65天。

本發(fā)明通過(guò)特定的培養(yǎng)基成分，配合上述條件培養(yǎng)55-65天，萌發(fā)培養(yǎng)的白及苗高度為1-2cm，且生長(zhǎng)旺盛，有效促進(jìn)根的萌發(fā)，為移栽至育苗盤中提供良好的基礎(chǔ)。

優(yōu)選地，所述育苗盤中的成分為：腐殖土中摻加6-ba和鉀離子濃度為15-20mm的1/2ms培養(yǎng)液，所述腐殖土中含有6-ba0.8-1.2mg/l和鉀離子濃度為15-20mm的1/2ms培養(yǎng)液0.8-1.2mg/l。即育苗盤中添加的1/2ms培養(yǎng)液為鉀離子濃度升高至15-20mm配置的1/2ms培養(yǎng)液，1/2ms培養(yǎng)液中鉀離子的升高可添加氯化鉀、硫酸鉀等。

本發(fā)明通過(guò)在育苗盤中添加6-ba和改進(jìn)的1/2ms培養(yǎng)液，進(jìn)一步促進(jìn)根的生長(zhǎng)和提供更好的營(yíng)養(yǎng)，生長(zhǎng)狀況明顯比未添加6-ba和改進(jìn)1/2ms培養(yǎng)液腐殖土好。

進(jìn)一步地，所述育苗盤中，白及苗的株距為28-33mm，行距為33-38mm。通過(guò)設(shè)置合理的株距和行距，促進(jìn)白及苗更好的生長(zhǎng)。

白及苗蓋上保鮮膜，主要起保濕作用，優(yōu)選地，所述保鮮膜距離白及苗頂端450-550mm；

所述過(guò)渡培養(yǎng)的時(shí)間為14-16天。

通過(guò)一段時(shí)間的過(guò)渡培養(yǎng)，為大棚培養(yǎng)提供條件。

進(jìn)一步地，所述過(guò)渡培養(yǎng)為：

前9-10d的培養(yǎng)條件為：溫度22～24℃，光強(qiáng)1000～1500lx，光照時(shí)間為11-13h/d；；

后5-6d的培養(yǎng)條件為：溫度20～26℃、光強(qiáng)為自然光、每天光照時(shí)長(zhǎng)為自然光照時(shí)長(zhǎng)。

進(jìn)一步地，所述大棚為雙層膜大棚；雙層膜大棚可防止高溫和強(qiáng)光對(duì)白及苗造成傷害。

進(jìn)一步地，在大棚培養(yǎng)時(shí)，育苗盤放置培養(yǎng)架上，揭去育苗盤上覆蓋的保鮮膜，培養(yǎng)6～8個(gè)月。

本發(fā)明首次將白及組培和大棚架子育苗盤育苗結(jié)合起來(lái)，提高了大棚培養(yǎng)白及苗的利用率，解決了白及育苗用地過(guò)多等問(wèn)題。

進(jìn)一步地，大棚培養(yǎng)過(guò)程中注意防蟲(chóng)和防病，其中每隔一個(gè)月要進(jìn)行棚內(nèi)消毒一次；根據(jù)苗的生長(zhǎng)情況提供葉面肥。

進(jìn)一步地，大田定植時(shí)，每畝地用苗6000～8000株。

另外，本發(fā)明中的1/2ms培養(yǎng)基的配方如表1所示。

表1ms培養(yǎng)基具體成分

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：

(1)在快繁過(guò)程中，首次利用75％的酒精對(duì)白及果莢或種子進(jìn)行消毒，避免以前利用升汞消毒對(duì)組培人員身體健康和環(huán)境污染潛在危害的影響。

(2)改進(jìn)白及不同階段組培培養(yǎng)基成分的同時(shí)，將傳統(tǒng)的“四步(階段)白及組培快繁法”改進(jìn)為“兩步白及組培快繁法”，大大縮短了白及組培時(shí)間，由原來(lái)的減少了用工量和能源成本，且還能獲得優(yōu)質(zhì)的白及苗，有利于大規(guī)模工廠化快速組培育苗。

(3)首次根據(jù)白及在最初的生長(zhǎng)階段對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求不同，確定了不同鉀離子含量濃度的1/2ms培養(yǎng)基對(duì)白及早期的生長(zhǎng)影響，改進(jìn)了白及組培的萌發(fā)培養(yǎng)基，能有效促進(jìn)根的萌發(fā)，且生長(zhǎng)狀態(tài)佳，為移栽至育苗盤中提供良好的基礎(chǔ)。

(4)首次將白及組培和大棚架子育苗盤育苗結(jié)合起來(lái)，提高了大棚培養(yǎng)白及苗的利用率，解決了白及育苗用地過(guò)多等問(wèn)題。

(5)首次利用緩苗過(guò)渡室，解決了白及移苗定植到大棚的成活率，進(jìn)而為大田種植白及成活率提供了保障。

附圖說(shuō)明

為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，以下將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹。

圖1為白及在不同培養(yǎng)基上萌發(fā)生長(zhǎng)20天的情況圖；

圖2為不同培育白及苗的方法在培育4個(gè)月時(shí)獲得白及苗的生長(zhǎng)情況圖。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下列實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過(guò)市售購(gòu)買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。

實(shí)施例1

一種快速節(jié)能培育白及苗的方法，包括以下主要步驟：

配置培養(yǎng)基：

按表1中各成分配置1/2ms培養(yǎng)基，在配置的同時(shí)，添加氯化鉀使得培養(yǎng)基中的鉀離子濃度為15mm，得到改進(jìn)的1/2ms培養(yǎng)基，然后加入蔗糖、6-ba、naa和瓊脂粉，使得培養(yǎng)基中加入的這幾種成分的濃度為蔗糖58g/l、6-ba0.8mg/l、naa1.5mg/l和瓊脂粉4.7g/l。

制備育苗盤：

取腐殖土，加入6-ba和改進(jìn)的1/2ms培養(yǎng)液，使腐殖土中含有6-ba0.8mg/l,含有改進(jìn)的1/2ms培養(yǎng)液0.8mg/l。

1)白及果莢及種子消毒。取收集的白及果莢，用洗衣粉溶液洗凈，在自來(lái)水下沖洗5～10min，然后在超凈工作臺(tái)上采用75％乙醇浸泡消毒4min，再用無(wú)菌水沖洗3-4次，置于滅菌的濾紙上吸干水分。

2)播種萌發(fā)培養(yǎng)。用已經(jīng)滅菌消毒的剪刀將消毒好的白及果莢從中部剪開(kāi)，取出種子，迅速接種到配置好的900mm直徑培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基上；每個(gè)果莢播撒培養(yǎng)皿10～12個(gè)，每培養(yǎng)皿培養(yǎng)基的種子約200～300粒，然后用封口膜將培養(yǎng)基的口封住，培養(yǎng)條件為溫度22～24℃、光強(qiáng)1500lx、每天光照12h和黑暗12h的培養(yǎng)2個(gè)月。

3)移苗定植。等培養(yǎng)皿培養(yǎng)基上的白及苗萌發(fā)生長(zhǎng)到1～2cm左右(即2個(gè)月的時(shí)間)，用鑷子將其移植到放有腐殖土、6-ba和改進(jìn)的1/2ms培養(yǎng)基混合的育苗盤中，每?jī)芍昝绲囊浦捕ㄖ仓昃酁?8mm，行距為33mm，一個(gè)育苗盤共移植300株左右，成活率99％，并且白及苗在育苗過(guò)程中未見(jiàn)污染。

4)緩苗室過(guò)渡培養(yǎng)。將已經(jīng)定植完成的育苗盤蓋上保鮮膜(用支架頂起，距離苗500mm左右)，然后放置于緩苗室的培養(yǎng)基緩苗過(guò)渡培養(yǎng)；前10d的培養(yǎng)條件為：溫度22～24℃、光強(qiáng)1000lx、每天光照時(shí)長(zhǎng)為12h光照和12h黑暗；后5d的培養(yǎng)條件為：溫度20～26℃、光強(qiáng)為自然光、每天光照時(shí)長(zhǎng)為自然光照時(shí)長(zhǎng)。

5)大棚培養(yǎng)管理。將已經(jīng)在緩苗室緩苗完成的育苗盤蓋搬運(yùn)到大棚內(nèi)，放置其培養(yǎng)架上，揭去育苗盤上覆蓋的保鮮膜，培養(yǎng)6個(gè)月；培養(yǎng)條件為雙層膜大棚，夏天時(shí)段(防止高溫和強(qiáng)光對(duì)白及苗造成傷害)要給大棚覆蓋遮陽(yáng)網(wǎng)，其他條件為大棚自然條件；培養(yǎng)過(guò)程中注意防蟲(chóng)和防病，其中每隔一個(gè)月要進(jìn)行棚內(nèi)消毒一次，還要根據(jù)苗的生長(zhǎng)情況提供一定葉面肥。

6)大田種植前完全自然緩苗。等到大棚培養(yǎng)的苗長(zhǎng)到16～18cm，根部假鱗莖直徑為1～2cm時(shí)，揭開(kāi)培養(yǎng)室大棚的通風(fēng)口，對(duì)大棚內(nèi)的培養(yǎng)苗進(jìn)行大田定植前緩苗15d。

7)大田定植。將已經(jīng)進(jìn)行完全自然緩苗的白及苗連育苗盤一起，搬運(yùn)到整理好的大田進(jìn)行定植，每畝地用苗在6000～8000株左右，定植后成活率在98％以上。

實(shí)施例2

一種快速節(jié)能培育白及苗的方法，包括以下主要步驟：

配置培養(yǎng)基：

按表1中各成分配置1/2ms培養(yǎng)基，在配置的同時(shí)，添加氯化鉀使得培養(yǎng)基中的鉀離子濃度為20mm，得到改進(jìn)的1/2ms培養(yǎng)基，然后加入蔗糖、6-ba、naa和瓊脂粉，使得培養(yǎng)基中加入的這幾種成分的濃度為蔗糖60g/l、6-ba1mg/l、naa2mg/l和瓊脂粉4.5g/l。

制備育苗盤：

取腐殖土，加入6-ba和改進(jìn)的1/2ms培養(yǎng)液，使腐殖土中含有6-ba1mg/l,含有改進(jìn)的1/2ms培養(yǎng)液1mg/l。

1)白及果莢及種子消毒。取收集的白及果莢，用洗衣粉溶液洗凈，在自來(lái)水下沖洗5～10min，然后在超凈工作臺(tái)上采用75％乙醇浸泡消毒5min，再用無(wú)菌水沖洗3-4次，置于滅菌的濾紙上吸干水分。

2)播種萌發(fā)培養(yǎng)。用已經(jīng)滅菌消毒的剪刀將消毒好的白及果莢從中部剪開(kāi)，取出種子，迅速接種到配置好的900mm直徑培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基上；每個(gè)果莢播撒培養(yǎng)皿10～12個(gè)，每培養(yǎng)皿培養(yǎng)基的種子約200～300粒，然后用封口膜將培養(yǎng)基的口封住，培養(yǎng)條件為溫度22～24℃、光強(qiáng)2000lx、每天光照13h和黑暗11h的培養(yǎng)2個(gè)月。

3)移苗定植。等培養(yǎng)皿培養(yǎng)基上的白及苗萌發(fā)生長(zhǎng)到1～2cm左右(即2個(gè)月的時(shí)間)，用鑷子將其移植到放有腐殖土、6-ba和改進(jìn)的1/2ms培養(yǎng)基混合的育苗盤中，每?jī)芍昝绲囊浦捕ㄖ仓昃酁?0mm，行距為35mm，一個(gè)育苗盤共移植300株左右，成活率100％，并且白及苗在育苗過(guò)程中未見(jiàn)污染。

4)緩苗室過(guò)渡培養(yǎng)。將已經(jīng)定植完成的育苗盤蓋上保鮮膜(用支架頂起，距離苗500mm左右)，然后放置于緩苗室的培養(yǎng)基緩苗過(guò)渡培養(yǎng)；前10d的培養(yǎng)條件為：溫度22～24℃、光強(qiáng)1200lx、每天光照時(shí)長(zhǎng)為13h光照和11h黑暗；后5d的培養(yǎng)條件為：溫度20～26℃、光強(qiáng)為自然光、每天光照時(shí)長(zhǎng)為自然光照時(shí)長(zhǎng)。

5)大棚培養(yǎng)管理。將已經(jīng)在緩苗室緩苗完成的育苗盤蓋搬運(yùn)到大棚內(nèi)，放置其培養(yǎng)架上，揭去育苗盤上覆蓋的保鮮膜，培養(yǎng)7個(gè)月；培養(yǎng)條件為雙層膜大棚，夏天時(shí)段(防止高溫和強(qiáng)光對(duì)白及苗造成傷害)要給大棚覆蓋遮陽(yáng)網(wǎng)，其他條件為大棚自然條件；培養(yǎng)過(guò)程中注意防蟲(chóng)和防病，其中每隔一個(gè)月要進(jìn)行棚內(nèi)消毒一次，還要根據(jù)苗的生長(zhǎng)情況提供一定葉面肥。

6)大田種植前完全自然緩苗。等到大棚培養(yǎng)的苗長(zhǎng)到18～20cm，根部假鱗莖直徑為1～2cm時(shí)，揭開(kāi)培養(yǎng)室大棚的通風(fēng)口，對(duì)大棚內(nèi)的培養(yǎng)苗進(jìn)行大田定植前緩苗12d。

7)大田定植。將已經(jīng)進(jìn)行完全自然緩苗的白及苗連育苗盤一起，搬運(yùn)到整理好的大田進(jìn)行定植，每畝地用苗在6000～8000株左右，定植后成活率在98％以上。

實(shí)施例3

一種快速節(jié)能培育白及苗的方法，包括以下主要步驟：

配置培養(yǎng)基：

按表1中各成分配置1/2ms培養(yǎng)基，在配置的同時(shí)，添加氯化鉀使得培養(yǎng)基中的鉀離子濃度為20mm，得到改進(jìn)的1/2ms培養(yǎng)基，然后加入蔗糖、6-ba、naa和瓊脂粉，使得培養(yǎng)基中加入的這幾種成分的濃度為蔗糖62g/l、6-ba1.2mg/l、naa2.5mg/l和瓊脂粉4.7g/l。

制備育苗盤：

取腐殖土，加入6-ba和改進(jìn)的1/2ms培養(yǎng)液，使腐殖土中含有6-ba1.2mg/l,含有改進(jìn)的1/2ms培養(yǎng)液1.2mg/l。

1)白及果莢及種子消毒。取收集的開(kāi)裂的白及果莢，剪開(kāi)，得到白及種子，然后放入75％乙醇浸泡消毒5min，用微移器將種子和酒精吸出，放在濾紙上在超凈臺(tái)里吹干備用。

2)播種萌發(fā)培養(yǎng)。用牙簽將消毒后的種子點(diǎn)在配置好的900mm直徑培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基上，每培養(yǎng)皿培養(yǎng)基的種子約200～300粒，點(diǎn)種完畢后，用封口膜將培養(yǎng)基的口封住，培養(yǎng)條件為溫度22～24℃、光強(qiáng)2500lx、每天光照11h和黑暗13h的培養(yǎng)2個(gè)月。

3)移苗定植。等培養(yǎng)皿培養(yǎng)基上的白及苗萌發(fā)生長(zhǎng)到1～2cm左右(即2個(gè)月的時(shí)間)，用鑷子將其移植到放有腐殖土、6-ba和改進(jìn)的1/2ms培養(yǎng)基混合的育苗盤中，每?jī)芍昝绲囊浦捕ㄖ仓昃酁?8mm，行距為38mm，一個(gè)育苗盤共移植300株左右，成活率100％，并且白及苗在育苗過(guò)程中未見(jiàn)污染。

4)緩苗室過(guò)渡培養(yǎng)。將已經(jīng)定植完成的育苗盤蓋上保鮮膜(用支架頂起，距離苗500mm左右)，然后放置于緩苗室的培養(yǎng)基緩苗過(guò)渡培養(yǎng)；前10d的培養(yǎng)條件為：溫度22～24℃、光強(qiáng)1500lx、每天光照時(shí)長(zhǎng)為11h光照和13h黑暗；后5d的培養(yǎng)條件為：溫度20～26℃、光強(qiáng)為自然光、每天光照時(shí)長(zhǎng)為自然光照時(shí)長(zhǎng)。

5)大棚培養(yǎng)管理。將已經(jīng)在緩苗室緩苗完成的育苗盤蓋搬運(yùn)到大棚內(nèi)，放置其培養(yǎng)架上，揭去育苗盤上覆蓋的保鮮膜，培養(yǎng)8個(gè)月；培養(yǎng)條件為雙層膜大棚，夏天時(shí)段(防止高溫和強(qiáng)光對(duì)白及苗造成傷害)要給大棚覆蓋遮陽(yáng)網(wǎng)，其他條件為大棚自然條件；培養(yǎng)過(guò)程中注意防蟲(chóng)和防病，其中每隔一個(gè)月要進(jìn)行棚內(nèi)消毒一次，還要根據(jù)苗的生長(zhǎng)情況提供一定葉面肥。

6)大田種植前完全自然緩苗。等到大棚培養(yǎng)的苗長(zhǎng)到18～20cm，根部假鱗莖直徑為1～2cm時(shí)，揭開(kāi)培養(yǎng)室大棚的通風(fēng)口，對(duì)大棚內(nèi)的培養(yǎng)苗進(jìn)行大田定植前緩苗10d。

7)大田定植。將已經(jīng)進(jìn)行完全自然緩苗的白及苗連育苗盤一起，搬運(yùn)到整理好的大田進(jìn)行定植，每畝地用苗在6000～8000株左右，定植后成活率在98％以上。

對(duì)比例1

萌發(fā)所用的培養(yǎng)基以及育苗盤中添加的培養(yǎng)基為：1/2ms培養(yǎng)基中含有鉀離子10mm、蔗糖60g/l、6-ba1mg/l、naa2mg/l和瓊脂粉4.5g/l，其他成分以及步驟同實(shí)施例2。

萌發(fā)20天，與實(shí)施例2比較，相同條件下在顯微鏡(2×)下拍照，得到的結(jié)果如圖1所示。圖1左邊的圖為對(duì)比例中所用的培養(yǎng)基萌發(fā)培養(yǎng)20天的組織，右邊的圖為實(shí)施例2所用的培養(yǎng)基萌發(fā)培養(yǎng)20天得到的組織。明顯地，本對(duì)比例萌發(fā)培養(yǎng)的白及苗根萌發(fā)弱，且組織發(fā)育明顯小，后續(xù)移苗定植成活率很低，不足50％。并且后續(xù)緩苗過(guò)渡培養(yǎng)以及大棚培養(yǎng)生長(zhǎng)狀況差，因此，舍棄培育。

對(duì)比例2

白及傳統(tǒng)四步組培育苗方法，步驟如下：

1)播種前的種子處理：將收集的白及果莢用自來(lái)水沖洗10min，在超凈工作臺(tái)上先用75％乙醇消毒30s，再用4％次氯酸鈉溶液浸泡10min，消毒期間不停地翻動(dòng)果莢，使其消毒徹底，無(wú)菌水漂洗3次，然后用無(wú)菌濾紙吸干果莢表面的水分待用。

2)播種萌發(fā)：播種培養(yǎng)基為1/2ms培養(yǎng)基含有葡萄糖30g/l及瓊脂粉6.5g/l；在無(wú)菌條件下，將種子均勻的播種到培養(yǎng)基表面，再將播種好的培養(yǎng)瓶放到消過(guò)毒的培養(yǎng)室中培養(yǎng)。

3)繼代培養(yǎng)：萌發(fā)培養(yǎng)1個(gè)月左右后，開(kāi)始轉(zhuǎn)接，每瓶轉(zhuǎn)接15-30棵苗，轉(zhuǎn)接培養(yǎng)基為1/2ms培養(yǎng)基中含有naa1.0mg/l、葡萄糖30g/l及瓊脂粉6.5g/l，將轉(zhuǎn)接培養(yǎng)基放在培養(yǎng)室中培養(yǎng)。

4)生根培養(yǎng)：繼代培養(yǎng)50d左右，開(kāi)始轉(zhuǎn)接，每瓶轉(zhuǎn)接15棵苗，轉(zhuǎn)接培養(yǎng)基為ms培養(yǎng)基含有naa2.0mg/l、6-ba1.5mg/l、碳粉1‰、香蕉泥8％、葡萄糖30g/l及瓊脂粉6.5g/l，將轉(zhuǎn)接好的苗放在培養(yǎng)室中培養(yǎng)。

5)搭建馴化棚：選擇土質(zhì)肥沃的沙壤土地搭建馴化棚，并安裝自動(dòng)噴水裝置，棚內(nèi)用育苗基質(zhì)做成寬1.2-1.8m、高15-20cm的苗床，在馴化棚外鋪設(shè)遮蔭度為65-75％的遮陽(yáng)網(wǎng)。

6)出瓶移栽：選擇培養(yǎng)4-6個(gè)月且有球莖的組培苗，放在馴化棚或室外陰涼處，5-7天后清洗組培苗，將洗干凈的組培苗移栽到馴化棚的育苗床上，株距5cm×5cm，移栽后及時(shí)澆定根水。

7)水肥管理：馴化棚里的溫度控制在20-30℃，土壤濕度保持在70-80％；移栽后一個(gè)月澆灌一次營(yíng)養(yǎng)液，以后每隔半個(gè)月葉面噴施營(yíng)養(yǎng)液1次。

8)育苗大棚。馴化棚培養(yǎng)80-100天，轉(zhuǎn)入育苗大棚培養(yǎng)4個(gè)月。

9)大田定植。大田移栽存活率為90％，生產(chǎn)成品周期在4～5年。

另外，將實(shí)施例2、對(duì)比例2與直播法萌發(fā)培養(yǎng)育苗比較，按白及種子播種開(kāi)始計(jì)算，4個(gè)月時(shí)白及苗生長(zhǎng)狀況如圖2所示。

圖2中，對(duì)照1為直播法萌發(fā)培養(yǎng)；對(duì)照2為對(duì)比例2中的傳統(tǒng)組培法萌發(fā)培養(yǎng)；處理為本發(fā)明實(shí)施例2方法萌發(fā)培養(yǎng)。

從圖2可以看出，本發(fā)明提供的白及苗生產(chǎn)方法，培育的白及苗的長(zhǎng)勢(shì)以及發(fā)育情況明顯強(qiáng)于其他組。

此外，其他實(shí)施例培育白及苗結(jié)果同實(shí)施例2基本一致。

本發(fā)明公開(kāi)的白及苗生產(chǎn)方法，快速節(jié)能，成功解決了當(dāng)前白及兩種育苗的諸多問(wèn)題，如果莢直播苗生長(zhǎng)緩慢，周期長(zhǎng)、苗的品質(zhì)不高和組培苗生產(chǎn)成本高(人工和土地成本)、耗能高(主要是培養(yǎng)室的用電費(fèi)用)、周期長(zhǎng)和需要馴化苗大棚等一系列問(wèn)題，大大提高了利用白及果莢外植體數(shù)量?jī)?yōu)勢(shì)來(lái)生產(chǎn)其苗的生長(zhǎng)速度和效率，在9～11個(gè)月左右就可以得到大田定植苗，相比以前的方法節(jié)約了3～5個(gè)月的生產(chǎn)時(shí)間，其大田定植成活率在98％以上。另外，本發(fā)明在整個(gè)白及苗的生產(chǎn)過(guò)程只有一次人工定植到幼苗盤上，與其他育苗方法相比較，節(jié)約了大量的勞動(dòng)力成本。加上本發(fā)明的白及組培過(guò)程在其培養(yǎng)室只用2個(gè)月左右的時(shí)間(其他白及組培苗至少在培養(yǎng)室培養(yǎng)6個(gè)月以上，耗能非常大)，能源消耗也非常少。此外，本發(fā)明還利用育苗盤和育苗架結(jié)合起來(lái)，節(jié)約了白及育苗占地面積大的不足。因此，本發(fā)明成功解決了當(dāng)前白及苗的生產(chǎn)技術(shù)難題，實(shí)現(xiàn)了白及苗生產(chǎn)的“兩低兩高”(低成本和低耗能、高質(zhì)量和高效率)，有利于大規(guī)模工廠化生產(chǎn)育苗，進(jìn)一步降低農(nóng)戶白及苗費(fèi)購(gòu)買成本。

盡管已用具體實(shí)施例來(lái)說(shuō)明和描述了本發(fā)明，然而應(yīng)意識(shí)到，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下可以作出許多其它的更改和修改。因此，這意味著在所附權(quán)利要求中包括屬于本發(fā)明范圍內(nèi)的所有這些變化和修改。