本發(fā)明涉及植物培植技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種霍山石斛圓球莖直播實生苗的方法。
背景技術(shù)：
霍山石斛(學(xué)名:dendrobiumhuoshanensec.z.tangets.j.cheng)俗稱米斛，是蘭科石斛屬的草本植物。因其所含的生物堿、粗多糖、氨基酸、微量元素等成分具有強腎清音明目、保肝護嗓、滋陰清熱、養(yǎng)胃生津、抑制腫瘤細胞生長、增強免疫力等功效，一直被視為九大“仙草”之首。
野生狀態(tài)下，霍山石斛生長十分緩慢，其中極為細小，僅有一個簡單的胚及單層細胞的翅狀種皮構(gòu)成，無胚乳，在自然狀態(tài)下，極少萌發(fā)成苗，由于過度的采伐利用、生長緩慢、生態(tài)環(huán)境的惡化和繁殖率低等原因的影響，霍山石斛野生資源瀕臨滅絕。
通過植物組織培養(yǎng)的方法獲得霍山石斛再生植株的方法有兩個：（1）用霍山石斛成熟的種子消毒后進行無菌播種，進行芽誘導(dǎo)、莖誘導(dǎo)和根誘導(dǎo)，最后壯苗培養(yǎng)后產(chǎn)生種苗；（2）通過適宜的外植體誘導(dǎo)形成擬原球莖或者叢生芽，不斷進行增值（產(chǎn)生一定數(shù)量），然后進行芽誘導(dǎo)、莖誘導(dǎo)和根誘導(dǎo)，最后進行壯苗培養(yǎng)后產(chǎn)生種苗。
組培育苗這一過程中涉及到培養(yǎng)基制作，無菌接入外植體，原球莖無菌轉(zhuǎn)分，分化芽無菌轉(zhuǎn)分，小苗無菌轉(zhuǎn)分，中苗無菌轉(zhuǎn)分，大苗無菌轉(zhuǎn)分，培養(yǎng)室管理等步驟，由此涉及到分苗人員的招聘與管理，培養(yǎng)基制作車間的建設(shè)，無菌操作車間的建設(shè)，培養(yǎng)室的建設(shè)；而煉苗、馴化過程中又涉及到相關(guān)人員的招聘與管理，智能溫室及馴化大棚的建設(shè)。綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)方面要求企業(yè)在人力、物力、財力上都要有相當(dāng)大的投入，由此造成企業(yè)成本大、負擔(dān)重。
隨著霍山石斛產(chǎn)業(yè)化規(guī)模的不斷發(fā)展，對霍山石斛種苗的需求量也在不斷地增加，低成本高質(zhì)量的霍山石斛種苗是發(fā)展趨勢。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
有鑒于此，有必要提供一種霍山石斛圓球莖直播實生苗的方法。
本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的，一種霍山石斛圓球莖直播實生苗的方法，包括以下步驟：
步驟一：播種培養(yǎng)基的配置。
播種培養(yǎng)基包括以下配方：硝酸鉀450~550mg/l、硫酸銨200~300mg/l、硫酸鎂200~300mg/l、磷酸二氫鉀200~300mg/l、硝酸鈣600~800mg/l、碘化鉀0.81~0.85mg/l、硼酸6.0~6.4mg/l、硫酸錳22.1~22.5mg/l、硫酸鋅8.2~9.0mg/l、鉬酸鈉0.2~0.3mg/l、硫酸銅0.02~0.03mg/l、氯化鈷0.02~0.03mg/l、肌醇80~120mg/l、煙酸0.2~0.8mg/l、甘氨酸1~3mg/l、鹽酸硫胺素0.1mg/l、鹽酸吡哆醇0.2~0.8mg/l、乙二胺四乙酸二鈉37.1~37.5mg/l、硫酸亞鐵26.8~28.8mg/l、2，4-二氯苯氧乙酸0.1~0.3mg/l、6-芐基嘌呤0.4~0.8mg/l、萘乙酸0.1mg/l、赤霉素0.2mg/l、蔗糖30g/l和瓊脂4g/l，將瓊脂經(jīng)高溫溶解后，將配置好的藥品逐一倒入，溫度維持在55~65℃進行分裝，再通過121℃濕熱滅菌，滅菌時長為20min。
步驟二：營養(yǎng)液的制備。
營養(yǎng)液包括以下配方：硝酸鉀450~550mg/l、硫酸銨200~300mg/l、硫酸鎂200~300mg/l、磷酸二氫鉀200~300mg/l、硝酸鈣600~800mg/l、碘化鉀0.81~0.85mg/l、硼酸6.0~6.4mg/l、硫酸錳22.1~22.5mg/l、硫酸鋅8.2~9.0mg/l、鉬酸鈉0.2~0.3mg/l、硫酸銅0.02~0.03mg/l、氯化鈷0.02~0.03mg/l、肌醇80~120mg/l、煙酸0.2~0.8mg/l、甘氨酸1~3mg/l、鹽酸硫胺素0.1mg/l、鹽酸吡哆醇0.2~0.8mg/l、乙二胺四乙酸二鈉37.1~37.5mg/l、硫酸亞鐵26.8~28.8mg/l、2，4-二氯苯氧乙酸0.3~0.7mg/l、6-芐基嘌呤0.1mg/l、萘乙酸0.6~1mg/l和矮壯素0.6~1mg/l，直接用純化水將藥品逐一倒入，定容、滅菌冷卻后即可使用，滅菌的原因是盡量減少圓球莖直播時受到雜菌的感染。
步驟三：霍山石斛果莢的選擇和消毒。
選擇當(dāng)年成熟保暖的霍山石斛果實，表面無病斑、蟲斑，將采收的霍山石斛果莢進行手工清理，去除果莢表面多有的枝干及枯萎的部分，并用清水反復(fù)沖洗，然后放入75%的酒精中至淹沒為止，浸泡30min，然后放在無菌的接種盤中，在無菌操作臺上晾干，備用。
步驟四：無菌播種。
在無菌操臺上，用滅菌后的移液槍從種子懸浮液中抽取1ml，放入播種培養(yǎng)基中，蓋好瓶蓋緩慢晃動，直至瓶內(nèi)的懸浮液均勻的平鋪在培養(yǎng)基表面為止，然后放入培養(yǎng)框中。
步驟五：種子萌發(fā)培養(yǎng)。
播種結(jié)束后，將放有種子的培養(yǎng)基放在光照2000lux、溫度25~29℃的條件下進行培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為2個月，即可看到綠色膨大已經(jīng)萌發(fā)的種子，種子的萌發(fā)率在95%以上，比一般的組培配方對種子的萌發(fā)率提高20%左右。
步驟六：大棚建設(shè)。
采用普通的鋼架大棚，棚高要求不低于3米，上面覆蓋塑料膜和遮陽率達到80﹪以上的遮陽網(wǎng)，用于防雨水及阻擋太陽光線。
步驟七：苗床建設(shè)。
由于是密播，苗床不需要太多，因此采用簡單的苗床即可，但必須架空45~55cm，且具有一定的承載力，利于基質(zhì)存放和底部通風(fēng)，床寬1-1.5米，長度以棚長為準，然后將海綿平鋪在制作好的苗床長，海綿的厚度為8~12厘米，利于維持苗床的濕度，海綿要經(jīng)過高錳酸鉀浸泡消毒。
步驟八：基質(zhì)制備及消毒。
將松樹皮、菜籽粕按重量比例9：1混合，發(fā)酵腐透后過3目的篩網(wǎng)，用高錳酸鉀浸泡24小時，將基質(zhì)拿出，晾干到不滴水狀態(tài)后放在制作好的海綿苗床上面，厚度不少于5cm，然后澆水，使基質(zhì)和苗床完全濕透。
步驟九：圓球莖懸浮液的制備。
在無菌室超凈工作臺面上，將無菌營養(yǎng)液倒入萌發(fā)的培養(yǎng)基瓶子中，然后將圓球莖和營養(yǎng)液一起倒出，放在消好毒的容器中備用。
步驟十：撒播。
在室外氣溫轉(zhuǎn)暖后的清明之后開始撒播，將稀釋后的霍山石斛圓球莖放入灑水壺中，搖晃均勻，灑在準備好的苗床上，注意要邊撒邊搖晃。
步驟十一：溫和光的控制。
撒播后2個月內(nèi)，棚內(nèi)溫度控制在26~30℃，以28℃最為適宜，撒播的頭一個月用遮光處理，可在苗床上面20公分處懸空加一層拉毛布起到保溫、控濕和控光的作用，用雙層遮陽網(wǎng)控制光強，出芽后逐漸加大光照，光照最高不超過20000lux。
步驟十二：水分和濕度的控制。
撒播后每兩天用噴霧器噴灑一遍營養(yǎng)液，第一使圓球莖在苗床上面有生長所需的充足營養(yǎng)和分化所需要的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，第二使苗床保持表面濕潤，防止圓球莖脫水，空氣濕度維持在80﹪左右。
步驟十三：肥料和病害的管理。
霍山石斛圓球莖播撒過后每隔一天噴灑營養(yǎng)液一次，維持霍山石斛發(fā)芽生長所必須的營養(yǎng)供給，一直到抽出葉子為止。
當(dāng)霍山石斛抽出兩片葉子后，每15天噴施一次0.5-1‰的花朵朵葉面肥，日常病害較少，按生長期每個月噴施一次750倍的甲基托布津即可。
每隔一周定期給育苗大棚進行消毒，采用煙熏劑，如保菇王。
步驟十四：移栽。
第二年的春季，將已具備完整的根、莖、葉的石斛苗拔起，按4~6株一叢，10厘米×10厘米的行列距進行移栽。
進一步的，在所述步驟一中，播種培養(yǎng)基包括以下配方：硝酸鉀500mg/l、硫酸銨250mg/l、硫酸鎂250mg/l、磷酸二氫鉀250mg/l、硝酸鈣700mg/l、碘化鉀0.83mg/l、硼酸6.2mg/l、硫酸錳22.3mg/l、硫酸鋅8.6mg/l、鉬酸鈉0.25mg/l、硫酸銅0.025mg/l、氯化鈷0.025mg/l、肌醇100mg/l、煙酸0.5mg/l、甘氨酸2mg/l、鹽酸硫胺素0.1mg/l、鹽酸吡哆醇0.5mg/l、乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/l、硫酸亞鐵27.8mg/l、2，4-二氯苯氧乙酸0.2mg/l、6-芐基嘌呤0.6mg/l、萘乙酸0.1mg/l、赤霉素0.2mg/l、蔗糖30g/l和瓊脂4g/l。
進一步的，在所述步驟二中，營養(yǎng)液包括以下配方：硝酸鉀500mg/l、硫酸銨250mg/l、硫酸鎂250mg/l、磷酸二氫鉀250mg/l、硝酸鈣700mg/l、碘化鉀0.83mg/l、硼酸6.2mg/l、硫酸錳22.3mg/l、硫酸鋅8.6mg/l、鉬酸鈉0.25mg/l、硫酸銅0.025mg/l、氯化鈷0.025mg/l、肌醇100mg/l、煙酸0.5mg/l、甘氨酸2mg/l、鹽酸硫胺素0.1mg/l、鹽酸吡哆醇0.5mg/l、乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/l、硫酸亞鐵27.8mg/l、2，4-二氯苯氧乙酸0.5mg/l、6-芐基嘌呤0.1mg/l、萘乙酸0.8mg/l和矮壯素0.8mg/l。
本發(fā)明提供的一種霍山石斛圓球莖直播實生苗的方法的優(yōu)點在于：
1、減少組培的投入，去掉了傳統(tǒng)工藝中的煉苗、馴化的過程，簡化了育苗的生產(chǎn)過程，降低了生產(chǎn)成本。
2、增加了種苗栽培的成活率，通過本方法得到的種苗移栽的成活率可達100%，減少栽培風(fēng)險。
3、育苗的門檻低，可操作性強。
本方法能夠直接將霍山石斛優(yōu)質(zhì)種子經(jīng)過無菌播種萌發(fā)形成圓球莖，通過用營養(yǎng)液對圓球莖稀釋直接播在經(jīng)處理好的苗床上，通過科學(xué)的培養(yǎng)管理，直接成苗后再進行移栽，能夠有效的降低企業(yè)成本，且種子成苗率高達80%以上，成苗后移栽的成活率達100%。
具體實施方式
為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
實施例：
所述一種霍山石斛圓球莖直播實生苗的方法，包括以下步驟：
步驟一：播種培養(yǎng)基的配置。
播種培養(yǎng)基包括以下配方：硝酸鉀500mg/l、硫酸銨250mg/l、硫酸鎂250mg/l、磷酸二氫鉀250mg/l、硝酸鈣700mg/l、碘化鉀0.83mg/l、硼酸6.2mg/l、硫酸錳22.3mg/l、硫酸鋅8.6mg/l、鉬酸鈉0.25mg/l、硫酸銅0.025mg/l、氯化鈷0.025mg/l、肌醇100mg/l、煙酸0.5mg/l、甘氨酸2mg/l、鹽酸硫胺素0.1mg/l、鹽酸吡哆醇0.5mg/l、乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/l、硫酸亞鐵27.8mg/l、2，4-二氯苯氧乙酸0.2mg/l、6-芐基嘌呤0.6mg/l、萘乙酸0.1mg/l、赤霉素0.2mg/l、蔗糖30g/l和瓊脂4g/l，將瓊脂經(jīng)高溫溶解后，將配置好的藥品逐一倒入，溫度維持在55~65℃進行分裝，再通過121℃濕熱滅菌，滅菌時長為20min。
步驟二：營養(yǎng)液的制備。
營養(yǎng)液包括以下配方：硝酸鉀500mg/l、硫酸銨250mg/l、硫酸鎂250mg/l、磷酸二氫鉀250mg/l、硝酸鈣700mg/l、碘化鉀0.83mg/l、硼酸6.2mg/l、硫酸錳22.3mg/l、硫酸鋅8.6mg/l、鉬酸鈉0.25mg/l、硫酸銅0.025mg/l、氯化鈷0.025mg/l、肌醇100mg/l、煙酸0.5mg/l、甘氨酸2mg/l、鹽酸硫胺素0.1mg/l、鹽酸吡哆醇0.5mg/l、乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/l、硫酸亞鐵27.8mg/l、2，4-二氯苯氧乙酸0.5mg/l、6-芐基嘌呤0.1mg/l、萘乙酸0.8mg/l和矮壯素0.8mg/l，直接用純化水將藥品逐一倒入，定容、滅菌冷卻后即可使用，滅菌的原因是盡量減少圓球莖直播時受到雜菌的感染；
步驟三：霍山石斛果莢的選擇和消毒。
選擇當(dāng)年成熟保暖的霍山石斛果實，表面無病斑、蟲斑，將采收的霍山石斛果莢進行手工清理，去除果莢表面多有的枝干及枯萎的部分，并用清水反復(fù)沖洗，然后放入75%的酒精中至淹沒為止，浸泡30min，然后放在無菌的接種盤中，在無菌操作臺上晾干，備用。
步驟四：無菌播種。
在無菌操臺上，用滅菌后的移液槍從種子懸浮液中抽取1ml，放入播種培養(yǎng)基中，蓋好瓶蓋緩慢晃動，直至瓶內(nèi)的懸浮液均勻的平鋪在培養(yǎng)基表面為止，然后放入培養(yǎng)框中。
步驟五：種子萌發(fā)培養(yǎng)。
播種結(jié)束后，將放有種子的培養(yǎng)基放在光照2000lux、溫度25~29℃的條件下進行培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為2個月，即可看到綠色膨大已經(jīng)萌發(fā)的種子，種子的萌發(fā)率在95%以上，比一般的組培配方對種子的萌發(fā)率提高20%左右。
步驟六：大棚建設(shè)。
采用普通的鋼架大棚，棚高要求不低于3米，上面覆蓋塑料膜和遮陽率達到80﹪以上的遮陽網(wǎng)，用于防雨水及阻擋太陽光線。
步驟七：苗床建設(shè)。
由于是密播，苗床不需要太多，因此采用簡單的苗床即可，但必須架空45~55cm，且具有一定的承載力，利于基質(zhì)存放和底部通風(fēng)，床寬1-1.5米，長度以棚長為準，然后將海綿平鋪在制作好的苗床長，海綿的厚度為8~12厘米，利于維持苗床的濕度，海綿要經(jīng)過高錳酸鉀浸泡消毒。
步驟八：基質(zhì)制備及消毒。
將松樹皮、菜籽粕按重量比例9：1混合，發(fā)酵腐透后過3目的篩網(wǎng)，用高錳酸鉀浸泡24小時，將基質(zhì)拿出，晾干到不滴水狀態(tài)后放在制作好的海綿苗床上面，厚度不少于5cm，然后澆水，使基質(zhì)和苗床完全濕透。
步驟九：圓球莖懸浮液的制備。
在無菌室超凈工作臺面上，將無菌營養(yǎng)液倒入萌發(fā)的培養(yǎng)基瓶子中，然后將圓球莖和營養(yǎng)液一起倒出，放在消好毒的容器中備用。
步驟十：撒播。
在室外氣溫轉(zhuǎn)暖后的清明之后開始撒播，將稀釋后的霍山石斛圓球莖放入灑水壺中，搖晃均勻，灑在準備好的苗床上，注意要邊撒邊搖晃。
步驟十一：溫和光的控制。
撒播后2個月內(nèi)，棚內(nèi)溫度控制在26~30℃，以28℃最為適宜，撒播的頭一個月用遮光處理，可在苗床上面20公分處懸空加一層拉毛布起到保溫、控濕和控光的作用，用雙層遮陽網(wǎng)控制光強，出芽后逐漸加大光照，光照最高不超過20000lux。
步驟十二：水分和濕度的控制。
撒播后每兩天用噴霧器噴灑一遍營養(yǎng)液，第一使圓球莖在苗床上面有生長所需的充足營養(yǎng)和分化所需要的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，第二使苗床保持表面濕潤，防止圓球莖脫水，空氣濕度維持在80﹪左右。
步驟十三：肥料和病害的管理。
霍山石斛圓球莖播撒過后每隔一天噴灑營養(yǎng)液一次，維持霍山石斛發(fā)芽生長所必須的營養(yǎng)供給，一直到抽出葉子為止。
當(dāng)霍山石斛抽出兩片葉子后，每15天噴施一次0.5-1‰的花朵朵葉面肥，日常病害較少，按生長期每個月噴施一次750倍的甲基托布津即可。
每隔一周定期給育苗大棚進行消毒，采用煙熏劑，如保菇王。
步驟十四：移栽。
第二年的春季，將已具備完整的根、莖、葉的石斛苗拔起，按4~6株一叢，10厘米×10厘米的行列距進行移栽。
本發(fā)明提供的一種霍山石斛圓球莖直播實生苗的方法的優(yōu)點在于：
1、減少組培的投入，去掉了傳統(tǒng)工藝中的煉苗、馴化的過程，簡化了育苗的生產(chǎn)過程，降低了生產(chǎn)成本。
2、增加了種苗栽培的成活率，通過本方法得到的種苗移栽的成活率可達100%，減少栽培風(fēng)險。
3、育苗的門檻低，可操作性強。
本方法能夠直接將霍山石斛優(yōu)質(zhì)種子經(jīng)過無菌播種萌發(fā)形成圓球莖，通過用營養(yǎng)液對圓球莖稀釋直接播在經(jīng)處理好的苗床上，通過科學(xué)的培養(yǎng)管理，直接成苗后再進行移栽，能夠有效的降低企業(yè)成本，且種子成苗率高達80%以上，成苗后移栽的成活率達100%。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。