本披露涉及通過(guò)取食來(lái)對(duì)作物植物造成損害的有害生物的防治。本披露還涉及管理有害生物對(duì)殺蟲劑的抗性的發(fā)展。特別地，本披露涉及種子共混物和部署伴隨轉(zhuǎn)基因殺有害生物作物的庇護(hù)作物的方法。

背景技術(shù)：

在2013年種植了＞7200萬(wàn)公頃的表達(dá)蘇云金芽孢桿菌(bacillusthuringiensis，bt)蛋白的轉(zhuǎn)基因玉米和棉花。一般來(lái)說(shuō)，這些bt作物對(duì)防治靶標(biāo)害蟲是非常有效的。然而，bt作物的集約利用對(duì)靶標(biāo)有害生物種群施加了高選擇壓力，增加了它們進(jìn)化為抗性害蟲的潛力。對(duì)蘇云金芽孢桿菌(bt)產(chǎn)生抗昆蟲性的威脅導(dǎo)致對(duì)這些轉(zhuǎn)基因作物進(jìn)行管理監(jiān)管，并采用高劑量/庇護(hù)策略來(lái)種植bt玉米以對(duì)抗抗性的發(fā)展。這一策略是基于這一概念，即在庇護(hù)區(qū)產(chǎn)生的bt易感害蟲將與可能出現(xiàn)于bt作物中的罕見(jiàn)抗性純合個(gè)體進(jìn)行交配，并且這種交配產(chǎn)生的后代將是雜合的，并且因此在后續(xù)暴露時(shí)應(yīng)該會(huì)被高劑量bt植物殺死。因此，田間種群的抗性等位基因頻率應(yīng)在相對(duì)更長(zhǎng)時(shí)段內(nèi)應(yīng)保持低水平。最近種植者已經(jīng)采用了綜合的庇護(hù)種子混合方式。這種類型的庇護(hù)直接將非bt隔離種子與性狀化害蟲防治產(chǎn)物在袋中混合。種植后，庇護(hù)隨機(jī)分布在整個(gè)田地，確保銷售的每一袋種子都包含所需的庇護(hù)。此外，已經(jīng)引入了表達(dá)兩種或更多種bt基因的金字塔型bt玉米雜交種，這些bt基因針對(duì)相同有害生物物種具有不同作用模式。對(duì)取食玉米穗的害蟲實(shí)施種袋庇護(hù)(refuge-in-a-bag)策略的一個(gè)擔(dān)憂是由于田地中隔離接近bt植物，可導(dǎo)致在綜合庇護(hù)田地的庇護(hù)玉米粒中存在亞致死劑量的bt蛋白，使玉米雜交種的異花授粉增加。這些異花授粉的穗可能對(duì)庇護(hù)害蟲的生存、生長(zhǎng)和發(fā)育產(chǎn)生不利影響；使部分抗性害蟲比易感害蟲更有優(yōu)勢(shì)，從而潛在地加速了害蟲對(duì)性狀化基因的抗性的發(fā)展。最近已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，將5％庇護(hù)和包含表達(dá)cry1a.105、cry2ab2和cry1f的性狀的95％bt玉米進(jìn)行混合種植不能提供針對(duì)玉米穗夜蛾，玉米穗蟲(helicoverpazea)的有效庇護(hù)(yangf等人，plosone[公共科學(xué)圖書館]9(11)；e1129622014)。yang等人提出異花授粉使大多數(shù)(＞90％)庇護(hù)粒表達(dá)至少一種bt蛋白。庇護(hù)穗中bt蛋白的污染將新生至成年的玉米穗蟲的生存降低到僅4.6％，相對(duì)于在純非bt玉米種植的穗上取食的幼蟲而言，降低了88.1％。庇護(hù)穗中有限的幸存者具有較低的蛹質(zhì)量并且要花費(fèi)更長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)發(fā)育至成年，潛在的導(dǎo)致其發(fā)育為部分抗性害蟲。因此，需要新的抗昆蟲性策略來(lái)對(duì)抗抗昆蟲性并提供法規(guī)遵從性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本披露涉及被設(shè)計(jì)成用于消除或大大減少異花授粉的新型種子共混物，并涉及用于部署庇護(hù)作物的方法。相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)的庇護(hù)實(shí)踐，本披露提供了一種庇護(hù)，該庇護(hù)導(dǎo)致易感有害生物的生存增加，從而：(i)延遲抗性有害生物后代的進(jìn)化，(ii)減少在共混庇護(hù)中部分抗性害蟲的優(yōu)勢(shì)，和(iii)改進(jìn)轉(zhuǎn)基因殺有害生物作物的持久性。

在一個(gè)方面，本披露提供了一種新穎的玉米種子共混物，該玉米種子共混物包含(a)第一玉米種子類型，其包含一個(gè)或多個(gè)抗昆蟲轉(zhuǎn)基因，并且不含將賦予偏向受精的任何配子體因子等位基因；和(b)第二玉米種子類型，其包含至少一個(gè)顯性配子體因子等位基因(gax)或轉(zhuǎn)基因，其中所述顯性等位基因或轉(zhuǎn)基因減少了不攜帶對(duì)于給定配子體因子系列而言適當(dāng)?shù)牡任换虻娜魏位ǚ圻M(jìn)行的授粉。因此，在一個(gè)實(shí)施例中，生長(zhǎng)自第二玉米種子類型的植物基本上沒(méi)有至完全沒(méi)有被生長(zhǎng)自第一玉米種子類型的植物授粉。

在另一個(gè)方面，由于長(zhǎng)須或中間長(zhǎng)須(mid-silk)的時(shí)間差異，生長(zhǎng)自第二種子類型的植物的性成熟時(shí)間可能與生長(zhǎng)自第一種子類型的植物不同。

在另外的方面，第一玉米種子類型可以進(jìn)一步包含其他轉(zhuǎn)基因，例如編碼毒素的一種或多種轉(zhuǎn)基因(該毒素可有效防治能被第一玉米種子類型的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物有效防治的相同或不同有害生物)，和/或一種或多種除草劑抗性基因，和/或一種或多種殺真菌劑耐受性基因。

在另一方面，當(dāng)與包含異花授粉相容的種子類型的對(duì)照玉米種子共混物相比時(shí)，生長(zhǎng)自第二玉米種子類型的植物所生產(chǎn)的玉米穗表現(xiàn)出包含第一玉米種子轉(zhuǎn)基因的種子數(shù)目的減少。

在另一方面，第一玉米種子類型與第二玉米種子類型的比率為約70∶30至約99∶1、從約80∶20至約97∶3、或從約90∶10至約95∶5。例如，該比率可以是約70∶30、71∶29、72∶28、73∶27、74∶26、75∶25、76∶24、77∶23、78∶22、79∶21、80∶20、81∶19、82∶18、83∶17、84∶16、85∶15、86∶14、87∶13、88∶12、89∶11、90∶10、91∶9、92∶8、93∶7、94∶6、95∶5、96∶4、97∶3、98∶2或99∶1。在共混庇護(hù)中種子類型的比率的背景下，本文使用的“約”是指±0.5％

在另外的方面，生長(zhǎng)自第二玉米種子類型的種子的植物的相對(duì)成熟等級(jí)(relativematurityrating)可以比生長(zhǎng)自第一玉米種子類型的種子的植物的相對(duì)成熟等級(jí)早或晚至少3、4、5、6、7、8、9、10或11天。

在某些方面，第一玉米種子類型包含編碼蘇云金芽孢桿菌內(nèi)毒素(bt毒素或bt)的一種或多種轉(zhuǎn)基因，這些蘇云金芽孢桿菌內(nèi)毒素包括但不限于cryl、cry2、cry3、cry4、cry5、cry6、cry7、cry8、cry9、cry10、cryl1、cryl2、cry13、cry14、cry15、cry16、cryl7、cry18、cry19、cry20、cry21、cry22、cry23、cry24、cry25、cry26、cry27、cry28、cry29、cry30、cry31、cry32、cry33、cry34、cry35、cry36、cry37、cry38、cry39、cry40、cry41、cry42、cry43、cry44、cry45、cry46、cry47、cry49、cry50、cry51、cry52、cry53、cry54、cry55、cry56、cry57、cry58、cry59、cry60、cry61、cry62、cry63、cry64、cry65、cry66、cry67、cry68、cry69、cry70、cry71、cry72、cry73和cry74類的δ-內(nèi)毒素基因和蘇云金芽孢桿菌細(xì)胞溶解性cyt1和cyt2基因。這些類別的蘇云金芽孢桿菌殺蟲蛋白的成員是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的(參見(jiàn)，crickmore等人，“bacillusthuringiensistoxinnomenclature[蘇云金芽孢桿菌毒素命名法]”(2011)，在lifesci.sussex.ac.uk/home/neil_crickmore/bt/，可以使用“www”前綴在萬(wàn)維網(wǎng)上訪問(wèn)該網(wǎng)址。

在一些方面，第一玉米種子類型包含編碼選自以下的殺蟲產(chǎn)物的一種或多種轉(zhuǎn)基因：vip3a、vip3aa、cry1a.105、cry2ab、cry1f、cry1a、cry1ab、cry1ac、cry34/35、cry34/35ab1、cry34ab1、cry35ab1、cry3a、mcry3a、ecry3.1ab、cry3bb、dv49dsrna和dv_snf7o。

在又另外的方面，第一玉米種子類型包含選自以下的轉(zhuǎn)殖項(xiàng)：dp-186165-2、dp-186169-6、dp-187156-3、dp4114、mir162、mir604、bt176、tc1507、das-06275-8、das-59122-7、bt11、5307、mon810、mon89034、mon88017、zm_s295399、mon87411、mon853和mon863。

在一些方面，第一玉米種子類型包含一種或多種轉(zhuǎn)基因，這些轉(zhuǎn)基因編碼一種或多種殺蟲蛋白。除了蘇云金芽孢桿菌之外，已經(jīng)從例如包括其他芽孢桿菌屬物種(bacillussp.)、假單胞菌屬物種(pseudomonassp.)、光桿菌屬物種(photorhabdussp.)、致病桿菌屬物種(xenorhabdussp.)、雙酶梭菌(clostridiumbifermentans)和鮑比氏類芽孢桿菌(paenibacilluspopilliae)的生物體中分離出殺蟲蛋白。殺蟲蛋白包括但不限于：來(lái)自假單胞菌屬物種(pseudomonassp.)，如pseen3174(monalysin；(2011)plospathogens[公共科學(xué)圖書館]7：1-13)的殺蟲蛋白；來(lái)自假單胞菌(pseudomonasprotegens)菌株cha0和pf-5(以前稱為熒光菌(fluorescens))(pechy-tarr，(2008)environmentalmicrobiology[環(huán)境微生物學(xué)]10：2368-2386；genbank登錄號(hào)eu400157)的殺蟲蛋白；來(lái)自臺(tái)灣假單胞菌(pseudomonastaiwanensis)(liu等人，(2010)j.agric.foodchem.[農(nóng)業(yè)與食品化學(xué)雜志]，58：12343-12349)和來(lái)自假產(chǎn)堿假單胞菌(pseudomonaspseudoalcligenes)(zhang等人，(2009)annalsofmicrobiology[微生物學(xué)雜志]59：45-50和li等人，(2007)plantcelltiss.organcult.[植物細(xì)胞，組織和器官培養(yǎng)雜志]98：159-168)的殺蟲蛋白；來(lái)自發(fā)光桿菌屬物種和致病桿菌屬物種(hinchliffe等人，(2010)theopentoxicologyjournal[開放毒理學(xué)雜志]，3：101-118和morgan等人，(2001)appliedandenvir.micro.[應(yīng)用與環(huán)境微生物學(xué)]67：2062-2069)的殺蟲蛋白；來(lái)自美國(guó)專利號(hào)6,048,838和美國(guó)專利號(hào)6,379,946的殺蟲蛋白；美國(guó)專利公開號(hào)us20140007292的pip-1多肽；美國(guó)專利公開號(hào)us20140033361的afip-1a和/或afip-1b多肽；美國(guó)專利公開號(hào)us20140274885或pct專利公開號(hào)wo2014/150914的phi-4多肽；pct序列號(hào)pct/us14/51063的pip-47多肽，pct序列號(hào)pct/us14/55128的pip-72多肽。

在另一方面，本披露提供了自本披露的玉米種子共混物生長(zhǎng)的植物的田地。

在又另一方面，本披露提供了一種減少生長(zhǎng)自玉米種子共混物中不同種子類型的植物之間的授粉發(fā)生率的方法，該方法包括提供玉米種子共混物，該玉米種子共混物包含(i)包含至少一種抗昆蟲轉(zhuǎn)基因的第一玉米種子類型，和(ii)包含至少一種顯性配子體因子等位基因并且缺少抗昆蟲轉(zhuǎn)基因的第二玉米種子類型，其中該顯性配子體因子等位基因減少了包含抗昆蟲轉(zhuǎn)基因的玉米種子的隱性配子體因子花粉特征的授粉。

在一些方面，生長(zhǎng)自第二玉米種子類型的植物基本上不被生長(zhǎng)自第一玉米種子類型的植物授粉。

在另一方面，當(dāng)與包含異花授粉相容的種子類型的對(duì)照玉米種子共混物相比時(shí)，生長(zhǎng)自第二玉米種子類型的植物所生產(chǎn)的玉米穗表現(xiàn)出包含該抗昆蟲轉(zhuǎn)基因的種子數(shù)目的減少。在又另一個(gè)實(shí)施例中，種子共混物中的第一玉米種子類型的種子與第二玉米種子類型的種子的比率選自：約70∶30至約99∶1、從約80∶20至約97∶3、和從約90∶10至約95∶5。

在又另一方面，生長(zhǎng)自第一玉米種子類型的種子的植物的花粉脫落時(shí)期基本上不與生長(zhǎng)自第二玉米種子類型的種子的植物的中間長(zhǎng)須(mid-silk)時(shí)間重疊。

在某些方面，害蟲是鱗翅目物種。在一些實(shí)施例中，害蟲是取食玉米穗的害蟲。在一些實(shí)施例中，害蟲屬于夜蛾科(noctuidae)或草螟科(crambidae)。在一些實(shí)施例中，害蟲屬于夜蛾科。在一些實(shí)施例中，害蟲屬于草螟科。在一些實(shí)施例中，害蟲是玉米穗夜蛾(cew；夜蛾科：玉米穗蟲)、西部豆夜蛾(wbc；夜蛾科：striacostaalbicosta)、秋夜蛾(fallarmyworm，faw)；夜蛾科：草地貪夜蛾(spodopterafrugiperda(smith)))、歐洲玉米螟(ecb；草螟科：玉米鉆心蟲(ostrinianubilalis))、豆雜色夜蛾(vc；夜蛾科：疆夜蛾(peridromasaucia)(hübner))。

在一個(gè)另外的方面，殺蟲劑針對(duì)玉米穗蟲具有活性，并且減少發(fā)生在玉米穗的尖端部分。

在其他方面，殺蟲劑針對(duì)玉米穗蟲具有活性并且減少了害蟲的取食。

在另一方面，本披露提供了一種減少生長(zhǎng)自玉米種子共混物中不同種子類型的植物之間的授粉發(fā)生率的方法，該方法包括對(duì)生長(zhǎng)自玉米種子共混物的植物施用處理，其中(a)生長(zhǎng)自第一玉米種子類型的植物包含與處理相互作用的基因或基因產(chǎn)物，并且生長(zhǎng)自第二玉米種子類型的植物缺少基因或基因產(chǎn)物，并且其中相互作用延遲或加快植物的生殖成熟時(shí)間；或(b)生長(zhǎng)自第二玉米種子類型的植物包含與處理相互作用的基因或基因產(chǎn)物，并且生長(zhǎng)自第一玉米種子類型的植物缺少基因或基因產(chǎn)物，并且其中相互作用延遲或加快植物的生殖成熟時(shí)間。

在另外的方面，本披露提供了一種使能夠在遵守政府法規(guī)下與殺蟲轉(zhuǎn)基因作物一起種植庇護(hù)作物或在殺蟲轉(zhuǎn)基因作物旁種植庇護(hù)作物的方法，其中該庇護(hù)作物包含至少一個(gè)顯性配子體因子等位基因并且缺少抗昆蟲轉(zhuǎn)基因，其中該顯性配子體因子等位基因通過(guò)含隱性配子體因子的花粉來(lái)減少授粉。

在又另外的方面，本披露提供了一種使能夠在遵守政府法規(guī)下與殺蟲轉(zhuǎn)基因作物一起種植庇護(hù)作物或在殺蟲轉(zhuǎn)基因作物旁種植庇護(hù)作物的方法，其中該庇護(hù)作物進(jìn)一步包含與抗昆蟲轉(zhuǎn)基因作物的生殖成熟等級(jí)不同的生殖成熟等級(jí)，其中該庇護(hù)生殖成熟等級(jí)與殺蟲轉(zhuǎn)基因作物的性成熟等級(jí)至少相差3天。

附圖說(shuō)明

圖1示出了包含gax須(對(duì)照)和來(lái)自2個(gè)gax系w22ga1-s和w22ga2-s-墨西哥(w22ga2-s-mexicana)的gax須的植物的粒/穗的平均數(shù)目。

圖2示出了來(lái)自gax植物(對(duì)照)和2個(gè)gax突變系w22ga1-s和w22ga2-s-墨西哥的gax植物的粒/穗的平均發(fā)芽率。

圖3示出了植物的百分比，這些植物是如tc1507轉(zhuǎn)殖項(xiàng)的存在所指示的異花授粉的產(chǎn)物。

詳細(xì)描述

本披露提供了用于降低栽培的殺蟲作物中抗昆蟲性發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)的組合物和方法。特別地，本披露涉及改進(jìn)的抗昆蟲管理實(shí)踐，例如種子共混物，并涉及用于部署作物庇護(hù)的改進(jìn)方法。例如，可以通過(guò)在庇護(hù)綜合田地減少轉(zhuǎn)基因殺有害生物作物植物對(duì)庇護(hù)作物植物的異花授粉來(lái)提供這種改進(jìn)。

抗昆蟲管理(insectresistancemanagement，irm)降低了針對(duì)重組植物內(nèi)存在的一種或多種重組殺蟲性狀而發(fā)展抗性的可能性。實(shí)現(xiàn)抗性管理的一種方式是通過(guò)種子混合或種子共混庇護(hù)組合物，例如種袋庇護(hù)(rib)。然而，來(lái)自轉(zhuǎn)基因殺蟲作物植物的含轉(zhuǎn)基因花粉的庇護(hù)作物植物的異花授粉可以導(dǎo)致庇護(hù)作物植物上產(chǎn)生的后代種子表達(dá)一種或多種抗昆蟲轉(zhuǎn)基因。在庇護(hù)植物上產(chǎn)生的合并了這種殺蟲性狀的后代種子可能會(huì)影響取食該種子的易感有害生物的存活，從而降低了這種管理方法的效率，進(jìn)而延遲了殺蟲抗性有害生物的進(jìn)化。

因此，減少轉(zhuǎn)基因殺蟲作物對(duì)庇護(hù)作物植物的異花授粉可能會(huì)增加田地庇護(hù)植物群體中易感害蟲的產(chǎn)生。因此，在一個(gè)實(shí)施例中，本披露提供了減少轉(zhuǎn)基因殺蟲作物植物對(duì)庇護(hù)作物植物的異花授粉的方法。例如，這種異種授粉的減少可以是當(dāng)兩種植物生長(zhǎng)自同一種子共混物時(shí)，個(gè)體轉(zhuǎn)基因殺蟲植物對(duì)個(gè)體庇護(hù)植物的異花授粉的減少。這種授粉的減少也可以是轉(zhuǎn)基因殺蟲植物的群體對(duì)庇護(hù)植物的群體的異花授粉的減少。

本披露提供了一種用于部署庇護(hù)作物的方法，該方法包括在田地種植種子共混物，該共混物包含轉(zhuǎn)基因殺蟲作物群體的種子和庇護(hù)作物群體的種子，該庇護(hù)作物群體的種子與該轉(zhuǎn)基因殺蟲作物群體是異花授粉不親和的。

花粉和柱頭之間的相互作用引導(dǎo)開花植物中的生殖親和性。當(dāng)被馬齒種玉米或硬質(zhì)種玉米品種授粉時(shí)，一些品種的爆裂玉米將不會(huì)結(jié)籽，但進(jìn)行正反交沒(méi)有任何困難。當(dāng)存在于須中時(shí)稱為配子體因子的雜交不親和性因子基因排斥缺少親和等位基因的花粉。這種非互惠雜交不親和性的遺傳基礎(chǔ)的一個(gè)實(shí)例是在玉米的4號(hào)染色體上的ga1基因座處的多重等位基因系列，使得ga1/ga1植物在被ga1(典型的飼料玉米)授粉時(shí)不會(huì)結(jié)籽。中國(guó)爆裂玉米品種sdga25是攜帶ga1(ga1-s)的最強(qiáng)等位基因的品系的一個(gè)實(shí)例(zhang等人，theoappliedgenet[理論與應(yīng)用遺傳學(xué)]124：459-465，2012)。另外的配子體因子tcbl從大芻草(teosinte)在4號(hào)染色體上識(shí)別并被命名為“大芻草雜交障礙-1(teosintecrossingbarrier-1，tcbl)”。tcbl的最強(qiáng)等位基因tsbl-s阻止大芻草(tcbl-stcbl-s)被玉米(zeamays)(tcbltcbl)受精，同時(shí)促進(jìn)其自身繁殖(evansms等，theoappliedgenet[理論與應(yīng)用遺傳學(xué)]103：259-265，2001)。最近，在5號(hào)染色體上識(shí)別了性別不親和基因ga2，它與以前描述的那些不同(kermiclejl，j.ofheredity[遺傳性雜志]101：737-749，2010)。雜交不親和因子基因已被用于玉米育種，以開發(fā)不接受來(lái)自基因修飾玉米品種的花粉的非基因修飾玉米品種，從而防止轉(zhuǎn)基因意外引入非基因修飾玉米品種(us6,875,905；us7,074,984)。

在一個(gè)實(shí)施例中，本披露提供了一種用于部署庇護(hù)作物的方法，該方法包括在田地種植種子共混物，該共混物包含轉(zhuǎn)基因殺蟲作物群體的種子和庇護(hù)作物群體的種子，該庇護(hù)作物群體包含顯性配子體因子等位基因并且缺少抗昆蟲轉(zhuǎn)基因，其中該顯性配子體因子等位基因通過(guò)含隱性配子體因子的花粉來(lái)減少授粉。在一些實(shí)施例中，顯性配子體因子等位基因是ga1-s、ga2-s和/或tcbl-s或功能等效的轉(zhuǎn)基因。

在一些實(shí)施例中，提供的用于部署庇護(hù)作物的方法包括在田地種植種子共混物，該共混物包含轉(zhuǎn)基因殺蟲作物群體的種子和庇護(hù)作物群體的種子，該庇護(hù)作物群體包含顯性配子體因子等位基因并且缺少抗昆蟲轉(zhuǎn)基因，并且進(jìn)一步，在田地中的轉(zhuǎn)基因殺蟲作物群體和庇護(hù)作物群體在不同的時(shí)間達(dá)到生殖成熟。例如，轉(zhuǎn)基因殺蟲作物群體的植物可以比庇護(hù)作物群體的植物相對(duì)更早、相對(duì)更晚、或相對(duì)更早和更晚地達(dá)到生殖成熟。這樣一種種子共混物可以被描述為在兩個(gè)種子類型之間具有“差別的性成熟等級(jí)”。在一個(gè)實(shí)施例中，在不同時(shí)間達(dá)到生殖成熟的轉(zhuǎn)基因殺蟲作物群體和庇護(hù)群體中的植物可以在相同時(shí)間達(dá)到生理成熟或可以在相對(duì)不同的時(shí)間(例如相對(duì)更早、相對(duì)更晚、或相對(duì)更早和更晚的時(shí)間)達(dá)到生理成熟。

根據(jù)植物物種和親本成熟率的知識(shí)可以預(yù)測(cè)相對(duì)成熟等級(jí)(例如植物物種的生殖成熟時(shí)間或生理成熟時(shí)間)的準(zhǔn)確改變。也可以精確地預(yù)測(cè)相對(duì)于植物物種的雌性和雄性部分的成熟等級(jí)，尤其是用精心栽培的作物物種(如飼料玉米)來(lái)預(yù)測(cè)。

在某些實(shí)施例中，提供了作為種子混合物或種子共混物的轉(zhuǎn)基因殺蟲種子和庇護(hù)種子。因此，本披露提供種子混合物、種子共混物或種袋庇護(hù)?？梢苑N植在這樣一種混合物中的種子，以生產(chǎn)一個(gè)綜合庇護(hù)田地。因此，本披露進(jìn)一步提供了根據(jù)本披露來(lái)部署種子混合物或種子共混物所產(chǎn)生的庇護(hù)綜合田地。

根據(jù)本披露種植的綜合庇護(hù)田地可能造成庇護(hù)作物植物的群體，其與在其中部署的轉(zhuǎn)基因殺蟲作物的群體異花授粉不親和。因此，庇護(hù)作物生產(chǎn)的發(fā)育中的后代種子可能被庇護(hù)作物大量授粉(自花傳粉和/或異花授粉)，并且基本上不被轉(zhuǎn)基因殺蟲作物授粉。因此，相比于根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)庇護(hù)種子共混物來(lái)部署的庇護(hù)綜合田地(其中庇護(hù)作物和轉(zhuǎn)基因殺蟲作物可以異花授粉)，根據(jù)本披露的庇護(hù)綜合田地可能顯示轉(zhuǎn)基因殺蟲植物對(duì)庇護(hù)植物的異花授粉減少，從而增加了進(jìn)食庇護(hù)植物后代種子的易感害蟲的存活種群。

在另一個(gè)實(shí)施例中，本披露提供的異花授粉的減少可以導(dǎo)致在粒集合(如玉米穗)中轉(zhuǎn)基因轉(zhuǎn)移的空間相關(guān)的降低。例如，共混物中種子的異花授粉不親和性可以提供：如果由于異花授粉產(chǎn)生的轉(zhuǎn)基因轉(zhuǎn)移發(fā)生，則該轉(zhuǎn)移在所得的粒集合上限于具體空間方向，例如在遠(yuǎn)離害蟲幼蟲取食位點(diǎn)的集合上的位置。例如，在玉米田地，玉米穗蟲(玉米穗夜蛾，cew)通常在玉米穗的尖端或莖遠(yuǎn)端部分開始進(jìn)食。因此，減少異花授粉可能導(dǎo)致庇護(hù)植物上的玉米穗不包含在遠(yuǎn)端部分或穗尖處包含轉(zhuǎn)基因的玉米粒，從而導(dǎo)致易感cew的存活率增加。類似地，庇護(hù)植物(具有玉米粒)上的玉米穗(在穗底部或靠近莖的部分不含轉(zhuǎn)基因)導(dǎo)致的異花授粉減少會(huì)導(dǎo)致易感玉米螟(ostrinianubilalis)或秋夜蛾(spodopterafrugiperda)存活。

根據(jù)本披露的種子共混物包含至少一種第一種子(其包含至少一種抗昆蟲轉(zhuǎn)基因)，和至少一類異花授粉不親和的庇護(hù)植物種子。庇護(hù)植物種子本質(zhì)上可以是統(tǒng)一的，因?yàn)樗蓙?lái)自植物的單一品種的單一類型的種子組成，或者本質(zhì)上可以是不統(tǒng)一的并且由兩個(gè)或更多個(gè)植物品種組成。在一個(gè)實(shí)施例中，庇護(hù)種子與第一轉(zhuǎn)基因作物種子的品種(或農(nóng)學(xué)特征)類似。在另一個(gè)實(shí)施例中，庇護(hù)種子是以下品種：該品種被評(píng)估為在田地與轉(zhuǎn)基因殺蟲作物種子在不同的相應(yīng)時(shí)間達(dá)到生殖成熟。

庇護(hù)種子可以是非轉(zhuǎn)基因的或可以是轉(zhuǎn)基因的。庇護(hù)種子可以是包含任何轉(zhuǎn)基因(只要不是存在于第一轉(zhuǎn)基因作物種子中的抗昆蟲轉(zhuǎn)基因即可)的轉(zhuǎn)基因種子。在某些實(shí)施例中，針對(duì)不同有害生物或針對(duì)相同有害生物(但是通過(guò)不同的作用方式)，轉(zhuǎn)基因庇護(hù)種子中的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物比抗昆蟲轉(zhuǎn)基因作物種子中的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物更具有殺昆蟲活性。在其他實(shí)施例中，轉(zhuǎn)基因庇護(hù)種子中的轉(zhuǎn)基因是一種或多種殺蟲基因、一種或多種除草劑耐受性基因、以及一種或多種殺真菌劑耐受性基因、害蟲基因的片段等或其組合。庇護(hù)種子可以成長(zhǎng)為植物，這些植物可以作為針對(duì)直接在具體作物物種上取食的有害生物的庇護(hù)或作為針對(duì)其他有害生物的庇護(hù)，這些有害生物存在于具體作物物種的局部附近，導(dǎo)致這種作物物種產(chǎn)生的作物出現(xiàn)損害、生存能力下降、不育或產(chǎn)量下降。

在不同實(shí)施例中，庇護(hù)作物種子對(duì)種子混合物或種子共混物的貢獻(xiàn)可以通過(guò)庇護(hù)種子占種子混合物的總重量或總計(jì)數(shù)的的百分比重量或計(jì)數(shù)來(lái)測(cè)量。根據(jù)本披露的用于部署在田地中的種子混合物可以包含從約1％至約50％的庇護(hù)作物種子、從約1％至約10％的庇護(hù)作物種子、或從約5％至約10％的庇護(hù)作物種子。因此，庇護(hù)種子可以占種子混合物的總重量或總計(jì)數(shù)的約50％、45％、40％、35％、31％、30％、29％、28％、27％、26％、25％、24％、23％、22％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14.5％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％。也就是說(shuō)，抗昆蟲轉(zhuǎn)基因作物種子可以占該種子混合物的約50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、85.5％、90％、95％或高達(dá)約99％。在本披露的種子混合物中，各自的抗昆蟲轉(zhuǎn)基因作物與庇護(hù)的比率(抗昆蟲轉(zhuǎn)基因種子與庇護(hù)種子的比率)可以是約50∶50至約99∶1、約70∶30至約99∶1、約80∶20至約97∶3、或約90∶10至約95∶5，以及在例如約50∶50、55∶45、60∶40、65∶34、70∶30、75∶25、80∶20、85∶15、85.5∶14.5、90∶10、95∶5、97∶3或99∶1之間的任何整數(shù)或分?jǐn)?shù)比率。在共混庇護(hù)中種子類型的比率的背景下使用時(shí)，“約”是指±0.5％

在一個(gè)實(shí)施例中，抗昆蟲轉(zhuǎn)基因作物和庇護(hù)作物的植物物種可以是結(jié)實(shí)類型。在其他實(shí)施例中，這些植物能夠攜帶抗昆蟲轉(zhuǎn)基因。例如，植物可以選自：玉蜀黍(maize)、玉米(corn)、飼料玉米、甜玉米、棉花、油菜、小麥、水稻、苜蓿、煙草、向日葵、咖啡物種、茶物種、葡萄、李子、木瓜、南瓜、亞麻、或樹物種(白楊、山楊、楓香、桉樹或云杉)。在又另一個(gè)實(shí)施例中，植物能夠經(jīng)受有害生物的侵?jǐn)_和損害，針對(duì)該有害生物，該抗昆蟲轉(zhuǎn)基因具有殺蟲性。在某些實(shí)施例中，本披露的植物被保護(hù)以免受有害生物的損害，在這些有害生物的采食部位包含此類植物(例如植物的發(fā)育中的胚胎，例如玉米須、玉米穗、玉米粒、大豆、棉花種子或任何作為雜交種生長(zhǎng)的作物植物)。

如本文中所使用，“基本上不被授粉”可以指由庇護(hù)作物產(chǎn)生的種子集合，其表現(xiàn)出少于50％、49％、48％、47％、46％、45％、44％、43％、42％、41％、40％、39％、38％、37％、36％、35％、34％、33％、32％、31％、30％、29％、28％、27％、26％、25％、24％、23％、22％、21％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％或更少的具有負(fù)責(zé)殺昆蟲活性的轉(zhuǎn)基因的粒或種子。

相比于其中抗昆蟲轉(zhuǎn)基因作物和庇護(hù)作物植物之間異花授粉相容的種子共混物，生長(zhǎng)自本披露的種子共混物的抗昆蟲轉(zhuǎn)基因作物和庇護(hù)作物之間的異花授粉的顯著降低將會(huì)進(jìn)一步延遲抗昆蟲性發(fā)展。相比于生長(zhǎng)自標(biāo)準(zhǔn)種子共混物(包含抗昆蟲轉(zhuǎn)基因作物和異花授粉相容的庇護(hù)作物種子)的庇護(hù)植物，本披露的庇護(hù)植物的粒集合中的抗昆蟲轉(zhuǎn)基因粒的數(shù)量的減少可以按照倍數(shù)減少來(lái)進(jìn)行描述。例如，該減少可以是1.05倍、或1.10倍或1.18倍、或1.25倍、或1.30倍、1.40倍、或1.50倍、或1.70倍或1.80倍、或2.0倍、或大于一(1)的任何倍數(shù)。

例如，生長(zhǎng)自標(biāo)準(zhǔn)種子共混物(包含抗昆蟲轉(zhuǎn)基因作物和異花授粉相容的庇護(hù)作物種子)的植物可以在庇護(hù)粒集合上顯示出平均75％的轉(zhuǎn)基因殺蟲粒，而生長(zhǎng)自根據(jù)本披露的種子共混物的植物可以在庇護(hù)粒集合上顯示出平均50％的轉(zhuǎn)基因殺蟲粒；這相當(dāng)于轉(zhuǎn)基因殺蟲植物對(duì)庇護(hù)植物授粉呈1.5倍減少。

在另一個(gè)實(shí)施例中，產(chǎn)生自標(biāo)準(zhǔn)種子共混物(包含轉(zhuǎn)基因殺蟲作物和異花授粉相容的庇護(hù)作物)的庇護(hù)粒集合可以在該庇護(hù)粒集合上顯示出25％的轉(zhuǎn)基因殺蟲粒，而產(chǎn)生自根據(jù)本披露的種子共混物的庇護(hù)粒集合可以在該庇護(hù)粒集合上顯示出5％的轉(zhuǎn)基因殺蟲粒；這相當(dāng)于轉(zhuǎn)基因殺蟲植物對(duì)庇護(hù)植物授粉呈5倍減少。

在另一個(gè)實(shí)施例中，本披露的轉(zhuǎn)基因殺蟲作物可以進(jìn)一步攜帶與處理發(fā)生相互作用的基因或基因產(chǎn)物，該處理導(dǎo)致生殖成熟時(shí)間延遲或加快，而庇護(hù)作物缺少該基因或基因產(chǎn)物。可替代的，庇護(hù)作物可以包含該基因或基因產(chǎn)物，而轉(zhuǎn)基因殺蟲作物缺少該基因或基因產(chǎn)物。在不同實(shí)施例中，該基因或基因產(chǎn)物可以是編碼除草劑耐受性蛋白產(chǎn)物的轉(zhuǎn)基因，其保護(hù)作物免受由于除草劑處理而引起的生殖延遲?？商娲模摶蚧蚧虍a(chǎn)物可以是對(duì)rna處理敏感的內(nèi)源性植物生殖途徑基因(例如，下調(diào)玉米的開花時(shí)間基因，例如但不限于“延遲開花1(delayedflowering1，dlf1)”或及時(shí)促進(jìn)開花轉(zhuǎn)型所必需的“在分生組織上的開花轉(zhuǎn)型1(floraltransitionatthemeristem1，ftml)”)。

在另一個(gè)實(shí)施例中，轉(zhuǎn)基因殺蟲作物種子和庇護(hù)作物種子之間的生殖成熟的相對(duì)差異可能是用制劑對(duì)轉(zhuǎn)基因殺蟲作物種子或庇護(hù)作物種子進(jìn)行處理以延遲或加快植物生長(zhǎng)至生殖成熟的速率的結(jié)果。在一個(gè)實(shí)施例中，可以在種植之前用制劑進(jìn)行處理，例如種子處理，或者可以在種植種子之后用制劑進(jìn)行處理，例如土壤澆灌或葉噴。在某些實(shí)施例中，延遲發(fā)育時(shí)間的這種處理制劑可包括植物激素生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，例如脫落酸(aba)和bionik(25％s-脫落酸(s-aba)的制劑)。

定義

除非另有定義，否則本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)都具有本披露所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的含義。諸位發(fā)明人不意在受限于實(shí)例或限于實(shí)踐的變化。

術(shù)語(yǔ)“田地”是指農(nóng)民用來(lái)種植作物物種的寬闊耕地。田地范圍的大小取決于作物物種和目的。在一個(gè)實(shí)施例中，玉米田地可以包括多行。玉米田地中的行間距可以變化，例如可以從15英寸到22英寸變?yōu)榧s30英寸?？梢园床煌谋嚷?，例如約12,000、18,000、24,000、30,000、34,000、3,6000到50,000粒種子/英畝來(lái)種植玉米田地的行；并且可以按不同長(zhǎng)度來(lái)種植玉米田地的行。

如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)“抗昆蟲轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物”可以指“殺有害生物劑”、“bt”或“bt多肽”(其中植物保護(hù)劑是衍生自蘇云金芽孢桿菌的蛋白或其變體)，“非bt”或“非bt多肽”(其中植物保護(hù)劑是衍生自除蘇云金芽孢桿菌以外的細(xì)菌或植物(特別是衍生自蕨類植物或原始植物)的蛋白或其變體)，或“rna”(其中植物保護(hù)劑是rna分子，特別是rnai或dsrna)。轉(zhuǎn)基因殺蟲產(chǎn)物可以由包含轉(zhuǎn)基因(該轉(zhuǎn)基因編碼轉(zhuǎn)基因抗昆蟲性性狀)的轉(zhuǎn)基因轉(zhuǎn)殖項(xiàng)表達(dá)。

如本文所使用的，“綜合庇護(hù)”田地是指包含轉(zhuǎn)基因殺蟲植物的群體和庇護(hù)植物的群體的田地。可以從種子共混物(例如“種袋庇護(hù)”種子共混物)來(lái)種植轉(zhuǎn)基因殺蟲群體和庇護(hù)群體。這樣的一種田地可以包括攜帶一種或多種轉(zhuǎn)基因抗昆蟲性性狀的第一群體作物(其針對(duì)作物物種的一種或多種有害生物具有殺昆蟲活性)，和第二群體庇護(hù)作物(其針對(duì)該作物物種的一種或多種有害生物不具有殺昆蟲活性或針對(duì)同樣一種或多種有害生物，但是通過(guò)不同的作用方式而具有殺昆蟲活性)。如本文中所使用，第一群體轉(zhuǎn)基因殺蟲作物生長(zhǎng)自“第一種子類型”、“殺蟲種子”或“轉(zhuǎn)基因抗昆蟲性種子”，并且第二群體庇護(hù)作物生長(zhǎng)自“第二種子類型”或“庇護(hù)種子”。

如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)“庇護(hù)”包括分離的植物或植物群體；包括分離的庇護(hù)植物或庇護(hù)植物群體的植物部分，如種子、發(fā)育中的種子或種子集合。庇護(hù)作物(植物群體、分離的植物、或植物部分)用作一種或多種有害生物的取食庇護(hù)，該一種或多種有害生物在包含轉(zhuǎn)基因殺蟲性狀的附近的植物或植物部分的轉(zhuǎn)基因殺蟲控制下。

如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)“相對(duì)成熟等級(jí)(rm)”表示種植作物物種后達(dá)到生理成熟的預(yù)期天數(shù)。例如，在玉米作物物種中，共享相同rm的作物品種被評(píng)估為在大致相同的時(shí)間達(dá)到粒黑層形成，并且因此通常也可以在相同的時(shí)間準(zhǔn)備好穗收獲。

如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)“生殖成熟”和“性成熟”可互換地使用。術(shù)語(yǔ)“生殖成熟等級(jí)(rpm)”和“性成熟等級(jí)”是指種植作物物種后產(chǎn)生雄性或雌性生殖結(jié)構(gòu)(如雄穗和雌穗)、從而達(dá)到生殖成熟或性成熟的預(yù)期天數(shù)。在雜交玉米種子生產(chǎn)中，基于觀察到的生殖組織的親本發(fā)育時(shí)間預(yù)測(cè)rpm?？梢跃_地預(yù)測(cè)rpm，例如，可以精確地在3天范圍內(nèi)預(yù)測(cè)商用雜交種子的作物群體的rpm。同時(shí)，生長(zhǎng)自被評(píng)估為生殖成熟的雜交種子的植物可以被預(yù)期在田地同時(shí)地達(dá)到生殖成熟。如本文中所使用的，當(dāng)提及在田地生長(zhǎng)的多于一種植物的作物群體時(shí)，術(shù)語(yǔ)“同時(shí)”是指“基本上在同一時(shí)間”。

如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)“攜帶”是指“包含”、“具有”或“對(duì)于...是轉(zhuǎn)基因的”，即攜帶轉(zhuǎn)基因、bt或基因的植物或植物細(xì)胞是指包含轉(zhuǎn)基因、bt或基因或?qū)τ谵D(zhuǎn)基因、bt或基因是轉(zhuǎn)基因的植物或植物細(xì)胞。

如本文中所使用的，來(lái)自“相同物種”的植物是指具有生殖親和性的結(jié)實(shí)植物，即，允許在這些物種的植物(包括野生物種)之間進(jìn)行育種。

如本文中所使用的，當(dāng)玉米穗仍然附著在莖上時(shí)，玉米穗的尖端可以被鑒定為玉米穗的莖遠(yuǎn)端部分。當(dāng)不附著時(shí)，玉米穗的尖端可以被鑒定為玉米穗的底部遠(yuǎn)端部分。在某些實(shí)施例中，玉米穗的尖端可以包括莖遠(yuǎn)端1/2、1/3、1/5、1/10、1/20的穗。

在田地的背景下，術(shù)語(yǔ)“部署”可以任選地包括例如準(zhǔn)備土壤、處理種子、成像種子、混合種子、共混種子、種植種子、由種子生長(zhǎng)植物、施水、施肥、施用植物保護(hù)劑(例如殺有害生物劑和殺真菌劑)、施用除草劑、施用干燥劑或脫葉劑、并且進(jìn)行干燥以收獲作物。如本文中所使用，“種植”種子包括植物由種子進(jìn)行“生長(zhǎng)”。除非另有說(shuō)明，執(zhí)行這類步驟的基本原理及其執(zhí)行順序?qū)⑹潜绢I(lǐng)域的普通技術(shù)人員(例如農(nóng)民)已知的。

實(shí)例

實(shí)例1-評(píng)估bt近交系對(duì)gax突變系的異花授粉

這個(gè)實(shí)例說(shuō)明了一種評(píng)估庇護(hù)植物群體的庇護(hù)潛力的方法，該庇護(hù)植物群體在田地中與bt轉(zhuǎn)基因植物群體(包含隱性配子體因子等位基因)套種，包含顯性配子體因子等位基因，其中bt轉(zhuǎn)基因靶向田地中在發(fā)育中的后代種子上取食的有害生物。為了評(píng)估被測(cè)試的特定配子體因子是否會(huì)阻止優(yōu)良近交系的授粉和具有bt轉(zhuǎn)基因而不具有親和配子體因子等位基因的推理雜交系(inferencehybridlines)的授粉，在實(shí)驗(yàn)區(qū)進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)中使用了五個(gè)含配子體因子的品系(四個(gè)是顯性并且一個(gè)是隱性)，和九個(gè)bt近交系(對(duì)評(píng)估的配子體因子呈隱性，并涵蓋了廣泛范圍的預(yù)測(cè)花粉脫落)。每一個(gè)配子體因子系都針對(duì)被測(cè)試的配子體因子進(jìn)行驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)條目完全隨機(jī)。該實(shí)驗(yàn)使用單粒播種機(jī)(singlekernelplanter，skp)進(jìn)行種植，這允許每個(gè)植物被鑒定為其自身的地塊。每個(gè)條目共有62個(gè)重復(fù)。總的來(lái)說(shuō)，在實(shí)驗(yàn)中，被測(cè)試的配子體因子實(shí)驗(yàn)區(qū)(和因此種植的植物)占總植物的5％。配子體因子測(cè)試植物被去雄，使得可能形成的任何種子將是用bt近交系授粉的結(jié)果。

收獲時(shí)的結(jié)實(shí)結(jié)果總結(jié)于表1中。收獲來(lái)自含配子體因子的品系的所有穗，并通過(guò)地塊進(jìn)行單獨(dú)鑒定。這些穗被評(píng)分為具有“0粒產(chǎn)生”、“少量粒產(chǎn)生”、“散亂?！被颉叭搿?。由于缺少植物(沒(méi)有種子發(fā)芽)或由于植物不能評(píng)分(例如，沒(méi)有產(chǎn)生穗的不結(jié)實(shí)植物)，存在一些缺失值。

沒(méi)有品系示出100％的沒(méi)有粒的穗。如預(yù)期的那樣，具有隱性ga1等位基因的a632系示出幾乎所有產(chǎn)生的穗具有完全的結(jié)實(shí)。40個(gè)穗中有三十八個(gè)有完全的結(jié)實(shí)。這個(gè)品系的ga1等位基因與含bt品系的已知ga1組合物親和。相比之下，w22ga2-s-墨西哥(w22ga2-s-mexicana)品系示出了總共52個(gè)穗中的僅兩個(gè)屬于“少量粒產(chǎn)生”類別。所生產(chǎn)的52個(gè)穗中有五十個(gè)沒(méi)有任何粒。雖然具有g(shù)a1-s等位基因的一個(gè)品系的發(fā)芽極差，但具有相同等位基因的w22系示出阻斷ga1花粉授粉的合理的適宜性。54個(gè)穗中僅有一個(gè)被完全授粉。其余的在“o”、“少量”和“散亂?！鳖悇e中示出2、41和10個(gè)穗，與具有親和配子體因子(ga1)的品系相比，這仍然示出結(jié)實(shí)的顯著減少。

表1

實(shí)例2-評(píng)估源自粒的玉米幼苗，該粒產(chǎn)生自bt近交系對(duì)gax突變系的異花授粉

測(cè)試物質(zhì)描述和起源

這個(gè)實(shí)例說(shuō)明了一種方法，該方法用于驗(yàn)證在源自與bt轉(zhuǎn)殖項(xiàng)植物(具有草銨膦抗性)共混的非bt庇護(hù)植物的玉米幼苗上使用草銨膦噴霧，gax庇護(hù)植物穗上有多少粒是通過(guò)來(lái)自bt轉(zhuǎn)殖項(xiàng)植物的gax花粉受精的。

測(cè)試物質(zhì)描述和起源

測(cè)試物質(zhì)是來(lái)自庇護(hù)植物的粒的玉米幼苗，其包含表2中列出的配子體因子，并與tc1507轉(zhuǎn)殖項(xiàng)(參見(jiàn)例如：美國(guó)專利號(hào)7,288,643；7,417,132；7,435,807；7,449,564；7,514,544；7,989,607；和8,901,378)近交系共混。玉米幼苗起源于2種不同的ga突變系，w22ga1-s和w22ga2-s-墨西哥。通過(guò)在開花時(shí)間范圍內(nèi)的授粉者的存在下產(chǎn)生最少量的種子，來(lái)選擇這些品系作為實(shí)例1中的最佳的表現(xiàn)者。使用七種不同的tc1507轉(zhuǎn)殖項(xiàng)近交系(具有廣泛的花粉脫落范圍)和對(duì)照w22近交系(w22r-sc-m3p-wr)。實(shí)驗(yàn)完全隨機(jī)化，并利用單粒播種機(jī)，允許每個(gè)植物在該田地內(nèi)具有一個(gè)唯一的地塊?？傮w而言，ga植物占實(shí)驗(yàn)中植物的5％。每個(gè)條目共有62個(gè)重復(fù)。允許植物在田地開放授粉。

穗上的粒數(shù)

收獲穗、進(jìn)行脫殼、并且進(jìn)行粒計(jì)數(shù)，如在表2中列出。

表2

每個(gè)穗產(chǎn)生的平均粒數(shù)如圖1所示。包含gax花粉(w22r-sc-m3p-wr)的對(duì)照植物的平均粒數(shù)為362.8粒/穗，而gax植物的穗上產(chǎn)生的平均粒數(shù)為94.1(w22ga1-s)和3.1(w22ga2-s-墨西哥)粒/穗。這些結(jié)果表明，在這個(gè)具體實(shí)驗(yàn)中，ga品系w22ga1-s和w22ga2-s-墨西哥的每個(gè)穗產(chǎn)生的粒比對(duì)照植物(w22r-sc-m3p-wr)分別少74％和99％。

粒發(fā)芽

粒發(fā)芽并進(jìn)行合計(jì)。每個(gè)穗的平均粒發(fā)芽如圖2所示。對(duì)照植物(w22r-sc-m3p-wr)的粒平均發(fā)芽率為99.2％，而gax植物每個(gè)穗的粒平均發(fā)芽率為88.7％(w22ga1-s)和73.3％(w22ga2-s-墨西哥)。這些結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)(w22ga1-s和w22ga2-s-墨西哥)中測(cè)試的gax品系近交的粒分別比對(duì)照植物(w22r-sc-m3p-wr)的粒少10.5％和25.9％。

發(fā)育自用ga花粉進(jìn)行異花授粉的粒

以6.43l/ha的比率來(lái)用草銨膦噴灑幼苗。顯示被草銨膦損傷的植物被認(rèn)為是來(lái)自庇護(hù)植物的gax花粉授粉而不是來(lái)自tc1507植物的gax花粉授粉的那些。沒(méi)有表現(xiàn)出草銨膦損傷的癥狀的植物被認(rèn)為是tc1507植物的gax花粉授粉的那些。植物(粒)與轉(zhuǎn)殖項(xiàng)tc1507的百分比如圖3所示。在對(duì)照植物(w22r-sc-m3p-wr)的穗上，含轉(zhuǎn)殖項(xiàng)tc1507的粒的百分比表明，該實(shí)驗(yàn)中該對(duì)照的異花授粉的天然比率為大約76％。ga植物的穗上的由轉(zhuǎn)殖項(xiàng)tc1507授粉的粒的百分比降低到19.1％(w22ga1-s)和3.6％(w22ga2-s-墨西哥)。這些結(jié)果表明，在本實(shí)驗(yàn)中使用的配子體因子組合的近交系中，ga品系w22ga1-s和w22ga2-s-墨西哥分別減少大約57％和72％的含tc1507的品系的異花授粉。

對(duì)本披露的不同所示實(shí)施例的上述描述并不旨在是詳盡的或者限制范圍于所披露的精確形式。雖然為了說(shuō)明目的而在本文中描述了具體實(shí)施例和具體實(shí)例，但是在本披露的范圍內(nèi)，不同等同的修改是可能的，例如具有不同配子體因子的近交系和雜交種的不同組合，如相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到的。本文提供的教導(dǎo)可以應(yīng)用于除了上述實(shí)例之外的其他目的。根據(jù)上述教導(dǎo)，許多修改和變化是可能的，因此它們?cè)谒綑?quán)利要求書的范圍內(nèi)。

可以根據(jù)上述詳細(xì)描述進(jìn)行這些改變和其他改變。通常，在以下權(quán)利要求書中，所使用的術(shù)語(yǔ)不應(yīng)被解釋為將范圍限制于說(shuō)明書和權(quán)利要求書中披露的具體實(shí)施例。

背景技術(shù)、詳細(xì)描述和實(shí)例中引用的每個(gè)文獻(xiàn)(包括專利、專利申請(qǐng)、雜志文章、摘要、手冊(cè)、書籍或其他披露內(nèi)容)的全部披露內(nèi)容通過(guò)引用以其整體結(jié)合在此。

就使用的數(shù)字(例如量、溫度、濃度等)而言，已努力確保其準(zhǔn)確性，但仍應(yīng)允許有一些實(shí)驗(yàn)誤差和偏差。除非另有說(shuō)明，份為重量份，分子量為平均分子量；溫度是攝氏度；并且壓力為大氣壓或接近大氣壓。