本發(fā)明涉及中國蛤蜊苗種繁育領(lǐng)域，具體為一種中國蛤蜊人工育苗方法。
背景技術(shù)：
中國蛤蜊(Mactra chinensis Philippi)俗稱“黃蜆子”，隸屬于軟體動物門、瓣鰓綱、簾蛤目、蛤蜊科、蛤蜊屬。中國蛤蜊通常棲息于水流通暢，餌料豐富的河口近海水域，營埋棲、濾食性生活，主要分布于我國的遼寧、山東沿海，朝鮮、日本也有分布。中國蛤蜊是丹東地區(qū)著名的優(yōu)質(zhì)土著品種，近年來，由于過度捕撈，自然資源日趨減少，市場價格不斷提高，增養(yǎng)殖價值日漸突出。
關(guān)于中國蛤蜊的研究起步較晚，并且主要在基礎(chǔ)生物學(xué)方面。隨著其資源的減少和經(jīng)濟價值的不斷提升，相關(guān)研究已經(jīng)開始向繁殖生物學(xué)和苗種培育方面轉(zhuǎn)變。近年來，楊林等(2010年)、劉相全等(2007年)進行了中國蛤蜊繁殖生物學(xué)方面的研究。沈永忱等(2004年)進行了中國蛤蜊誘導(dǎo)產(chǎn)卵和胚胎發(fā)育的觀察。人工育苗方面尚處于探索和試驗階段，閆喜武等2008年培育出殼長9.2mm幼貝6.4萬粒。王海濤等2009年和2010年分別培育出殼長0.5～0.6mm稚貝400萬粒和1200萬粒。人工育苗的主要問題是浮游幼蟲附著變態(tài)率低，稚貝培育成活率低，單位面積附苗量少，平均每平方米僅8萬多粒，遠未達到規(guī)模性的生產(chǎn)水平。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
針對目前中國蛤蜊苗種缺乏，人工育苗產(chǎn)量低等問題，本發(fā)明的目的在于提供一種中國蛤蜊人工育苗方法，以實現(xiàn)中國蛤蜊苗種規(guī)?；a(chǎn)。
本發(fā)明的技術(shù)方案是：
一種中國蛤蜊人工育苗方法，具體步驟如下：
(1)育苗用水預(yù)處理：育苗用水先經(jīng)過砂濾處理，砂濾池細沙層厚度60～80cm，培育期間水溫18～30℃，海水比重1.022～1.013g/ml，pH值8.0～8.3；
(2)餌料培養(yǎng)：中國蛤蜊餌料為單細胞藻類，單細胞藻類選擇金藻、角毛藻、扁藻或新月菱形藻為餌料培養(yǎng)品種；5月初開始引進藻種，一級餌料培養(yǎng)在三角燒瓶中培養(yǎng)，一級餌料培養(yǎng)用的海水采取煮沸消毒的方法；二級餌料培養(yǎng)在白塑料桶中培養(yǎng)，二級餌料培養(yǎng)用的海水采取漂白粉消毒的方法；三級餌料培養(yǎng)在水泥池中培養(yǎng)，三級餌料培養(yǎng)用的海水采取漂白粉消毒方法；
(3)親貝選擇：在繁殖期采集性成熟的親貝，親貝要求殼長4.3～4.8cm，性腺飽滿，雌雄數(shù)量比例1:1；親貝經(jīng)洗刷后用10～30mg/L高錳酸鉀水溶液處理10～30分鐘，吊籠暫養(yǎng)；以金藻、角毛藻、扁藻和新月菱形藻之一種或兩種以上為餌料，每日投喂3～5次，藻液濃度為2～6萬細胞/mL；每日全量換水1～3次，同時清除死亡的親貝、殘餌及糞便；
(4)催產(chǎn)：隨機抽取親貝解剖顯微鏡下觀察性腺成熟情況，當(dāng)看到卵子游離成熟時開始進行人工催產(chǎn)，催產(chǎn)采取陰干加流水刺激的方法；
(5)受精卵孵化：微量充氣孵化，密度10～15粒/mL；
(6)浮游幼蟲培育：培育密度5～10個/mL，以金藻、角毛藻、扁藻和新月菱形藻之一種或兩種以上為餌料，餌料日投喂3～5次，餌料藻液濃度為2～6萬細胞/ml；每日換水1～2次，每次的換水量為50％～70％；
(7)底棲稚貝培育：以60目篩下的細砂為附著基，培育密度20～40萬/平方米，以金藻、角毛藻、扁藻和新月菱形藻之一種或兩種以上為餌料，餌料日投喂3～5次，餌料藻液濃度為5～15萬細胞/ml，日換水1～2次。
所述的中國蛤蜊人工育苗方法，步驟(2)中，為了解決高溫期餌料培養(yǎng)易污染及雨季光照不足，單細胞藻類生長緩慢的問題，三級餌料培養(yǎng)采取高密度接種，以盡快達到投喂密度，接種比例為藻液：培養(yǎng)用水＝1:30～50重量比例。
所述的中國蛤蜊人工育苗方法，步驟(5)中，微量充氣是指每分鐘的充氣量為培育水體體積的1％～2％。
所述的中國蛤蜊人工育苗方法，步驟(7)之前進行倒池附著，以80目篩下的細砂為附著基，附著基用80～120ml/L次氯酸鈉水溶液浸泡消毒6～8小時，再用硫代硫酸鈉中和消除余氯后平鋪池底，厚度為1～2mm；附著基投放后，沉淀3～4小時，排掉渾濁的水，重新注入清水，將附著的殼頂后期幼蟲移入附著池，通過觀察浮游幼蟲的數(shù)量變動情況來判斷幼蟲附著情況，當(dāng)附著量達到20～40萬/平方米時，將仍在浮游的幼蟲收集出來，移入其它的池子繼續(xù)附著。
所述的中國蛤蜊人工育苗方法，步驟(7)之后，選取天氣晴好的日子將平均規(guī)格達到4～6mm的中國蛤蜊稚貝出池，播撒到適合中國蛤蜊稚貝生長的灘涂進行幼貝階段的培育70～90天。
所述的中國蛤蜊人工育苗方法，選擇的灘涂位于北緯N39°43′050″至N39°43′200″，東經(jīng)E123°43′200″至E123°43′250″處。
本發(fā)明的優(yōu)點及有益效果是：
相比于國內(nèi)中國蛤蜊人工育苗技術(shù)研究在規(guī)模方面，本發(fā)明屬于生產(chǎn)性的試驗研究，在研究中采取方便生產(chǎn)的技術(shù)手段進行人工育苗，著力提高稚貝的成活率和附著密度，為中國蛤蜊人工育苗的大規(guī)模生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)，與相關(guān)研究對比見表1。
表1：本發(fā)明與相關(guān)文獻主要技術(shù)措施及效果比較
具體實施方式
下面通過實施例對本發(fā)明進一步詳細說明。
實施例1
本實施例中，中國蛤蜊人工育苗方法的具體步驟如下：
1.親貝的來源
親貝采自黃海北部自然海區(qū)，殼長4.3～4.8cm，平均體重22g。親貝性腺飽滿，雄性性腺淺黃色，雌性性腺橘紅色，雌雄異體，雌雄數(shù)量比例約為1:1。
親貝入池水溫19.5℃、鹽度24‰、pH8.2。親貝經(jīng)洗刷后用20mg/L高錳酸鉀水溶液處理20分鐘，吊籠暫養(yǎng)。以新月菱形藻、叉鞭金藻、角毛藻或扁藻等單細胞藻類為餌料，每日投喂4次，藻液濃度為2～6萬細胞/mL。每日全量換水2次，同時清除死亡的親貝、殘餌及糞便。
其中，餌料培養(yǎng)過程如下：丹東地區(qū)中國蛤蜊產(chǎn)卵盛期在每年的5月下旬～6月下旬，5月初開始引進藻種，一級餌料培養(yǎng)在5000ml三角燒瓶中培養(yǎng)，一級餌料培養(yǎng)用的海水采取煮沸消毒的方法；二級餌料培養(yǎng)在56L白塑料桶中培養(yǎng)，二級餌料培養(yǎng)用的海水采取漂白粉消毒的方法；三級餌料培養(yǎng)在水泥池中培養(yǎng)，三級餌料培養(yǎng)用的海水采取漂白粉消毒方法；為了解決高溫期餌料培養(yǎng)易污染及雨季光照不足，單細胞藻類生長緩慢的問題，三級餌料培養(yǎng)采取高密度接種，以盡快達到投喂密度，接種比例為藻液：培養(yǎng)用水＝1:30～50(重量比例)；
2.催產(chǎn)
隨機抽取親貝解剖顯微鏡下觀察性腺成熟情況，當(dāng)看到卵子游離成熟時開始進行人工催產(chǎn)。催產(chǎn)采取陰干加流水刺激的方式，具體做法為：親貝陰干3小時后用16℃海水經(jīng)流水刺激1小時，再用19℃常溫海水經(jīng)流水刺激1小時后，種貝以吊籠的方式放入待產(chǎn)池中，等待產(chǎn)卵。
3.孵化
經(jīng)過催產(chǎn)的種貝入池后2小時開始產(chǎn)卵，當(dāng)受精卵達到10～15粒/mL密度后將種貝移入其他待產(chǎn)池繼續(xù)產(chǎn)卵，受精卵原池培養(yǎng)，保持24小時微量充氣，每分鐘的充氣量為培育水體的1％～2％(體積)。卵徑為59μm的受精卵在水溫19.5℃、鹽度為24‰、pH為8.2的環(huán)境條件下，經(jīng)過14個小時發(fā)育成擔(dān)輪幼蟲。擔(dān)輪幼蟲在溫度為19.8℃、鹽度為24‰、pH為8.2的條件下，經(jīng)過20小時發(fā)育成D型幼蟲，D型幼蟲殼長為69μm。
4.幼蟲培育
幼蟲選優(yōu)采用400目篩絹網(wǎng)倒池選優(yōu)，選優(yōu)后幼蟲的培育密度為5～8個/mL，每日換水1次，每次的換水量為50％～70％，換水網(wǎng)目前期選用400目，中后期選用200目。幼蟲培育期間餌料日投喂量為2～5萬細胞/mL，日投喂4次，餌料種類為叉鞭金藻、新月菱形藻或角毛藻，新鮮餌料供應(yīng)不足時加投喂海洋紅酵母。培育期間，乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)保持在3～4mg/L以絡(luò)合重金屬。在水溫19.5℃～22.5℃、海水鹽度為24‰、pH為8.2的條件下，受精卵經(jīng)過12～16天的培育，達到殼長為280～300μm，鏡下觀察有足伸出時，開始進行附著。
5.倒池附著
附著基選用細的河砂，使用前將細砂用80目、60目篩絹網(wǎng)篩出(前期使用80目，后期換成60目)，河砂直徑為0.3～0.7mm，附著基用100ml/L次氯酸鈉水溶液浸泡消毒6～8小時，再用硫代硫酸鈉中和消除余氯后平鋪池底，厚度約為1mm。附著基投放后，沉淀3～4小時，排掉渾濁的水，重新注入清水，然后將附著的殼頂后期幼蟲移入附著池，通過觀察浮游幼蟲的數(shù)量變動情況來判斷幼蟲附著情況，當(dāng)附著量達到30萬/平方米左右時，將仍在浮游的幼蟲收集出來，移入其它的池子繼續(xù)附著。
6.稚貝培育
稚貝附著培育密度為30萬/m2，培育水深60cm，每日換水一次，換水量70％，每天投放濃度為10mL/m3的EM菌(Effective Microorganisms)以保證底質(zhì)環(huán)境，餌料為叉鞭金藻、角毛藻或扁藻，每日投喂4次，各種餌料混合投喂，投喂量為5～15萬細胞/mL。觀察稚貝生長情況根據(jù)其生長情況適時添加附著基，平均每10天添加約1mm厚的附著基。
7.幼貝培育
選取天氣晴好的日子將平均規(guī)格達到5mm的中國蛤蜊稚貝出池，播撒到適合中國蛤蜊稚貝生長的灘涂進行幼貝階段的培育。本發(fā)明選擇的灘涂位于北緯N39°43′050″至N39°43′200″，東經(jīng)E123°43′200″至E123°43′250″處。經(jīng)過為期80天的培育，成功培育出中國蛤蜊總數(shù)量為874.4萬個，密度為437個/m2，平均殼長為14.08mm，平均殼高為10.52mm，平均體重為0.53g。
8.結(jié)果
通過使用本發(fā)明的育苗方法，中國蛤蜊稚貝平均附著密度達到22～66.7萬粒/m2，稚貝出池平均規(guī)格為殼長1.3mm～5.54mm，三年累計出苗量達1.9億粒。并且成功實現(xiàn)了幼貝的培育，培育出平均殼長為14.08mm，平均殼高為10.52mm，平均體重為0.53g的幼貝874.4萬個。