本發(fā)明屬于農(nóng)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，更具體涉及一種防治玉竹根腐病的中藥材組合物，同時還涉及一種防治玉竹根腐病的中藥材組合物的制備方法，還涉及一種防治玉竹根腐病的中藥材組合物的用途。
背景技術(shù)：
：玉竹(Polygonatumodoratum(Mill.)Druceflorum)為百合科Liliaeea植物，又名尾參、玉參，具有生津止渴，養(yǎng)陰潤燥的功效，是一種肉質(zhì)根莖可藥食兩用的經(jīng)濟作物。在玉竹的生產(chǎn)、繁殖過程中，伴隨著大量病害的發(fā)生，其中最為嚴(yán)重的是玉竹根腐病，玉竹根腐病主要病原是芬芳鐮刀菌(Fusariumredolen)。該病害近年來有逐漸加重擴散的趨勢，玉竹根腐病的發(fā)生和蔓延影響了玉竹的產(chǎn)量和品質(zhì)。玉竹根腐病是一種土傳病害，目前主要用多菌靈、百菌清等化學(xué)試劑對玉竹根腐病進行防治。隨著大量化學(xué)農(nóng)藥的使用，一方面引起病原菌的耐藥性；另一方面引起農(nóng)藥殘留和重金屬超標(biāo)等問題，越來越受到消費者的抵制。所以開發(fā)一種無污染的、綠色的、環(huán)境友好型的生物農(nóng)藥來防治玉竹根腐病成為解決上述問題的關(guān)鍵。本試驗旨在開發(fā)一種無污染的，環(huán)境友好型的用來防治玉竹根腐病的生物抑菌劑。根據(jù)研究報道，已有很多種中藥用于防治病害。如金銀花、百部、丁香等用于抑制炭疽病，蒂疽病等病原菌；柴胡、梔子、薄荷、茯苓等抑制金黃色葡萄球菌；車前草對蘋果輪紋病和柑橘炭疽病有較好的抑菌效果；五倍子對白菜黑斑病抑菌效果明顯；細辛對棉花枯萎病菌有較好的抑菌效果。本實驗選用42種中藥材對玉竹根腐病進行了抑菌試驗，篩選出了最佳的抑制玉竹根腐病的藥劑。將藥劑進行組合后，篩選出了黃柏和土黃連為最佳的藥劑組合以及黃柏和土黃連最佳的配比量。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的空白，是在于提供了一種防治玉竹根腐病的中藥組合物，配方合理，使用方便，無污染、安全、不易產(chǎn)生抗藥性的中藥材組合物，土黃連與黃柏的組合物對玉竹根腐病有較好的抑菌效果且抑菌效果強于單一的中藥材菌劑。本發(fā)明的中藥材組合物抑菌效果強、環(huán)境污染小、無殘毒等特點。有效避免了化學(xué)農(nóng)藥的危害。中藥材組合物大大降低了病原菌產(chǎn)生抗藥性的可能。本發(fā)明的另一個目的是在于提供了一種防治玉竹根腐病的中藥組合物的制備方法，方法易行，操作簡便。防治玉竹根腐病的組合物為土黃連和黃柏，原料取材方便，價格低廉。提取過程簡單易行，也不要昂貴的試驗儀器，普通的蒸餾設(shè)備就可以完成提取過程。生產(chǎn)工藝可控性強，質(zhì)量重現(xiàn)性好。本發(fā)明還有一個目的是在于提供了一種中藥組合物在制備治療或預(yù)防玉竹根腐病藥物中的應(yīng)用。開發(fā)的黃柏與土黃連的中藥材組合物對玉竹根腐病的抑菌效果顯著，能夠較好的防治玉竹根腐病的發(fā)生、蔓延，減少農(nóng)民和種植戶的經(jīng)濟損失。防治效果好、防治時間長、減少化學(xué)農(nóng)藥帶來的環(huán)境污染以及對病蟲害的抗藥性。操作過程簡單易行，無需專業(yè)的基礎(chǔ)知識，具有基層推廣價值。為了實現(xiàn)上述的目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)措施：一種防治玉竹根腐病的中藥組合物，由以下重量份的原料組成：一種防治玉竹根腐病的中藥組合物，由以下重量份的原料組成(優(yōu)選范圍)：一種防治玉竹根腐病的中藥組合物，由以下重量份的原料組成(好范圍)：一種防治玉竹根腐病的中藥組合物，由以下重量份的原料組成(較好范圍)：一種防治玉竹根腐病的中藥組合物，由以下重量份的原料組成(最佳值)：一種防治玉竹根腐病的中藥組合物(膏狀物)的制備方法，其步驟是：(1)按比例分別稱取黃柏、土黃連，分別倒入電熱套圓形瓶中，分別倒入75％(75mL的無水乙醇加25mL的水)的酒精1000ml,開啟電熱套(DRT-XS)，分別對黃柏、土黃連進行提取，提取時間控制在28－32min，溫度控制在93－97℃，獲得第一次提取液。(2)分別對第一次提取液進行抽濾，再倒入75％(75mL的無水乙醇加25mL的水)的酒精500ml，提取時間控制在28－32min，溫度控制在93－97℃，獲得第二次提取液。(3)分別對第二次提取液進行抽濾，將第二次提取液倒入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(R2003KB)圓形瓶中(不超越總體積1/3)，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至膏狀，旋轉(zhuǎn)參數(shù)：60-75/min；制冷溫度控制在：-2.0-10℃，分別獲得黃柏、土黃連提取物(膏狀物)。(4)將獲得的中藥組合物(膏狀物)，分別把黃柏、土黃連提取物(膏狀物)倒入瓶中，(空瓶先稱重)，再稱重，做好記載，貼好標(biāo)簽，寫上編號名稱，保存至4℃冰箱中備用。(5)將黃柏提取物和土黃連提取物按一定比例裝入一個容器內(nèi)，進行攪拌，攪拌混合均勻后，向容器中加無菌水，獲得一種中藥組合物抑菌劑。黃柏和土黃連對芬芳鐮刀菌抑制效果的配比篩選及驗證過程：1、將提取好的黃柏和土黃連提取物分別(膏狀物)溶于無菌水中。分別充分震蕩溶解離心后取上層清液，用細菌過濾器將中藥材除菌備用。2、然后取除菌的黃柏和土黃連按照不同比例進行配比，倒入瓶中，貼好標(biāo)簽，寫上編號名稱。3、將0.45um孔徑的濾膜用打孔器打孔后，得到小圓片濾紙高溫(121℃,25-30min)滅菌備用。4、芬芳鐮刀菌F.redolens經(jīng)過PCR、測序及NCBI比對后鑒定為芬芳鐮刀菌F.redolens。5、將馬鈴薯(去皮)200g，蔗糖20g，瓊脂粉17g，水1000mL煮沸30min,過濾后高溫(121℃,25-30min)滅菌制成培養(yǎng)基備用。6、將芬芳鐮刀菌F.redolens接種于PDA培養(yǎng)基活化培養(yǎng)，當(dāng)菌種培養(yǎng)到7天左右菌株活性最佳時，進行試驗。7、將培養(yǎng)好的活性最佳的芬芳鐮刀菌F.redolens用直徑6mm的滅菌打孔器打成菌餅若干。8、將小圓片濾膜放置于培養(yǎng)皿的正中央，將一個菌餅放置于濾膜與培養(yǎng)皿邊緣的正中間，另一個菌餅放置于對稱的另一邊。分別將不同比例配好的黃柏、土黃連組合物取25μL滴于培養(yǎng)基上培養(yǎng)，每種不同配比的組合物做三個重復(fù)，用水做空白對照，多菌靈做陽性對照。于28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)7d。觀察抑菌圈的大小。9、當(dāng)黃柏與土黃連比例為1:2、1:1、1:5、2:1、5:1時，抑菌圈大小分別為19.5mm、16.75mm、15.5mm、14.25mm、13mm，而空白對照的抑菌圈大小為0。500倍多菌靈對芬芳鐮刀菌的抑菌圈大小為20.5mm(見表1)。10、從抑菌圈的大小可以看出，中藥材組合物在1:2、1:1、1:5、2:1、5:1這五個比例時都表現(xiàn)出了較好的抑菌效果。特別是黃柏與土黃連比例為1:2時，其抑菌圈大小與500倍多菌靈的抑菌圈大小相當(dāng)。表1為黃柏和土黃連的不同濃度配比對芬芳鐮刀菌F.redolens的抑菌圈大小一種中藥組合物(制劑)在制備治療或預(yù)防玉竹根腐病藥物中的應(yīng)用，其步驟是：將篩選出的土黃連和黃柏組合物的最佳配比制備為水劑，可以采用拌種、灌根的方法施用到田間。將土黃連和黃柏組合物與對照無菌水對玉竹根腐病進行田間藥效試驗。A、將黃柏中藥組合物(膏狀物)和土黃連中藥組合物(膏狀物)以83.3％和16.7％(黃柏與土黃連的配比為5:1)的比例混合制備成水劑。加入無菌水，定容到1000份。B、選用健康的15cm左右長度的玉竹根莖用此中藥組合物浸泡28－32min后種植在玉竹根腐病發(fā)生嚴(yán)重的地塊，以無菌水浸泡健康的15cm左右長度玉竹根莖28－32min后種植在對照試驗的相同地塊作為空白對照。C、玉竹出苗后常規(guī)管理，不施用任何肥料和農(nóng)藥，在30天內(nèi)檢測根腐病發(fā)生情況，到達最適宜時期，將苗連根莖拔出、洗凈，檢測玉竹根莖的病斑數(shù)量。D、通過黃柏(提取物)和土黃連(提取物)以83.3％和16.7％(黃柏與土黃連的配比為5:1)的比例混合制備成水劑浸泡健康的玉竹根莖處理后，該中藥混合物對玉竹的萌發(fā)率影響不大，與空白對照相當(dāng)。與空白對照相比較，處理的玉竹根莖病斑明顯減少，對玉竹根腐病F.redolens有明顯的抑制作用。對照玉竹根莖的病斑數(shù)為5.3個，而經(jīng)過黃柏(提取物)和土黃連(提取物)以83.3％和16.7％(5:1)的比例處理的玉竹根莖的病斑數(shù)為1.5個，防治效果達到71.7％。(大田試驗時選用黃柏與土黃連的配比為5:1，此配比的室內(nèi)抑菌效果驗證時抑菌圈最小。大田驗證選用室內(nèi)抑菌圈最小的組合配比量，此配比量的大田防治效果好，所以此中藥材組合物在1:2、1:1、1:5、2:1、5:1這五個比例時都表現(xiàn)出較好的抑菌效果)E、通過大田試驗驗證了此組合物對玉竹根腐病表現(xiàn)出較好的防治效果。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點和有益效果：(1)首次用黃柏和土黃連組合物對玉竹根腐病(F.redolens)進行防治抑菌試驗，并且有較好的抑菌效果。(2)本發(fā)明的中藥材組合物抑菌效果強、環(huán)境污染小、無殘毒等特點。有效避免了化學(xué)農(nóng)藥的危害。(3)中藥材組合物大大降低了病原菌產(chǎn)生抗藥性的可能。(4)本發(fā)明提供了一種防治玉竹根腐病的中藥組合物的制備方法，方法易行，操作簡便。不需要昂貴的儀器設(shè)備，普通的蒸餾設(shè)備就可以完成提取過程。(5)原料價格低廉、生產(chǎn)工藝可控性強、質(zhì)量重現(xiàn)性好、具有可操作性和推廣性。有關(guān)實驗數(shù)據(jù)：請見表1為黃柏和土黃連的不同配比對芬芳鐮刀菌的抑菌圈大小。附圖說明圖1左邊圖為無菌水對芬芳鐮刀菌F.redolens的抑菌效果圖；右邊圖為黃柏(提取物)和土黃連(提取物)的中藥組合物(配比為1:2)對芬芳鐮刀菌F.redolens的抑菌效果圖。1、大田試驗中，黃柏(提取物)和土黃連(提取物)以83.3％和16.7％(5:1)的比例作為水劑對健康玉竹根莖進行栽種前的浸泡時，防治效果達到71.7％。所以對玉竹根腐病有較好的防治效果。2、操作過程簡單易行，無需專業(yè)的基礎(chǔ)知識，適合基層推廣。3、不會造成環(huán)境污染和對使用者造成傷害。具體實施方式實施例1：一種防治玉竹根腐病的中藥組合物，它由以下重量份的原料組成：一種防治玉竹根腐病的中藥組合物(膏狀物)的制備方法，其步驟是：(1)分別稱取黃柏、土黃連，分別倒入電熱套圓形瓶中，分別倒入75％(75mL的無水乙醇加25mL的水)的酒精1000ml,開啟電熱套，分別對黃柏、土黃連進行提取，提取時間控制在28或29或30或31或32min，溫度控制在93或94或95或96或97℃，獲得第一次提取液；(2)分別對第一次提取液進行抽濾，再倒入75％(75mL的無水乙醇加25mL的水)的酒精500ml，提取時間控制在28或29或30或31或32min，溫度控制在93或94或95或96或97℃，獲得第二次提取液；(3)分別對第二次提取液進行抽濾，將第二次提取液倒入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(R2003KB)圓形瓶中(不超越總體積1/3)，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至膏狀，旋轉(zhuǎn)參數(shù)：60或63或66或69或72或75/min；制冷溫度控制在：-2.0或-1或1或3或5或8或10℃，分別獲得黃柏、土黃連提取物(膏狀物)；(4)將獲得的中藥組合物(膏狀物)，分別把黃柏、土黃連提取物(膏狀物)倒入瓶中，(空瓶先稱重)，再稱重，做好記載，貼好標(biāo)簽，寫上編號名稱，保存至4℃冰箱中備用。(5)將黃柏提取物和土黃連提取物按一定比例裝入一個容器內(nèi)，進行攪拌，攪拌混合均勻后，向容器中加無菌水，定容至1000份，獲得一種中藥組合物制劑。(6)待用于防治玉竹根腐病。能夠較好的防治玉竹根腐病的發(fā)生、蔓延，減少農(nóng)民和種植戶的經(jīng)濟損失。防治效果好、防治時間長、減少化學(xué)農(nóng)藥帶來的環(huán)境污染以及對病蟲害的抗藥性。一種防治玉竹根腐病的中藥組合物，它由以下重量份的原料組成：黃柏土黃連無菌水黃柏土黃連無菌水實施例2355110535實施例790340570實施例3210100690實施例8110160730實施例419085725實施例9120240640實施例516095745實施例10220200580實施例680365545實施例11150230620其制備方法與實施例1相同。實施例12：一種中藥組合物(制劑)在制備治療或預(yù)防玉竹根腐病藥物中的應(yīng)用，其步驟是：A、將黃柏中藥組合物(膏狀物)和土黃連中藥組合物(膏狀物)以83.3％和16.7％(5:1)的比例混合制備成水劑。加入無菌水，定容到1000份。B、選用健康的15cm左右長度的玉竹根莖用此中藥組合物浸泡30min后種植在玉竹根腐病發(fā)生嚴(yán)重的地塊，以無菌水浸泡健康的15cm左右長度玉竹根莖28－32min后種植在對照試驗的相同地塊作為空白對照。C、玉竹出苗后常規(guī)管理，不施用任何肥料和農(nóng)藥，在30天內(nèi)檢測根腐病發(fā)生情況，到達最適宜時期，將苗連根莖拔出、洗凈，檢測玉竹根莖的病斑數(shù)量。通過黃柏(膏狀物或制劑)和土黃連(膏狀物或制劑)以83.3％和16.7％(5:1)的比例混合制備成水劑浸泡健康的玉竹根莖處理后，該中藥混合物對玉竹的萌發(fā)率影響不大，與空白對照相當(dāng)。與空白對照相比較，處理的玉竹根莖病斑明顯減少，對玉竹根腐病有明顯的抑制作用。對照玉竹根莖的病斑數(shù)為5.3個，而經(jīng)過黃柏(膏狀物或制劑)和土黃連(膏狀物或制劑)以83.3％和16.7％(5:1)的比例處理的玉竹根莖的病斑數(shù)為1.5個，防治效果達到71.7％。所述的病原菌為引起玉竹根腐病的芬芳鐮刀菌F.redolens。當(dāng)前第1頁1 2 3