本發(fā)明屬于抑藻劑及其制備方法，特別屬于高效的植物源抑藻劑及其制備方法。

背景技術(shù)：

隨著社會(huì)、經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，各種污染物的排放也日益加重，這使得水體富營(yíng)養(yǎng)化日趨嚴(yán)重，水華頻繁爆發(fā)嚴(yán)重影響了生態(tài)平衡，使我國(guó)的水質(zhì)性缺水現(xiàn)象日漸加劇。銅綠微囊藻(Microcystis aeruginosa)是形成水華的藍(lán)藻優(yōu)勢(shì)種群之一，具有極強(qiáng)的生態(tài)學(xué)競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)，至今其迅速繁殖依然是全球性的問(wèn)題，而且其產(chǎn)生的微囊藻毒素危害極大，所以探索發(fā)現(xiàn)一種高效的，經(jīng)濟(jì)的，生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)小的抑藻方法是當(dāng)前治理的突破點(diǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

所要解決的技術(shù)問(wèn)題第1個(gè)是提供抑藻率達(dá)到90％以上的高效植物源抑藻劑。

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題第2個(gè)是上述植物源抑藻劑的制備方法。

本發(fā)明解決技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)方案為：一種高效植物源抑藻劑，所述的抑藻劑為洋蔥的乳酸浸提液。

本發(fā)明的制備方法為：將新鮮洋蔥鱗莖用蒸餾水清洗干凈，剪碎后放入研缽，加入洋蔥總重量5-6倍的乳酸進(jìn)行研磨，研磨至粒度小于200目，放置于搖床，于100rpm頻率室溫振搖24-36h，過(guò)濾至可。

所述的乳酸為分析純，含量99％。

所述的藻為銅綠微囊藻。

所述的藻密度為1-9*10⁶個(gè)/毫升。

洋蔥(Allium cepa L.)在中國(guó)分布廣泛，是中國(guó)主栽蔬菜之一，可用于降低血壓、提神醒腦、緩解壓力、預(yù)防感冒，已有相關(guān)研究表明洋蔥鱗莖的水浸提液有抑藻效果，但化感物質(zhì)在水中得不到較好的釋放，故高濃度才有很好的抑藻效應(yīng)。

乳酸(2-羥基丙酸)是一些植物無(wú)氧呼吸的代謝產(chǎn)物，已有有關(guān)報(bào)道認(rèn)為乳酸是某些植物的化感物質(zhì)之一，且乳酸可作為食品添加劑、防腐劑，無(wú)異味，能與水任意互溶，可以方便地投入水中使用。乳酸也是一種安全的有機(jī)溶解劑，因此，采用食用乳酸對(duì)洋蔥浸提，不僅具有較好的生態(tài)安全性且使用方便、易于操作，更具有較高的可行性。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，所述的抑藻劑原料來(lái)自植物洋蔥以及可作為食品添加劑的乳酸，生態(tài)安全性好，不會(huì)造成二次污染，作為一種高效植物源抑藻劑，本發(fā)明的浸提液濃度在10μL/L以上，處理時(shí)間超過(guò)96小時(shí)，抑藻率達(dá)到99％。

附圖說(shuō)明

圖1為實(shí)施例1所制的洋蔥的乳酸浸提液對(duì)銅綠微囊藻密度的影響圖。

圖2為乳酸浸提液對(duì)銅綠微囊藻密度的影響圖。

圖3為為實(shí)施例4所制的洋蔥的水浸提液對(duì)銅綠微囊藻密度的影響圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)的說(shuō)明。

本發(fā)明的銅綠微囊藻(Microcystis aeruginosa)購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院武漢水生生物研究所藻種庫(kù)，采用BG-11培養(yǎng)基培養(yǎng)；

洋蔥(Allium cepa L.)，由安徽師范大學(xué)園藝系提供。

乳酸為分析純，含量99％，購(gòu)于上海國(guó)藥集團(tuán)。

實(shí)施例1：

洋蔥的乳酸浸提液的制備方法：將新鮮洋蔥鱗莖用蒸餾水清洗干凈，剪碎后放入研缽，加入洋蔥總重量5倍的乳酸進(jìn)行研磨，研磨至粒度小于200目，放置于搖床，于100rpm頻率室溫振搖24h，過(guò)濾至可。

實(shí)施例2：

洋蔥的乳酸浸提液的制備方法：將新鮮洋蔥鱗莖用蒸餾水清洗干凈，剪碎后放入研缽，加入洋蔥總重量5.5倍的乳酸進(jìn)行研磨，研磨至粒度小于200目，放置于搖床，于100rpm頻率室溫振搖30h，過(guò)濾至可。

實(shí)施例3：

洋蔥的乳酸浸提液的制備方法：將新鮮洋蔥鱗莖用蒸餾水清洗干凈，剪碎后放入研缽，加入洋蔥總重量6倍的乳酸進(jìn)行研磨，研磨至粒度小于200目，放置于搖床，于100rpm頻率室溫振搖36h，過(guò)濾至可。

實(shí)施例4：

加入的溶劑為水外，其余與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例5：

抑藻率試驗(yàn)：

對(duì)銅綠微囊藻進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，在無(wú)菌條件下取100ml藻種加入到已滅菌的錐形瓶中，每天定時(shí)在無(wú)菌操作臺(tái)中加定量培養(yǎng)基，使細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。培養(yǎng)條件為：光照強(qiáng)度4000lx，光暗比為12h：12h，溫度(25±1)℃。每天搖動(dòng)3-5次。

在已滅菌的錐形瓶(250mL)加入銅綠微囊藻液100mL，藻的初始密度為2.5×10⁶cells/mL,然后加入實(shí)施例1所制的洋蔥乳酸浸提液，浸提液設(shè)置5個(gè)濃度梯度，分別為1.25,2.5,5,10,15μL/L。同時(shí)，為了對(duì)比實(shí)驗(yàn)結(jié)果，設(shè)置相同濃度梯度的乳酸、洋蔥的水浸提液處理組(實(shí)施例4)，另外設(shè)置不作處理的空白對(duì)照組，各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組均3個(gè)平行，置于之前相同條件下培養(yǎng)。分別于加樣后24、48、72和96h取樣用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行藻細(xì)胞計(jì)數(shù)。

乳酸、洋蔥的水浸提液、洋蔥的乳酸提取液對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)的抑制率計(jì)算公式為：IR(％)＝(1-N/N0)×100

其中，IR為抑制率；N為實(shí)驗(yàn)組藻細(xì)胞數(shù)；N0為對(duì)照組藻細(xì)胞數(shù)。

如圖1、2、3所示：各實(shí)驗(yàn)組(1.25,2.5,5,10,15μL/L)的藻細(xì)胞密度在作用后的各個(gè)時(shí)間內(nèi)均小于同期對(duì)照組，且與同期對(duì)照組的差距隨著處理時(shí)間的增加而在逐漸的增大。乳酸和洋蔥的水浸提液處理組(實(shí)施例4)與對(duì)照組的差異在第72h時(shí)2.5μL/L處理組才開(kāi)始顯示出極顯著性差異。而洋蔥的乳酸浸提液(實(shí)施例1)處理組作用24h時(shí)，最大濃度組(15μ/L處理組)與對(duì)照組的差異就已經(jīng)達(dá)到了極顯著水平(P<0.01)，其它濃度組與對(duì)照組也有顯著性差異(P<0.05)，而在72h時(shí)，除最低濃度處理組之外所有的實(shí)驗(yàn)組相比于對(duì)照組均顯示極顯著性差異(P<0.01)，96h時(shí)，兩個(gè)較大濃度組(10,15μL/L)中的藻基本上都死掉了，只存在極少數(shù)目的藻細(xì)胞。由此可知：實(shí)施例1所制的洋蔥的乳酸浸提液對(duì)銅綠微囊藻的抑制效果要遠(yuǎn)好于乳酸和實(shí)施例4所制的洋蔥的水浸提液處理組。且洋蔥的乳酸浸提液實(shí)驗(yàn)組中的藻密度的大小與浸提液濃度呈負(fù)相關(guān)，即浸提液的濃度越大，對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)的影響也就越大，從而藻密度也就越低，抑藻效果越明顯。

實(shí)施例6：

抑制率：

乳酸、洋蔥的水浸提液、洋蔥的乳酸提取液對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)的抑制率計(jì)算公式為：IR(％)＝(1-N/N0)×100

其中，IR為抑制率；N為實(shí)驗(yàn)組藻細(xì)胞數(shù)；N0為對(duì)照組藻細(xì)胞數(shù)。

表1乳酸對(duì)銅綠微囊藻的抑制率(％)

Table.1 The inhibition ratio oflactic acid on Microcystis aeruginosa(％)

表2實(shí)施例4所制的洋蔥的水浸提液對(duì)銅綠微囊藻的抑制率(％)

Table.2 The inhibition ratio ofwater leaching solution of Allium cepa L.on Microcystis aeruginosa(％)

表3實(shí)施例1所制的洋蔥的乳酸浸提液對(duì)銅綠微囊藻的抑制率(％)

Table.3 The inhibition ratio oflactic acid leaching solution of Allium cepa L.on Microcystis aeruginosa(％)

從三個(gè)表可以看出，除了最低濃度組(1.25μL/L)，同期洋蔥的乳酸浸提液處理組(實(shí)施例1)要比乳酸和洋蔥的水浸提液處理組(實(shí)施例4)的抑制率要大，乳酸和洋蔥的水浸提液處理組在96h達(dá)到最大抑制率分別是71.7241％和75.1724％，而洋蔥的乳酸浸提液2.5μL/L處理組在48h時(shí)就達(dá)到了78％的抑制率?？梢钥闯?，隨著洋蔥的乳酸浸提液濃度的增加，對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)的抑制率會(huì)增大；且在同一濃度下，抑制率也隨著處理時(shí)間的加長(zhǎng)而增大。第72h后，除了最低濃度(1.25μL/L)的實(shí)驗(yàn)組外，其余濃度的實(shí)驗(yàn)組抑制率均超過(guò)了80％，并在第96h后均超過(guò)了90％。其中，最大處理濃度(15μL/L)組，在第96h的抑制率已經(jīng)達(dá)到了99.59％，幾乎接近于100％。由此可以表明，洋蔥的乳酸浸提液(實(shí)施例1)對(duì)銅綠微囊藻的抑制效果要遠(yuǎn)好于單獨(dú)乳酸以及洋蔥的水浸提液(實(shí)施例4)處理組，洋蔥的乳酸浸提液(實(shí)施例1)對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)的抑制率與浸提液濃度呈正相關(guān)性，即浸提液的濃度越大，抑制率就越大。這與浸提液對(duì)銅綠微囊藻細(xì)胞密度的影響趨勢(shì)相反，但二者表明的最終效果是一致的，即洋蔥的乳酸浸提液具有很好的抑制銅綠微囊藻生長(zhǎng)的效果。