本發(fā)明屬于生物防治領(lǐng)域，具體涉及枯草芽孢桿菌菌株bab-1在防治瓜類白粉病上的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：瓜類白粉病是瓜類生產(chǎn)上最主要的葉部病害之一，該病害主要由二孢白粉菌(erysiphecichoracearumhe)和單囊殼菌(sphaerothecafuliginea)兩種真菌引起，我國(guó)以單囊殼菌(sphaerothecafuliginea)為主。瓜類白粉病主要危害黃瓜、甜瓜、西葫蘆、南瓜和苦瓜等作物，尤其黃瓜和甜瓜是我國(guó)北方溫室主栽蔬菜和水果，其白粉病的發(fā)生，嚴(yán)重影響黃瓜和甜瓜的產(chǎn)量和品質(zhì)；通常因白粉病而導(dǎo)致的黃瓜或甜瓜減產(chǎn)約在10％，而流行年份高達(dá)30％左右。該病菌從幼苗期到成株期都能侵染瓜類植株，具有流行性強(qiáng)、發(fā)病率高、潛育期短和再侵染頻繁的特點(diǎn)，是瓜類生產(chǎn)中亟待解決的問題。瓜類白粉病以化學(xué)防治為主，如托布津、粉銹寧、瑞毒銅、多菌靈、氟硅唑、仙生、世高等是用于防治黃瓜白粉病的主要化學(xué)農(nóng)藥。但是長(zhǎng)期大量使用化學(xué)農(nóng)藥，具有病原菌容易產(chǎn)生抗藥性，致使防治效果降低，同時(shí)容易造成農(nóng)產(chǎn)品和環(huán)境污染、引起新病害或次生病害大發(fā)生等問題。生物防治由于具有?；詮?qiáng)、藥效持久性好、不易產(chǎn)生抗藥性、不會(huì)造成環(huán)境污染以及成本低等優(yōu)點(diǎn)，日益受到青睞。目前防治瓜類白粉病的微生物主要有：地衣芽孢桿菌(bacilluslicheniformis，cn102399712a)、綠色木霉(trichodermaviride，cn101724572a)、黃麻鏈霉菌(streptomycescorchorusii，cn102870821a)枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis，cn1934241a，cn104403970a)、淡紫灰鏈霉菌(strepomyceslavendulae，cn101481669a)、哈茨木霉菌(trichodermaharziamum，cn101575574a)和蕈狀芽孢桿菌(bacillusmycoides，cn105002120a)等，但是商品化的微生物制劑并不多。另外，由于生物多樣性和共同進(jìn)化作用，需要不斷篩選新的生物微生物，以應(yīng)對(duì)病原菌的生物多樣性和生理小種的不斷進(jìn)化。專利《一種枯草芽孢桿菌及其菌劑和應(yīng)用》(cn101148650a)中公開了枯草芽孢桿菌菌株bab-1在防治棉花立枯病菌、小麥紋枯病菌、番茄灰霉病菌、黃瓜灰霉病菌、番茄早疫病菌、黃瓜枯萎病菌、玉米穗腐病菌、小麥赤霉病菌、棉花枯萎病菌、玉米黃斑病菌和小麥全蝕病菌等植物病害上的應(yīng)用，但是沒有發(fā)現(xiàn)將bab-1用于防治瓜類白粉病的報(bào)道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明目的在于提供枯草芽孢桿菌菌株bab-1在防治瓜類白粉病上的用途。本發(fā)明另一目的在于提供含有bab-1的微生物菌劑在防治瓜類白粉病上的用途。本發(fā)明第三目的在于提供利用枯草芽孢桿菌菌株bab-1防治瓜類白粉病的方法。本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：本發(fā)明提供了枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)菌株bab-1在防治瓜類白粉病上的應(yīng)用。所述的枯草芽孢桿菌(baci11ussubtilis)菌株bab-1的保藏編號(hào)為cgmccno.2099(參見cn101148650a)。上述應(yīng)用中所述的瓜類白粉病是指黃瓜白粉病或甜瓜白粉病等。上述應(yīng)用中所述的瓜類白粉病的病原菌為二孢白粉菌(erysiphecichoracearumhe)或瓜單囊殼菌(sphaerothecafuliginea)。本發(fā)明還提供了含有枯草芽孢桿菌bab-1的微生物菌劑在防治瓜類白粉病上的應(yīng)用。所述的微生物菌劑的活性成分為枯草芽孢桿菌bab-1菌體。所述的微生物菌劑為液體制劑。所述的微生物菌劑的制備方法，參見cn101148650a說明書。所述的瓜類白粉病是指黃瓜白粉病或甜瓜白粉病等。所述的瓜類白粉病的病原菌為二孢白粉菌(erysiphecichoracearumhe)或瓜單囊殼菌(sphaerothecafuliginea)。本發(fā)明還提供了利用含有枯草芽孢桿菌bab-1的微生物菌劑防治瓜類白粉病的方法，包括將含有枯草芽孢桿菌bab-1的微生物菌劑用水稀釋至活菌體數(shù)為107cfu/ml，于瓜類白粉病發(fā)病前進(jìn)行葉面噴霧。本發(fā)明具有的優(yōu)點(diǎn)和有益效果：(1)本發(fā)明為防治瓜類白粉病提供了一種有效生物防治方法；(2)枯草芽孢桿菌bab-1對(duì)瓜類白粉病的藥效高，平均防效在85.0％以上；(3)利用枯草芽孢桿菌bab-1及其菌劑防治瓜類白粉病?；詮?qiáng)，且不易產(chǎn)生抗藥性；(4)本發(fā)明涉及的微生物菌劑對(duì)人、畜安全，沒有環(huán)境污染問題；(5)本發(fā)明涉及的微生物菌劑制備方法簡(jiǎn)單、成本低、使用簡(jiǎn)單。具體實(shí)施方式下面以具體實(shí)施例來進(jìn)一步清楚地解釋本發(fā)明，但是不以任何方式構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特別說明，均為常規(guī)方法；下述實(shí)施例中的百分含量，如無特別說明，均為重量百分含量。實(shí)施例1bab-1微生物菌劑的制備按照如下步驟進(jìn)行：(1)菌種活化：將保存于-80℃的枯草芽孢桿菌(baci11ussubtilis)菌株bab-1(保藏編號(hào)為cgmccno.2099)在lb平板培養(yǎng)基(其組成成分及其重量比為：胰蛋白胨1g，酵母提取物0.5g，氯化鈉1g，瓊脂粉15g，水1000ml)上進(jìn)行活化(30℃)，挑取單菌落在lb斜面培養(yǎng)基(其組成成分及其重量比同lb平板培養(yǎng)基)上在32℃下培養(yǎng)20小時(shí)，得活化的菌株；(2)種子液的制備：按常規(guī)方法制作lb液體培養(yǎng)基(其組成成分及其重量比為：胰蛋白胨1g，酵母提取物0.5g，氯化鈉1g，水1000ml)，在250ml三角瓶中裝入lb培養(yǎng)液100ml，高壓濕熱滅菌，待溫度降到室溫后，每瓶中接入一接種環(huán)步驟(1)中活化好的菌株，在30℃、搖床轉(zhuǎn)速190rpm的條件下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)24h小時(shí)，得種子液；(3)蔗糖豆餅培養(yǎng)基的制備：按照重量百分比將蔗糖3.0％，豆餅粉2％，nacl0.1％，caco30.3％，kh2po40.02％和mgso4·7h2o0.03％加入水中，攪拌混合均勻，即得蔗糖豆餅培養(yǎng)基；分裝于500ml三角瓶中，每瓶200ml；在121℃對(duì)蔗糖豆餅培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌30分鐘，再降溫到30℃?zhèn)溆茫?4)發(fā)酵培養(yǎng)：向步驟(3)所得每瓶蔗糖豆餅培養(yǎng)基200ml中接種步驟(2)所得種子液2ml；在30℃、搖床轉(zhuǎn)速190rpm條件下進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)36h，以后每隔30分鐘從三角瓶中取樣進(jìn)行鏡檢，對(duì)視野中的芽孢和總菌體數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，并計(jì)算芽孢率(芽孢率(％)＝成熟芽孢數(shù)/(成熟芽孢數(shù)+菌體數(shù))×100)；芽孢率達(dá)到90％時(shí)停止發(fā)酵培養(yǎng)；共發(fā)酵培養(yǎng)約48h，得枯草芽孢桿菌bab-1的液體制劑。實(shí)施例2bab-1微生物菌劑對(duì)黃瓜白粉病防效盆栽對(duì)比試驗(yàn)(一)試驗(yàn)材料：(1)黃瓜品種：津優(yōu)1號(hào)。(2)黃瓜白粉病病原菌(sphaerothecafuliginea)sf-1分生孢子懸浮液。初始菌株來自河北農(nóng)業(yè)大學(xué)，接種用黃瓜白粉病病原菌分生孢子懸浮液由初始菌株在河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所植病生防實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)繁得來。(二)試驗(yàn)處理：(1)bab-1液體制劑：實(shí)施例1制備的bab-1液體制劑的100倍水稀釋液。(2)空白對(duì)照：清水。(三)試驗(yàn)方法：本試驗(yàn)在河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所植病生防實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。在直徑6cm的營(yíng)養(yǎng)缽中培育津優(yōu)1號(hào)黃瓜苗，育苗基質(zhì)為蛭石，每個(gè)營(yíng)養(yǎng)缽播種兩粒種子，出苗后留取一棵壯苗。待黃瓜苗子葉完全展平開展試驗(yàn)。試驗(yàn)設(shè)2個(gè)處理，處理1為在黃瓜子葉上噴施實(shí)施例1制備的bab-1液體制劑100倍水稀釋液，處理2為空白對(duì)照，噴施等量清水；每個(gè)處理重復(fù)4次，每個(gè)重復(fù)20株黃瓜苗。在25℃條件下保濕24h，然后噴霧接種黃瓜白粉病病原菌sf-1分生孢子懸浮液(1×105個(gè)/ml)，于25℃恒溫培養(yǎng)(光照14小時(shí)，黑暗10小時(shí))。待空白對(duì)照子葉充分發(fā)病后,調(diào)查黃瓜子葉白粉病病情并計(jì)算病情指數(shù)和防效。調(diào)查方法、分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)和防治效果計(jì)算方法參照中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則(一)殺菌劑防治黃瓜白粉病(gb/t17980.30-2000)。結(jié)果(見表1)經(jīng)枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)bab-1液體制劑處理的黃瓜子葉的病情指數(shù)為1.37，顯著低于空白對(duì)照的病情指數(shù)31.83，bab-1液體制劑對(duì)黃瓜白粉病的防效為95.70％。說明枯草芽孢桿菌菌株bab-1及其bab-1液體制劑對(duì)黃瓜白粉病具有突出的防治效果。表1bab-1液體制劑對(duì)黃瓜白粉病防效對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果處理病情指數(shù)防效(％)bab-1液體制劑1.37b95.70空白對(duì)照31.83a/實(shí)施例3bab-1微生物菌劑對(duì)黃瓜白粉病防效盆栽對(duì)比試驗(yàn)(一)試驗(yàn)材料：(1)黃瓜品種：津優(yōu)1號(hào)。(2)黃瓜白粉病病原菌(sphaerothecafuliginea)sf-1分生孢子懸浮液(同實(shí)施例2)。(二)試驗(yàn)處理：(1)bab-1液體制劑：實(shí)施例1制備的bab-1液體制劑的100倍水稀釋液；(2)空白對(duì)照：清水。(三)試驗(yàn)方法：本試驗(yàn)在河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所植病生防實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。在直徑6cm的營(yíng)養(yǎng)缽中培育津優(yōu)1號(hào)黃瓜苗，育苗基質(zhì)為蛭石，每個(gè)營(yíng)養(yǎng)缽播種兩粒種子，出苗后留取一棵壯苗。待黃瓜苗生長(zhǎng)出兩片真葉時(shí)移栽到直徑15cm的塑料花盆中(花盆中裝填蛭石與田園土按照1:1比例配成的基質(zhì))，在25℃恒溫培養(yǎng)(光照14小時(shí)，黑暗10小時(shí))。將黃瓜苗用竹竿支撐固定，待長(zhǎng)出5-7片真葉后開展試驗(yàn)。處理1噴施實(shí)施例1制備的bab-1液體制劑100倍水稀釋液；處理2為空白對(duì)照，噴施等量清水。每個(gè)處理重復(fù)4次，每個(gè)重復(fù)5盆黃瓜苗。在25℃條件下保濕24h；然后噴霧接種黃瓜白粉病病原菌sf-1分生孢子懸浮液(1×105個(gè)/ml)，繼續(xù)于25℃恒溫培養(yǎng)(光照14小時(shí)，黑暗10小時(shí))。待空白對(duì)照真葉充分發(fā)病后,調(diào)查黃瓜真葉白粉病病情并計(jì)算病情指數(shù)和防效(gb/t17980.30-2000)。結(jié)果(見表2)經(jīng)bab-1液體制劑處理的黃瓜真葉的病情指數(shù)為6.42，顯著低于空白對(duì)照的病情指數(shù)87.05；bab-1液體制劑對(duì)黃瓜白粉病的防效為92.62％。說明枯草芽孢桿菌菌株bab-1及其bab-1液體制劑對(duì)黃瓜白粉病具有突出的防治效果。表2bab-1液體制劑對(duì)黃瓜白粉病防效對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果處理病情指數(shù)防效(％)bab-1液體制劑6.42b92.62空白對(duì)照87.05a/實(shí)施例4bab-1微生物菌劑對(duì)黃瓜白粉病防效田間對(duì)比試驗(yàn)(一)試驗(yàn)材料：黃瓜品種：津優(yōu)1號(hào)。(二)試驗(yàn)處理：(1)bab-1液體制劑：實(shí)施例1制備的bab-1液體制劑的100倍水稀釋液。(2)化學(xué)藥劑：10％苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑(瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司)。(3)空白對(duì)照：清水。(三)試驗(yàn)方法：本試驗(yàn)于2015年春季在河北省保定市徐水縣遂城鎮(zhèn)城北莊村楊寶山黃瓜大棚內(nèi)開展。翻地、施肥、播種、澆水同當(dāng)?shù)剞r(nóng)事操作。試驗(yàn)設(shè)置3個(gè)處理，處理1為微生物菌劑，噴施實(shí)施例1制備的bab-1液體制劑100倍水稀釋液；處理2為化學(xué)藥劑，噴施10％苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑(瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司生產(chǎn))800倍水稀釋液；處理3為空白對(duì)照，噴施等量清水；每個(gè)處理重復(fù)4次，每個(gè)重復(fù)3行，每行約25棵黃瓜苗。在黃瓜白粉病發(fā)病之前開始試驗(yàn)，間隔7-10天處理一次，直到空白對(duì)照充分發(fā)病，調(diào)查黃瓜白粉病病情并計(jì)算病情指數(shù)和防效(gb/t17980.30-2000)。結(jié)果(見表3)經(jīng)bab-1液體制劑處理的病情指數(shù)為6.28，顯著低于空白對(duì)照的病情指數(shù)76.25；bab-1液體制劑對(duì)黃瓜白粉病的防效達(dá)91.76％，優(yōu)于化學(xué)藥劑的防治效果89.04％。說明枯草芽孢桿菌菌株bab-1及其液體制劑對(duì)黃瓜白粉病具有突出的防治效果。表3bab-1液體制劑對(duì)黃瓜白粉病防效對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果處理病情指數(shù)防效(％)bab-1液體制劑6.28bc91.76化學(xué)藥劑8.36b89.04空白對(duì)照76.25a/實(shí)施例5bab-1微生物菌劑對(duì)甜瓜白粉病防效田間對(duì)比試驗(yàn)(一)試驗(yàn)材料：甜瓜品種：玉金香和紅瑞紅，購(gòu)自河北農(nóng)業(yè)大學(xué)科技市場(chǎng)種子銷售處。(二)試驗(yàn)處理：(1)bab-1液體制劑：實(shí)施例1制備的bab-1液體制劑100倍水稀釋液。(2)化學(xué)藥劑：10％苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑(來源同實(shí)施例4)。(3)空白對(duì)照：清水。(三)試驗(yàn)方法：本試驗(yàn)于2015年春季在河北省保定市清苑縣張登店村劉鐵軍甜瓜大棚內(nèi)開展。試驗(yàn)在兩個(gè)甜瓜品種上同時(shí)開展。試驗(yàn)設(shè)置3個(gè)處理，處理1為微生物菌劑，噴施實(shí)施例1制備的bab-1液體制劑100倍水稀釋液；處理2為化學(xué)藥劑，噴施10％苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑(瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司生產(chǎn))800倍水稀釋液；處理3為空白對(duì)照，噴施等量清水。每個(gè)處理重復(fù)4次，每個(gè)重復(fù)3行，每行20棵甜瓜苗。在甜瓜白粉病發(fā)病之前開始試驗(yàn)，間隔7-10天處理一次，直到空白對(duì)照充分發(fā)病，調(diào)查甜瓜白粉病病情并計(jì)算病情指數(shù)和防效(參照gb/t17980.30-2000)。結(jié)果(見表4)在甜瓜品種玉金香的田間小區(qū)試驗(yàn)中，經(jīng)bab-1液體制劑處理和化學(xué)藥劑處理的病情指數(shù)分別為11.1和13.0，顯著低于空白對(duì)照的病情指數(shù)(100.0)，防治效果分別為88.9％和87.0％；在甜瓜品種紅瑞紅的田間小區(qū)試驗(yàn)中，經(jīng)bab-1液體制劑處理和化學(xué)藥劑處理的病情指數(shù)分別為11.7和12.2，顯著低于空白對(duì)照的病情指數(shù)100.0，防治效果分別為88.3％和87.8％。說明bab-1及其bab-1液體制劑對(duì)甜瓜白粉病具有很好的防治效果。表4bab-1液體制劑對(duì)甜瓜白粉病防效對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果當(dāng)前第1頁12