本發(fā)明涉及農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種成綠肉座菌懸浮劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
21世紀(jì)是農(nóng)業(yè)發(fā)展的重要階段，農(nóng)業(yè)的發(fā)展直接影響著國民經(jīng)濟的全局發(fā)展。但在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中，往往發(fā)生一系列蟲害，使農(nóng)作物減產(chǎn)，給種植著帶來巨大的經(jīng)濟損失。
在溫室栽培中，除少數(shù)借助氣流或人們的農(nóng)事活動從溫室外傳入的病害外，絕大多數(shù)栽培病害都屬于土傳病害，土傳病害對溫室栽培起著巨大的影響作用。成綠肉座菌在對土傳植物病原真菌有良好的抑制作用。其非揮發(fā)性代謝產(chǎn)物能完全抑制立枯絲核菌、鐮刀菌、腐霉菌三種病原菌的生長。但現(xiàn)有技術(shù)中并沒有一種利用成綠肉座菌的高效、穩(wěn)定的防治制劑，這對成綠肉座菌的應(yīng)用具有很大的限制。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種成綠肉座菌懸浮劑，本發(fā)明的成綠肉座菌懸浮劑穩(wěn)定性好，成綠肉座菌在油懸浮劑中孢子萌發(fā)率高，入水分散優(yōu)，呈云霧狀分散，性質(zhì)穩(wěn)定，貯存過程中不會出現(xiàn)分層及沉淀問題，熱貯分解率低，成本低，藥液容易滲透到靶標(biāo)，藥效高。
本發(fā)明提供了一種成綠肉座菌懸浮劑，包括以下重量份數(shù)的組分：
藥物活性組分5～12份，所述藥物活性組分為成綠肉座菌；
助劑15～24份；
油基65～80份。
優(yōu)選的是，所述的成綠肉座菌選自生物保藏編號為CGMCC No.7995的菌種。
優(yōu)選的是，所述的成綠肉座菌懸浮劑的有效孢子量為1.5～2.8×109cfu/g。
優(yōu)選的是，所述的成綠肉座菌懸浮劑的雜菌率≤0.1％。
優(yōu)選的是，所述成綠肉座菌懸浮劑的懸浮率≥95％。
優(yōu)選的是，所述成綠肉座菌懸浮劑的成綠肉座菌的活孢率≥90％。
優(yōu)選的是，所述助劑包括聚醚磷酸酯類表面活性劑、硅酸鋁鎂和脂肪醇聚氧乙烯醚。
優(yōu)選的是，以助劑的重量份數(shù)為基準(zhǔn)，所述助劑包括12.5～23.5％的聚醚磷酸酯類表面活性劑、41～65％的硅酸鋁鎂、22～41％的脂肪醇聚氧乙烯醚。
優(yōu)選的是，所述油基包括礦物油或植物油。
本發(fā)明還提供了上述技術(shù)方案所述的成綠肉座菌懸浮劑的制備方法，包括以下步驟：
a)將油基、成綠肉座菌和助劑混合、剪切，得到剪切料；
b)將所述步驟a)得到的剪切料進行砂磨，得到砂磨料；
c)將所述步驟b)得到砂磨料攪拌，得到成綠肉座菌懸浮劑。
本發(fā)明提供了本發(fā)明提供了一種成綠肉座菌懸浮劑，包括以下重量份數(shù)的組分：藥物活性組分5～12份，所述藥物活性組分為成綠肉座菌；助劑15～24份；油基65～80份。在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌懸浮劑入水分散優(yōu)，呈云霧狀分散，性質(zhì)穩(wěn)定，貯存過程中不會出現(xiàn)分層及沉淀問題，熱貯分解率低，成本低；藥液容易滲透到靶標(biāo)，藥效高；且本申請?zhí)峁┑某删G肉座菌懸浮劑低毒，殺蟲效果穩(wěn)定，且對人畜和作物安全，安全性高。實驗結(jié)果表明，成綠肉座菌防治土傳病害的效果最高可達89.5％。
生物保藏說明
成綠肉座菌(Hypocrea virens)。本菌種保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，保藏編號為CGMCC No.7995，保藏時間為2013年8月13日。
具體實施方式
本發(fā)明提供了一種成綠肉座菌懸浮劑，包括以下重量份數(shù)的組分：藥物活性組分5～12份，所述藥物活性組分為成綠肉座菌；助劑15～24份；油基65～80份。
本發(fā)明提供的成綠肉座菌懸浮劑優(yōu)選包括5～12份的成綠肉座菌，更優(yōu)選為8～10份，最優(yōu)選為9份。
在本發(fā)明中，所述的成綠肉座菌選自生物保藏編號為CGMCC No.7995的菌種。
在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌的制備方法優(yōu)選包括：將成綠肉座菌接種于液體培養(yǎng)基中，進行液體發(fā)酵，得到成綠肉座菌發(fā)酵液。
本發(fā)明優(yōu)選將成綠肉座菌接種于液體培養(yǎng)基中，進行液體發(fā)酵，得到成綠肉座菌發(fā)酵液。在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌使用的液體培養(yǎng)基優(yōu)選包括以下重量份的組分：馬鈴薯粉10～50份，葡萄糖10～60份，水120～500份。在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌使用的液體培養(yǎng)基優(yōu)選包括10～50份馬鈴薯粉，更優(yōu)選為12～35份，最優(yōu)選為15份；所述成綠肉座菌使用的液體培養(yǎng)基優(yōu)選包括10～60份葡萄糖，更優(yōu)選為40～55份，最優(yōu)選為35份；所述成綠肉座菌使用的液體培養(yǎng)基優(yōu)選包括120～500份的水，更優(yōu)選為200～400份，最優(yōu)選為350份。
在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌的接種量優(yōu)選為2～8％，，更優(yōu)選為5％。
在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌的液體發(fā)酵在通氣條件下進行，所述通氣過程包括順次的第一通氣階段、第二通氣階段和第三通氣階段：第一通氣階段的時間優(yōu)選占整個發(fā)酵過程的1/6～1/3，通氣速度優(yōu)選為8～12m3/h；第二通氣階段的時間占整個發(fā)酵過程的1/3～2/3，通氣速度優(yōu)選為14～16m3/h；第三通氣階段的時間占整個發(fā)酵過程的1/6～2/3，通氣速度優(yōu)選為18～25m3/h。在本發(fā)明中，所述第一階段的通氣速度更優(yōu)選為10m3/h；所述第二階段的通氣速度更優(yōu)選為15m3/h，所述第三階段的通氣速度更優(yōu)選為20m3/h。
在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌液體發(fā)酵的時間為48～96h，更優(yōu)選為72h；發(fā)酵溫度為25～30℃，更優(yōu)選為28℃。
在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌液體發(fā)酵時的壓力為0.1±0.02MPa。
在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌在發(fā)酵過程中優(yōu)選進行光照，所述光照條件為：功率為15W～100W，更優(yōu)選為40W的白熾燈。
本發(fā)明優(yōu)選在成綠肉座菌發(fā)酵活菌總數(shù)為2～6×1010cfu/g，更優(yōu)選為3×1010cfu/g時，停止發(fā)酵。
完成所述成綠肉座菌的發(fā)酵后，本發(fā)明優(yōu)選對成綠肉座菌發(fā)酵液進行固液分離，得到成綠肉座菌菌體；對成綠肉座菌菌體進行烘干、粉碎和過篩，得到固體粉狀成綠肉座菌。所述固液分離優(yōu)選采用離心的方法，離心轉(zhuǎn)速優(yōu)選為1500～3000rpm，更優(yōu)選為2000rpm；所述離心時間優(yōu)選為15～30min，更優(yōu)選為20min。在本發(fā)明中，所述烘干的溫度優(yōu)選為30～50℃，更優(yōu)選為35～45℃，最優(yōu)選為40℃；所述烘干的時間優(yōu)選為20～45h，更優(yōu)選為30～40h，最優(yōu)選為35h；本發(fā)明將成綠肉座菌菌體烘干至水分含量優(yōu)選在25～35％之間，更優(yōu)選為27～32％，最優(yōu)選為30％。
本發(fā)明對所述固體發(fā)酵培養(yǎng)基粉碎的方法沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的粉碎方法即可。在本發(fā)明中，所述固體粉狀成綠肉座菌過篩優(yōu)選采用80～100目，更優(yōu)選為85～95目，最優(yōu)選為90目。
在本發(fā)明中，所述的成綠肉座菌懸浮劑的有效孢子量為1.5～2.8×109cfu/g，更優(yōu)選為2.0×109cfu/g。所述的成綠肉座菌懸浮劑的雜菌率≤0.1％。所述成綠肉座菌懸浮劑的懸浮率≥95％，更優(yōu)選為≥98％。所述成綠肉座菌懸浮劑的成綠肉座菌的活孢率≥90％。
在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌懸浮劑優(yōu)選包括15～24份的助劑，更優(yōu)選為16～20份，最優(yōu)選為18份。在本發(fā)明中，所述助劑包括聚醚磷酸酯類表面活性劑、硅酸鋁鎂和脂肪醇聚氧乙烯醚。本發(fā)明對所述聚醚磷酸酯類表面活性劑、硅酸鋁鎂和脂肪醇聚氧乙烯醚的來源沒有特殊的限定，采用常規(guī)的聚醚磷酸酯類表面活性劑、硅酸鋁鎂和脂肪醇聚氧乙烯醚的市售產(chǎn)品即可。
以助劑的重量份數(shù)為基準(zhǔn)，本發(fā)明所述助劑優(yōu)選包括12.5～23.5％的聚醚磷酸酯類表面活性劑，更優(yōu)選為15～21％；所述助劑優(yōu)選包括41～65％的硅酸鋁鎂，更優(yōu)選為44～56％；所述助劑優(yōu)選包括22～41％的脂肪醇聚氧乙烯醚，更優(yōu)選為25～36％。
本發(fā)明提供的成綠肉座菌懸浮劑優(yōu)選包括65～80份的油基，更優(yōu)選為70～76份，最優(yōu)選為72份。在本發(fā)明中，所述油基包括礦物油或植物油，本發(fā)明對所述礦物油或植物油的種類和來源沒有特殊限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的農(nóng)藥油懸浮劑的礦物油或植物油的市售商品即可。具體的礦物油優(yōu)選為油酸甲酯，硬脂酸甲酯，植物油優(yōu)選為大豆油，菜籽油，玉米油。本發(fā)明所述的油基具有良好的藥物穩(wěn)定性，亦可提高藥物的藥效。
本發(fā)明還提供了上述技術(shù)方案所述的成綠肉座菌懸浮劑的制備方法，包括以下步驟：
a)將油基、成綠肉座菌和助劑混合、剪切，得到剪切料；
b)將所述步驟a)得到的剪切料進行砂磨，得到砂磨料；
c)將所述步驟b)得到砂磨料攪拌，得到成綠肉座菌懸浮劑。
在本發(fā)明中，所述油基、成綠肉座菌和助劑的混合、剪切優(yōu)選為將油基平均分成2份，將第1份油基進行第一剪切，然后與成綠肉座菌混合、第二剪切，再與助劑混合、第三剪切，再與第2份油基混合、第四剪切，添加完所有原料后，再繼續(xù)剪切20～40min，更優(yōu)選為25～35min，最優(yōu)選為30min。本發(fā)明對混合、剪切的設(shè)備沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的混合、剪切設(shè)備即可，如剪切釜。在本發(fā)明中，所述第一剪切、第二剪切、第三剪切和第四剪切的轉(zhuǎn)速獨立優(yōu)選為5000rpm～20000rpm，更優(yōu)選為10000rpm～15000rpm。
得到剪切料后，本發(fā)明將所述剪切料砂磨，得到砂磨料。在本發(fā)明中，所述砂磨后得到的物料的粒度優(yōu)選為2～8μm，更優(yōu)選為3～7μm，最優(yōu)選為4～6μm。本發(fā)明對所述砂磨的設(shè)備沒有特殊限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的砂磨設(shè)備即可，如砂磨機。
得到砂磨料后，本發(fā)明將所述砂磨料攪拌，得到成綠肉座菌懸浮劑。在本發(fā)明中，所述砂磨料的攪拌時間優(yōu)選為10～30min，更優(yōu)選為15～25min，最優(yōu)選為20min。本發(fā)明對所述攪拌的設(shè)備沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的攪拌設(shè)備即可，如攪拌機。
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明提供的成綠肉座菌懸浮劑及其制備方法做進一步詳細的介紹，本發(fā)明的技術(shù)方案包括但不限于以下實施例。
實施例1
成綠肉座菌的制備
將成綠肉座菌擴大培養(yǎng)后以5％的接種量接種在液體培養(yǎng)中，所述液體培養(yǎng)基包括馬鈴薯粉25份，葡萄糖50份，水300份。發(fā)酵條件為：溫度為28℃、罐內(nèi)壓力0.1MPa，時間為90小時；發(fā)酵過程中通氣分為三個階段：第一階段時間為20小時，通氣量為10m3/h，第二階段時間為40小時，通氣量為14m3/h，第三階段時間為30小時，通氣量為25m3/h；發(fā)酵過程中的光照條件為：36V60W白熾燈；當(dāng)活菌總數(shù)達3×1010cfu/g停止發(fā)酵得到成綠肉座菌發(fā)酵液。對成綠肉座菌發(fā)酵液進行固液分離，得到成綠肉座菌菌體，對成綠肉座菌菌體進行烘干、粉碎和過篩：在45℃條件下烘干24h，烘干至成綠肉座菌菌體的水分含量為30％，粉碎過85目篩，得到成綠肉座菌。
實施例2
成綠肉座菌懸浮劑的制備：以重量份數(shù)計，將70份的油酸甲酯平均分成2份，將第1份的油酸甲酯進行剪切，再與8份實施例1制備的成綠肉座菌混合、剪切，再與3份硅酸鋁鎂混合、剪切，再與9份脂肪醇聚氧乙烯醚混合、剪切，再與5份聚醚磷酸酯類表面活性劑混合、剪切，再與第2份油酸甲酯混合、剪切，待所有原料全部混合、剪切完，再繼續(xù)剪切30min，得到剪切料，上述剪切的轉(zhuǎn)速均為12000rpm；將剪切料進行砂磨，得到4μm的砂磨料，將砂磨料攪拌20min后，得到成綠肉座菌懸浮劑。得到的成綠肉座菌懸浮劑的質(zhì)量控制指標(biāo)如表1所示。
表1 實施例2制備的成綠肉座菌懸浮劑的質(zhì)量控制指標(biāo)
實施例3
成綠肉座菌懸浮劑的制備：以重量份數(shù)計，將80份的油酸甲酯平均分成2份，將第1份的油酸甲酯進行剪切，再與12份實施例1制備的成綠肉座菌混合、剪切，再與4份硅酸鋁鎂混合、剪切，再與10份脂肪醇聚氧乙烯醚混合、剪切，再與6份聚醚磷酸酯類表面活性劑混合、剪切，再與第2份油酸甲酯混合、剪切，待所有原料全部混合、剪切完，再繼續(xù)剪切35min，得到剪切料，上述剪切的轉(zhuǎn)速均為18000rpm；將剪切料進行砂磨，得到5μm的砂磨料，將砂磨料攪拌30min后，得到成綠肉座菌懸浮劑。
實施例4
成綠肉座菌懸浮劑的制備：以重量份數(shù)計，將75份的油酸甲酯平均分成2份，將第1份的油酸甲酯進行剪切，再與5份實施例1制備的成綠肉座菌混合、剪切，再與3份硅酸鋁鎂混合、剪切，再與9份脂肪醇聚氧乙烯醚混合、剪切，再與5份聚醚磷酸酯類表面活性劑混合、剪切，再與第2份油酸甲酯混合、剪切，待所有原料全部混合、剪切完，再繼續(xù)剪切40min，得到剪切料，上述剪切的轉(zhuǎn)速均為12000rpm；將剪切料進行砂磨，得到6μm的砂磨料，將砂磨料攪拌25min后，得到成綠肉座菌懸浮劑。
實施例5
藥效試驗：本次試驗在江西省進行，防治品種為黃瓜，管理良好，白粉病中等偏重。本次試驗將實驗田均分為四個區(qū)域，區(qū)域1為對照組，只順壟噴施清水；區(qū)域2順壟噴施實施例3中制備的成綠肉座菌懸浮劑1000倍稀釋液；區(qū)域3順壟噴施成綠肉座菌可濕性粉劑1000倍稀釋液，藥物活性組分的濃度與區(qū)域2相同；區(qū)域4順壟噴施成綠肉座菌水懸浮劑1000倍稀釋液，藥物活性組分的濃度與區(qū)域2和3相同；四個區(qū)域的用藥量相同，每7天噴施一次，共噴施4次，施藥后調(diào)查黃瓜白粉病防治情況。具體結(jié)果如表2所示，由表2的數(shù)據(jù)可以得出，區(qū)域2的黃瓜白粉病防治效果最高，其藥效均高于同濃度的可濕性粉劑和水懸浮劑。
表2 成綠肉座菌懸浮劑的防治效果
由以上實施例可知，本發(fā)明制備的成綠肉座菌懸浮劑穩(wěn)定性高，活菌數(shù)高，防治效果高達89.5％，其藥效均高于同濃度的可濕性粉劑和水懸浮劑。
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。