本發(fā)明涉及殺生物劑組合，所述組合的活性大于在單個抗微生物化合物中觀察的活性。
使用至少兩種抗微生物化合物的組合可以拓寬潛在市場，降低使用濃度和成本，并且減少浪費。在一些情況下，即使在高使用濃度下，市售抗微生物化合物也無法提供對微生物的有效控制，這是因為其抵抗某些類型的微生物的活性較弱，或相對緩慢的抗微生物活動，或在如高溫和高ph值的某些條件下的不穩(wěn)定性。不同抗微生物化合物的組合有時用于提供對微生物的整體控制或在具體最終使用環(huán)境中以較低使用比率提供相同水平的微生物控制。此外，已發(fā)現(xiàn)協(xié)同作用是一種不可預(yù)測的現(xiàn)象。通常，當(dāng)與具體活性組合時，類似的化合物顯示不同的協(xié)同概況?？赡馨l(fā)生的情況是不顯示協(xié)同作用或在不同協(xié)同范圍內(nèi)發(fā)生協(xié)同作用。因為這一觀察結(jié)果，難以(如果不是不可能)基于一類化合物的協(xié)同概況總結(jié)出關(guān)于一種化合物的協(xié)同概況的結(jié)論。因此，必須發(fā)現(xiàn)更多的協(xié)同組合和其協(xié)同范圍。
協(xié)同作用的一種這類實例可見于美國專利案第5,385,896號中。這一參考文獻公開膦鹽與醛的組合，但這一參考文獻未提出任一種本文中所要求的組合。仍需要具有增強的活性的抗微生物化合物的其它組合以提供對微生物的有效控制。本發(fā)明解決的問題是提供這類抗微生物化合物組合。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明涉及協(xié)同抗微生物組合物，其包含：(a)二胺；和(b)二硫基-2,2'-雙-苯甲基酰胺；其中二胺與二硫基-2,2'-雙-苯甲基酰胺的重量比是10:1至1:10。
具體實施方式
如本文中所使用，除非上下文另外明確指示，否則以下術(shù)語具有指定定義。術(shù)語“抗微生物化合物”是指能夠抑制微生物的生長或傳播和/或殺死微生物的化合物；抗微生物化合物包括殺細菌劑、殺菌劑、抑菌劑、抑菌素、殺真菌劑、抑真菌劑、除藻劑以及抑藻劑，視所施用的劑量水平、系統(tǒng)條件以及所需的微生物控制程度而定。術(shù)語“微生物”包括例如真菌(如酵母和霉菌)、細菌以及藻類。本說明書通篇使用以下縮寫：ppm＝按重量計的百萬分率(重量/重量)，ml＝毫升。除非另外說明，否則溫度以攝氏度(℃)為單位，并且提到的百分比是以重量計(重量％)。本發(fā)明的組合物中抗微生物化合物的百分比是以組合物中活性成分的總重量計，即，以抗微生物化合物本身計，不包括可能存在的任何量的溶劑、載劑、分散劑、穩(wěn)定劑或其它材料。最后，包含所有范圍值端點并且是可組合的(例如表示成10:1到1:10或者3:1和1:3的范圍也可以包括例如10:3)。
如本文中所使用，二胺是指n-(3-氨基丙基)-n-十二烷基丙-1,3-二胺，目錄號2372-82-9，并且二硫基-2,2'-雙-苯甲基酰胺或“dtbma”對應(yīng)于目錄號：2527-58-4。
在本發(fā)明的一些實施例中，二胺與二硫基-2,2'-雙-苯甲基酰胺(dtbma)的重量比是10:1到1:10，或9:1到1:9，或者3:1到1:3。
在本發(fā)明的一些實施例中，抗微生物組合適用于抑制水性介質(zhì)中的微生物生長，例如作為罐內(nèi)防腐劑。組合物還適用于控制其它水性介質(zhì)中的微生物，包括(但不限于)工業(yè)水和含水介質(zhì)/水被污染的培養(yǎng)基，如冷卻水、空氣洗滌器、熱交換器、鍋爐水、紙漿和造紙廠水、其它工業(yè)過程水介質(zhì)，如：壓載水、廢水、金屬加工流體、油氣、乳膠、油漆、涂料、粘合劑、油墨、條帶接合化合物、色素、基于水的漿料、個人護理和家用產(chǎn)品，如清潔劑、過濾系統(tǒng)(包括逆滲透和超濾系統(tǒng))、抽水馬桶、紡織物、皮革和皮革生產(chǎn)系統(tǒng)，或與其一起使用的系統(tǒng)。
通常，用于控制微生物生長的本發(fā)明的殺生物劑組合的量是10ppm到5,000ppm活性成分。在本發(fā)明的一些實施例中，組合物的活性成分以至少20ppm，或者至少50ppm，或者至少100ppm，或者至少150ppm，或者至少200ppm的量存在。在一些實施例中，組合物的活性成分以不超過2,000ppm，或者不超過1,000ppm，或者不超過500ppm，或者不超過400ppm，或者不超過300ppm，或者不超過250ppm，或者不超過200ppm，或者不超過100ppm，或者不超過50ppm的量存在。上文提到的濃度是以含有殺生物劑組合的液體組合物計。
本發(fā)明還涵蓋一種方法，其通過將所要求的殺生物劑組合并入材料中來減少，或抑制，或預(yù)防上述使用區(qū)域中的微生物生長，尤其在罐內(nèi)防腐應(yīng)用中。
實例
使用kull,f.c等人在《應(yīng)用微生物學(xué)(appliedmicrobiology)》9:538-541(1961)中描述的方法測定本發(fā)明的殺生物劑組合的協(xié)同作用。
用于計算協(xié)同指數(shù)(si)的公式是
qa/qa+qb/qb＝si
其中
qa＝化合物a的濃度(ppm)，單獨起作用產(chǎn)生終點(生長/不生長)
qa＝化合物a的濃度(ppm)，呈混合物形式，其產(chǎn)生終點(生長/不生長)
qb＝化合物b的濃度(ppm)，單獨起作用產(chǎn)生終點(生長/不生長)
qb＝化合物b的濃度(ppm)，呈混合物形式，其產(chǎn)生終點(生長/不生長)
在這一研究中，殺生物劑終點定義為在指定接觸時間下呈現(xiàn)至少4倍對數(shù)的細菌或酵母減少或保持最大2倍對數(shù)的細菌或酵母計數(shù)。如果終點無法確立，那么所測試的殺生物劑的最高濃度將用作供計算用的終點，并且si將以“小于或<”值記錄。
當(dāng)si具有小于1的值時，證實兩種殺生物劑的協(xié)同作用。如果si等于1，那么混合物顯示累加作用，并且如果si大于1，那么混合物顯示拮抗作用。
設(shè)計最小抑制性測試(mic)以評估可阻止細菌、酵母或真菌在所定義的培養(yǎng)液中生長的殺生物劑、殺生物劑摻合物或殺生物劑組合的最低濃度。在培育之后，基于可目視檢測的渾濁度來評定樣品。
對于殺生物劑，在稀釋因子是1.5的情況下進行這一測試。
針對兩種細菌菌株和一種酵母來測試以下殺生物劑產(chǎn)品/混合物：
最小抑制濃度(mic)測試方案
1.在透明容器中以相同體積制備測試樣品。殺生物劑稀釋是在胰酶大豆培養(yǎng)液(tsb)中在ph7.3下(對于細菌)和在麥芽提取物培養(yǎng)液(meb)中在ph5.4下(對于真菌菌株)進行。
對于每種殺生物劑產(chǎn)品和物種，通過在稀釋因子是1.5的情況下進行連續(xù)稀釋來一式兩份地制備16個樣品。
對于每種微生物菌株，添加兩個不含任何殺生物劑的樣品作為對照物。
2.每個測試樣品用微生物懸浮液接種以分別產(chǎn)生約1×106cfu/ml(在細菌物種的情況下)和約1×105cfu/ml(對于真菌物種)的水平。
制備微生物懸浮液：
細菌培養(yǎng)物：
綠膿桿菌(pseudomonasaeruginosa)dsm編號939atcc編號15442
金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureus)dsm編號799atcc編號6538
培養(yǎng)物在冷凍管中在-80℃下以甘油儲備液形式保存、解凍并且接著以100μl分散在tsa瓊脂板上。在30℃下培育1天之后，將菌株與緩沖液(ph7.3)一起收集。
使用標(biāo)準(zhǔn)活菌計數(shù)技術(shù)評估細胞的濃度。
對于接種物，在緩沖液(ph7.3)中進行稀釋。
酵母培養(yǎng)物：
白色念珠菌(candidaalbicans)dsm編號1386atcc編號10231
培養(yǎng)物在冷凍管中在-80℃下以甘油儲備液形式保存、解凍并且接著以100μl分散在mea(麥芽提取物瓊脂)皮氏培養(yǎng)皿(petridishes)上。
酵母菌株盤在28℃下培育1-2天，接著與緩沖液(ph5.0)一起收集。
基于總活菌計數(shù)結(jié)果，制備接種物。
3.培育測試樣品：
細菌30℃下2天
酵母28℃下2天
4.通過生長/不生長評定來目視進行讀取。在培育之后，微生物的生長引起渾濁，澄清表示未生長。在培育之后，在培養(yǎng)液中顯示未生長的最低濃度視為mic值。
針對細菌和酵母呈現(xiàn)協(xié)同作用的兩種殺生物劑的結(jié)果呈現(xiàn)于表1-3中。
表1.二胺和dtbma針對綠膿桿菌dsm編號939的殺菌功效和協(xié)同作用
表2.二胺和dtbma針對金黃色葡萄球菌dsm編號799的殺菌功效和協(xié)同作用
表3.二胺和dtbma針對白色念珠菌dsm編號1386的殺菌功效和協(xié)同作用