本發(fā)明涉及一種促進(jìn)忍冬花蕾中次生代謝產(chǎn)物積累的方法，具體涉及一種利用真菌促進(jìn)忍冬花蕾中木犀草苷積累的方法。
背景技術(shù)：
隨著“回歸自然”潮流的涌起，傳統(tǒng)天然植物藥越來越受到人們的青睞。金銀花源于忍冬科植物忍冬lonicerajaponicathunb.的干燥花蕾或帶初開的花，性寒，味甘，具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱之功效，是中醫(yī)臨床常用藥，據(jù)統(tǒng)計約1/3的中藥方劑中用到了金銀花，而且在雙黃連、銀翹解毒丸、銀黃口服液等中成藥中廣泛應(yīng)用，特別在sars和禽流感等重大疫情防治中發(fā)揮了巨大作用，被譽(yù)為“中藥中的青霉素”。目前國內(nèi)外市場對金銀花的需求量日益增加，對藥材質(zhì)量的要求也越來越高。藥用植物體內(nèi)的次生代謝物質(zhì)通常是中藥材發(fā)揮臨床療效的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，2015版《中國藥典》中規(guī)定忍冬體內(nèi)的木犀草苷含量被作為衡量金銀花藥材品質(zhì)的重要指標(biāo)之一，因此采取有效措施促進(jìn)忍冬體內(nèi)木犀草苷的積累對于提高金銀花藥材的質(zhì)量越來越重要。
茶藨子葉狀層菌phylloporiaribis(schumach.:fr.)ryvarden是來源于忍冬植株上的一種真菌，該菌主產(chǎn)于山東平邑，寄生于忍冬植株老干或裸露的根部，其子實體被稱為“銀花蛾子”。該真菌是一種藥用真菌，在當(dāng)?shù)鼐哂杏凭玫臍v史，2002年載入《山東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》，其含有三萜類、甾醇類、多糖類和苯乙烯基吡喃酮類等有效成分，具有清熱解毒、消腫利咽、降血糖和抗腫瘤等作用。目前，對茶藨子葉狀層菌的研究較少，主要是將其制成食品或藥用原料，其他方面的用途未見報道。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種利用真菌促進(jìn)忍冬花蕾中木犀草苷積累的方法，該方法是在忍冬植株上接種茶藨子葉狀層菌和米曲霉，以提高忍冬花蕾中次生代謝產(chǎn)物——木犀草苷的含量，該方法對提高金銀花藥材的品質(zhì)具有重要意義。
茶藨子葉狀層菌phylloporiaribis(schumach.:fr.)ryvarden是生長于忍冬植株上的一種原始野生真菌，經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，原始野生狀態(tài)下忍冬植株上生長的茶藨子葉狀層菌對忍冬花蕾中次生代謝物質(zhì)的積累未產(chǎn)生顯著影響，這可能與忍冬和茶藨子葉狀層菌長期共存維持在相對的物質(zhì)與生態(tài)的平衡有關(guān)。發(fā)明人經(jīng)過研究，將茶藨子葉狀層菌與米曲霉一起共同接種在忍冬植株上，這兩種菌共同接種能促進(jìn)忍冬花蕾中次生代謝產(chǎn)物的積累，從而使忍冬花蕾中次生代謝物質(zhì)的含量有了很大的提升。
本發(fā)明具體技術(shù)方案如下：
一種利用真菌促進(jìn)忍冬花蕾中木犀草苷積累的方法，該方法是：采用扦插育苗法栽培忍冬，并且在扦插過程中對忍冬枝條進(jìn)行真菌接種，以提高忍冬花蕾中木犀草苷的含量；所述真菌為茶藨子葉狀層菌和米曲霉。
本發(fā)明通過在扦插過程中對忍冬枝條進(jìn)行真菌接種的方式來提高忍冬花蕾中次生代謝產(chǎn)物木犀草苷的積累，從而提高其含量。本發(fā)明扦插育苗的方法包括以下步驟：
（1）扦插的前2天用質(zhì)量濃度為1/3000的多菌靈水溶液對基質(zhì)和插床進(jìn)行澆灌，直至基質(zhì)和插床全部濕透；
（2）然后將基質(zhì)和插床在太陽下暴曬2天，將基質(zhì)放于插床內(nèi)；
（3）扦插前2小時用真菌菌液對基質(zhì)和插床進(jìn)行澆灌，直至基質(zhì)和插床全部澆透，所述真菌菌液為茶藨子葉狀層菌菌液和米曲霉菌液的混合液；
（4）將忍冬扦插枝條滅菌消毒，置于真菌菌液中浸泡10-12h，取出后蘸取生根粉，然后進(jìn)行扦插，扦插后澆一次透水；
（5）扦插后，對忍冬扦插枝條進(jìn)行扦插育苗管理，直至扦插苗長到符合移栽或出圃要求，然后將符合要求的扦插苗進(jìn)行移栽和苗期管理（即田間管理），植株現(xiàn)蕾后15-20天即可采摘花蕾。
本發(fā)明方法中，采用真菌菌液對忍冬植株進(jìn)行接種，所述真菌菌液為茶藨子葉狀層菌菌液和米曲霉菌液的混合液。其中，所述茶藨子葉狀層菌菌液可以以野生狀態(tài)下忍冬植株上生長的茶藨子葉狀層菌phylloporiaribis(schumach.:fr.)ryvarden子實體為菌種培養(yǎng)得到，也可以以保藏號為cgmccno1195的茶藨子葉狀層菌phylloporiaribis(schumach.:fr.)ryvarden為菌種培養(yǎng)得到；所述米曲霉菌液可以以米曲霉為菌種培養(yǎng)得到，所述米曲霉可以從市場中購買。
進(jìn)一步的，本發(fā)明所用的茶藨子葉狀層菌菌液的制備方法為：
a.將茶藨子葉狀層菌phylloporiaribis(schumach.:fr.)ryvarden接種到斜面培養(yǎng)基上，在29℃培養(yǎng)5-7天；所述斜面培養(yǎng)基由以下重量百分含量的組分組成：土豆20%、瓊脂1.5%、葡萄糖2%、磷酸二氫鉀0.2%、硫酸鎂0.05%、維生素1×10-3%，水余量；
b.將斜面培養(yǎng)后生長的較好的茶藨子葉狀層菌菌絲團(tuán)接種到液體培養(yǎng)基中，在29℃、150rpm的條件下培養(yǎng)5-6天，得茶藨子葉狀層菌菌液，每1000ml液體培養(yǎng)基每瓶接種5-8個菌絲團(tuán)；所述液體培養(yǎng)基由以下重量百分含量的組分組成：土豆30%、葡萄糖2%、瓊脂1.4%、麥芽汁（10bx）10%、蔗糖1.5%、蛋白胨0.2%、麩皮4%、磷酸二氫鉀0.05%、硫酸鎂0.025%、水余量。
進(jìn)一步的，本發(fā)明所用的米曲霉菌液的制備方法為：
（1）將米曲霉接種到斜面培養(yǎng)基上，在25-30℃恒溫培養(yǎng)3-5天；所述斜面培養(yǎng)基由以下重量百分含量的組分組成：土豆20%、葡萄糖2%、瓊脂1.6%、蛋白胨0.2%、磷酸二氫鉀0.2%、七水硫酸鎂0.1%；
（2）將斜面培養(yǎng)所得的菌種按照5-10wt%的接種量接種到液體培養(yǎng)基中，在25-30℃、50-150r/min的搖床上培養(yǎng)3-5天，得米曲霉菌液；所述液體培養(yǎng)基由以下重量百分含量的組分組成：米糠0.8%、蔗糖0.5%、葡萄糖1.5%、酵母粉0.6%、氯化亞鐵0.015%、硫酸鎂0.10%、磷酸氫二鉀0.15%、水余量。
本發(fā)明上述真菌菌液中，茶藨子葉狀層菌菌液和米曲霉菌液的體積比為2-8:1，優(yōu)選為5:1。所述茶藨子葉狀層菌菌液和米曲霉菌液是按照上述方法得到的菌液，將這兩者菌液按照規(guī)定的體積比混合，即可得到真菌菌液。
上述扦插方法中，步驟（1）中所用基質(zhì)為河砂、蛭石、腐殖土按質(zhì)量比2∶1∶1混合所得。
上述扦插方法中，忍冬扦插枝條的制備方法如下：選擇陰天上午9:00左右采集扦插枝條，剪取兩年生4mm粗的生長健壯、無病蟲害的嫩枝或硬枝，剪成長30cm左右的插條，每個插條上有6-8個節(jié)，每個節(jié)位的葉片各自剪掉1/2葉子，扦插穗條下端切口要平整為斜口，50條扎成1捆，用噴霧器將枝條噴濕，待枝條全部濕潤后，將其放進(jìn)泡沫隔熱箱子里，上面再蓋一層濕毛巾保濕，蓋上蓋子，等待扦插。
上述扦插方法中，步驟（4）中忍冬扦插枝條用0.06wt%的高錳酸鉀水溶液浸泡10-12h，進(jìn)行滅菌消毒。滅菌消毒后將忍冬扦插枝條在真菌菌液中浸泡，以使盡量多的真菌接種到扦插枝條中，浸泡后蘸取生根粉即可進(jìn)行扦插。所述生根粉是本領(lǐng)域常用的促進(jìn)枝條生根的處理劑，可以自行配置，也可以從市場上購買。
上述扦插方法中，扦插時，將扦插枝條的斜口端垂直插入育苗床內(nèi)，下端插進(jìn)基質(zhì)8-12cm，扦插密度為0.5×0.25cm。扦插后要踩緊壓實，澆透1次水。之后及時進(jìn)行澆水、施肥等常規(guī)管理，一般每隔5天澆1次水，7-15天能生根并萌芽開始生長，成活后即可進(jìn)行移栽、常規(guī)田間管理。
本發(fā)明方法中，扦插枝條滿足移栽條件后，選擇土質(zhì)疏松、肥沃、排水良好的砂質(zhì)壤土和灌溉方便、有水源的地方進(jìn)行移栽。選地后深翻土壤30cm以上，打碎土塊，整平耙細(xì)，施足基肥。然后做成寬1.3m的高畦或高壟進(jìn)行栽植。栽植地可利用荒坡、地邊、溝旁、房前屋后等零星地塊，一般于早春萌發(fā)前或秋冬季休眠期進(jìn)行移栽。移栽時，在整好的栽植地上按行距150cm、株距120cm挖穴，寬深各30-40cm，一般每hm2栽植3750～4200穴。每穴施入土雜肥5kg與底土拌勻，然后每穴栽壯苗1株，填細(xì)土壓緊、踏實，澆透定根水，然后每隔30天澆水一次，并進(jìn)行常規(guī)田間管理，現(xiàn)蕾后15-20天即可采摘。采摘宜在每天的上午，采摘時勿夾入枝葉雜質(zhì)，宜輕拿輕放，采后的鮮花應(yīng)及時放置40-50℃低溫烘干待檢測。
本發(fā)明用真菌對忍冬植株進(jìn)行處理，使忍冬生長過程中伴有真菌的生長，真菌生長在忍冬的莖基部位，真菌的生長能夠促進(jìn)忍冬花蕾中次生代謝產(chǎn)物——木犀草苷的積累，提高金銀花的質(zhì)量。本發(fā)明方法原料來源廣泛、操作方便，易于實施，對生產(chǎn)上提高金銀花質(zhì)量具有重要意義。
具體實施方式
下面通過具體實施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明，下述說明僅是為了解釋本發(fā)明，并不對其內(nèi)容進(jìn)行限制。
實施例1
采用以下方法對忍冬進(jìn)行栽培，采取花蕾：
1、忍冬扦插枝條的制備
4月上旬，選擇陰天上午9:00左右采集扦插枝條，選取兩年生4mm粗的生長健壯、無病蟲害無、無干縮、無破皮損傷的健壯嫩枝或硬枝，剪成長為30cm左右的插條，每個插條上有6-8個節(jié)，每個節(jié)位的葉片各自剪掉1/2葉子，扦插穗條下端切口要平整為斜口。將剪取的枝條每50條扎成1捆，用噴霧器將枝條噴濕，待枝條全部濕潤后，將其放進(jìn)泡沫隔熱箱子里，上面再蓋一層濕毛巾保濕，蓋上蓋子，等待扦插。
、真菌菌液的制備
2.1制備茶藨子葉狀層菌菌液
a.培養(yǎng)基的制備
斜面培養(yǎng)基的制備：在市場上購買土豆，削去外皮，切成1cm見方小塊，將土豆塊加入水中，121℃滅菌后煮沸30min（注意火力的控制，可適當(dāng)補(bǔ)水），用紗布過濾取濾液。在濾液中加入瓊脂、葡萄糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、維生素，用玻璃棒不斷攪拌，加熱溶解，補(bǔ)足水分，調(diào)整ph值至6，裝入試管，滅菌后冷卻，制成斜面培養(yǎng)基；斜面培養(yǎng)基配方為（wt%）：土豆20%、瓊脂1.5%、葡萄糖2%、磷酸二氫鉀0.2%、硫酸鎂0.05%、維生素1×10-3%，水余量。
液體培養(yǎng)基的制備：在市場上購買土豆，削去外皮，切成1cm見方小塊，將土豆塊加入水中，121℃滅菌后煮沸30min（注意火力的控制，可適當(dāng)補(bǔ)水），用紗布過濾取濾液。在濾液中加入葡萄糖、瓊脂、麥芽汁（10bx）、蔗糖、蛋白胨、麩皮、磷酸二氫鉀、硫酸鎂，補(bǔ)足水分，調(diào)整ph值至6，滅菌，得液體培養(yǎng)基；液體培養(yǎng)基配方為（wt%）：土豆30%、葡萄糖2%，瓊脂1.4%，麥芽汁（10bx）10%，蔗糖1.5%，蛋白胨0.2%，麩皮4%，磷酸二氫鉀0.05%、硫酸鎂0.025%，水余量。
b.茶藨子葉狀層菌菌液的制備
接種：接種工作在凈化工作臺上進(jìn)行。當(dāng)以野生狀態(tài)下忍冬植株上生長的茶藨子葉狀層菌phylloporiaribis(schumach.:fr.)ryvarden子實體為菌種時，接種前先用紫外燈對子實體消毒40min，在無菌狀態(tài)下將子實體邊緣正在生長的部分組織接種于含斜面培養(yǎng)基的試管中，在29℃培養(yǎng)5-7天。當(dāng)以保藏號為cgmccno1195的茶藨子葉狀層菌phylloporiaribis(schumach.:fr.)ryvarden為菌種時，直接將該菌種接種于含斜面培養(yǎng)基的試管中，在29℃培養(yǎng)5-7天。
液體培養(yǎng)：取上述斜面試管中固體培養(yǎng)生長情況較好的茶藨子葉狀層菌菌絲團(tuán)進(jìn)行接種，接種到液體培養(yǎng)基中，注意剔除底部含有瓊脂的斜面培養(yǎng)基，菌絲團(tuán)的直徑大約為1-2mm，盡量使所取菌絲團(tuán)的大小保持一致，每1000ml液體培養(yǎng)基接種8個菌絲團(tuán)，接種后將三角瓶置于29℃、在轉(zhuǎn)速150rpm的條件下培養(yǎng)6天，得茶藨子葉狀層菌菌液。
2.2制備米曲霉菌液
a.培養(yǎng)基的制備
斜面培養(yǎng)基的制備：在市場上購買土豆，削去外皮，切成1cm見方小塊，將土豆塊加入水中，121℃滅菌后煮沸30min（注意火力的控制，可適當(dāng)補(bǔ)水），用紗布過濾取濾液。在濾液中加入葡萄糖、瓊脂、蛋白胨、磷酸二氫鉀、七水硫酸鎂，用玻璃棒不斷攪拌，加熱溶解，補(bǔ)足水分，調(diào)整ph值至6，裝入試管，滅菌后冷卻，制成斜面培養(yǎng)基；斜面培養(yǎng)基配方為（wt%）：土豆20%、葡萄糖2%、瓊脂1.6%、蛋白胨0.2%、磷酸二氫鉀0.2%、七水硫酸鎂0.1%。
液體培養(yǎng)基的制備：液體培養(yǎng)基配方為（wt%）：米糠0.8%、蔗糖0.5%、葡萄糖1.5%、酵母粉0.6%、氯化亞鐵0.015%、硫酸鎂0.10%、磷酸氫二鉀0.15%、水余量。將各組分混合，121℃滅菌后煮沸30min（注意火力的控制，可適當(dāng)補(bǔ)水）調(diào)整ph至6，滅菌，得液體培養(yǎng)基。
b.米曲霉菌液的制備
接種：接種工作在凈化工作臺上進(jìn)行。以米曲霉（購自山東濟(jì)寧市金益菌生物科技有限公司）為菌種，直接將該菌種接種于含斜面培養(yǎng)基的試管中，在30℃培養(yǎng)3-5天。
液體培養(yǎng)：將斜面培養(yǎng)所得的菌種按照8wt%的接種量接種到液體培養(yǎng)基中，在30℃、50-150r/min的搖床上培養(yǎng)5天，得米曲霉菌液。
2.3制備真菌菌液
取上述得到的茶藨子葉狀層菌菌液和米曲霉菌液，將它們按照5:1的體積比混合均勻，即得真菌菌液。
、忍冬扦插育苗床的準(zhǔn)備
忍冬扦插育插床采用長2m，寬1m，高0.25m的底部具有漏水孔的塑料容器，內(nèi)裝的培養(yǎng)基質(zhì)為河砂、蛭石、腐殖土，質(zhì)量比為2∶1∶1混合而成。扦插的前2天用質(zhì)量濃度為1/3000的多菌靈水溶液對基質(zhì)和插床進(jìn)行澆灌，直至基質(zhì)和插床全部濕透。然后將基質(zhì)和插床在太陽下暴曬2天，將基質(zhì)放于插床內(nèi)。扦插前2小時用真菌菌液進(jìn)行澆灌，直至基質(zhì)和插床全部澆透。
、忍冬枝條的扦插
將忍冬扦插枝條放入0.06wt%的高錳酸鉀水溶液中，浸泡10-12h，進(jìn)行滅菌消毒。然后置于真菌菌液（茶藨子葉狀層菌菌液和米曲霉菌液體積比為5:1）中浸泡12h，取出后蘸取生根粉，速沾20s，然后進(jìn)行扦插。扦插時，將扦插枝條的斜口端垂直插入育苗床內(nèi)，下端插進(jìn)基質(zhì)8-12cm，扦插密度一般為0.5×0.25cm。扦插后要踩緊壓實，澆透1次水。之后及時進(jìn)行澆水、施肥等常規(guī)管理，一般每隔5天澆1次水，7-15天能生根并萌芽開始生長，成活后即可進(jìn)行移栽。
、移栽過程
扦插枝條滿足移栽條件后，選擇地選擇土質(zhì)疏松、肥沃、排水良好的砂質(zhì)壤土和灌溉方便、有水源的地方進(jìn)行移栽。選地后深翻土壤30cm以上，打碎土塊，整平耙細(xì)，施足基肥。然后做成寬1.3m的高畦或高壟進(jìn)行栽植。栽植地可利用荒坡、地邊、溝旁、房前屋后零星地塊，一般于早春萌發(fā)前或秋冬季休眠期進(jìn)行移栽。移栽時，在整好的栽植地上按行距150cm、株距120cm挖穴，寬深各30-40cm，一般每hm2栽植3750～4200穴。每穴施入土雜肥5kg與底土拌勻，然后每穴栽壯苗1株，填細(xì)土壓緊、踏實，澆透定根水，然后每隔30天澆水一次，并進(jìn)行常規(guī)田間管理。帶植株長至現(xiàn)蕾后15-20天即可采摘。采摘宜在每天的上午，采摘時勿夾入枝葉雜質(zhì)，宜輕拿輕放，采后的鮮花應(yīng)及時放置40-50℃低溫烘干待檢測。
實施例2
按照實施例1的方法對忍冬進(jìn)行栽培，采集花蕾，不同的是：茶藨子葉狀層菌菌液和米曲霉菌液的體積比為2:1。
實施例3
按照實施例1的方法對忍冬進(jìn)行栽培，采集花蕾，不同的是：茶藨子葉狀層菌菌液和米曲霉菌液的體積比為8:1。
對比例1
按照實施例1的方法對忍冬進(jìn)行栽培，采集花蕾，不同的是：所用真菌菌液為單一的茶藨子葉狀層菌菌液。
對比例2
按照實施例1的方法對忍冬進(jìn)行栽培，采集花蕾，不同的是：所用真菌菌液為單一的米曲霉菌液。
對比例3
按照實施例1的方法對忍冬進(jìn)行栽培，采集花蕾，不同的是：所用真菌菌液是體積比為5:1的茶藨子葉狀層菌菌液和巨大芽孢桿菌菌液的混合液。
巨大芽孢桿菌菌液的制備方法為：
按照1wt%的接種量將巨大芽孢桿菌（購自揚(yáng)州市海誠生物技術(shù)有限公司）接種到液體培養(yǎng)基中，調(diào)整溫度為35-38℃，無菌風(fēng)量控制在90-100m3/h，發(fā)酵2天。液體培養(yǎng)基配方為：玉米粉1.2%、酵母粉0.3%、豆餅粉0.4%、氯化鈉0.05%、硫酸鎂0.06%、磷酸氫二鉀0.2%、碳酸鈣0.1%、水余量，121℃滅菌，ph7.0-7.2。
對比例4
按照實施例1的扦插育苗方法栽培忍冬植株，采集花蕾，不同的是：基質(zhì)、插床和忍冬扦插枝條均不采用真菌菌液進(jìn)行處理。
為了驗證本發(fā)明栽培方法對花蕾次生代謝產(chǎn)物含量的影響，在山東平邑進(jìn)行栽培實驗。實驗方法是：選擇合適的移栽地，將其分為多塊小區(qū)，每小區(qū)面積66.7m2，采用隨機(jī)區(qū)組排列，每塊小區(qū)分別按照實施例1-3和對比例1-4中的一種方法栽培忍冬，每種栽培方法重復(fù)4次。除了真菌菌液的處理不同外，保持其他的育苗管理一致，例如施肥、施藥、澆水、除草。
實驗過程中，記錄忍冬植株的生長狀況、采集花蕾后對花蕾中的木犀草苷進(jìn)行檢測，評價各種方法對木犀草苷含量的影響。
木犀草苷含量檢測方法如下：
1、對照品溶液的制備：取木犀草苷對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加70％乙醇制成每1ml含40μg的溶液，即得(10℃以下保存)。
2、樣品溶液的制備：花蕾樣品采后置于40-50℃低溫烘干后研磨，取所需測定樣品的細(xì)粉末(過4號篩)約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50ml，稱定重量，超聲處理（功率250w，頻率35khz）1h，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取濾液10ml，回收溶劑至干，殘渣用70%乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶中，加70%乙醇至刻度，即得。用有機(jī)膜（孔徑0.2μm）過濾至液相小瓶中，待用。
3、含量檢測：采用液相色譜法進(jìn)行檢測，色譜柱為c18（4.60mm×250mm，1.7μm），以乙腈為流動相a，以0.5%冰醋酸溶液為流動相b，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測波長為350nm。理論板數(shù)按木犀草苷峰計算應(yīng)不低于20000。檢測波長為327nm，進(jìn)樣量為20ul，柱溫為40℃。
具體的檢測方法為：將對照品溶液配成不同的濃度，通過液相色譜檢測得到以濃度和峰面積為橫縱坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。將各樣品溶液采用同樣的方法進(jìn)行液相色譜檢測，根據(jù)峰面積計算各樣品中木犀草苷含量。
實驗過程發(fā)現(xiàn)，采用實施例1-3和對比例2、3的方法進(jìn)行忍冬栽培時，忍冬植株生長速度較對比例1和4快，植株現(xiàn)蕾也早于對比例1和4，植株高度平均高約1.6cm左右。并且實施例1-3和對比例2和3的忍冬植株病蟲害發(fā)病率少。對采集的花蕾進(jìn)行木犀草苷檢測，結(jié)果如下表1所示，從表中可以看出，實施例1-3的方法得到的花蕾中木犀草苷含量明顯高于各對比例的方法，而單用茶藨子葉狀層菌菌液或米曲霉菌液、或者采用其他菌與茶藨子葉狀層菌菌液配合使用的效果均不明顯，本發(fā)明真菌菌液對忍冬花蕾次生代謝產(chǎn)物的積累有很好的促進(jìn)作用。