本發(fā)明屬于植物無性繁殖技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種杏葉柯組織培養(yǎng)外植體獲取方法。

背景技術(shù)：

杏葉柯（Lithocarpus amygdalifolius (Skan) Hayata）又名杏葉石櫟、紅椆、嶺梅，系殼斗科（Fagaceae）柯屬（Lithocarpus）喬木，春夏季抽出的新枝及嫩葉背面密被黃棕色卷柔毛，秋后毛全部脫落。雄穗狀花序單穗腋生或多穗排成圓錐花序，花序軸密被柔毛；雌花每3朵一簇，有時(shí)兼有單朵散生。殼斗近圓球形，全包堅(jiān)果，呈不連續(xù)的環(huán)狀；堅(jiān)果的果壁比殼斗壁稍厚，堅(jiān)果頂部被微柔毛。分布于臺(tái)灣中部及南部、福建南部、廣東東南部約北回歸線以南地區(qū)、海南。生于海拔1 100-2 300米常綠闊葉林或針葉、闊葉混交林中，常為上層樹種。

目前，杏葉柯資源仍處于野生分布狀態(tài)，但隨著保持植物多樣性的需求，規(guī)模化人工栽培杏葉柯資源勢(shì)在必行。目前雖然杏葉柯已成功利用組培快繁技術(shù)對(duì)選育出的優(yōu)良家系進(jìn)行了育苗并造林，但是在組織培養(yǎng)過程中，外植體材料通常使用大樹穗條和基部萌芽等。但是大樹多數(shù)位于偏遠(yuǎn)林區(qū)，采摘不便、萌芽難、數(shù)量少且難以滅菌，因此大樹萌條難以滿足實(shí)際生產(chǎn)育苗需求。而離體胚、無菌實(shí)生苗、子葉和針葉等作為外植體材料，獲取不定芽的速度和數(shù)量不及莖段快和多，難以成為組織培養(yǎng)的常用材料。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種采摘方便，質(zhì)量好，數(shù)量多，滅菌易，可滿足杏葉柯組織培養(yǎng)快速繁殖體系建立需要的杏葉柯組織培養(yǎng)外植體獲取方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種杏葉柯組織培養(yǎng)外植體獲取方法，主要操作步驟如下：

（1）選種與播種：選取無病蟲害、顆粒飽滿的杏葉柯優(yōu)良家系種子經(jīng)催芽處理后播種；

（2）芽苗移植與管理：芽苗出土后移植到規(guī)格為15cm×15cm無紡布育苗袋內(nèi)，視情況淋水、噴藥、施肥；

（3）母株種植與管理：當(dāng)步驟（2）移植苗木生根穩(wěn)定后，移栽到規(guī)格為30cm×30cm容器杯內(nèi)，搭建蔭棚，挑選壯苗作母株移植到裝有基質(zhì)的容器杯中進(jìn)行母株種植，定時(shí)追肥，加強(qiáng)病蟲害防治；

（4）外植體獲?。杭羧∶妊織l，修剪針葉，進(jìn)行消毒接種。

以上所述的播種方法是指將經(jīng)常規(guī)消毒和熱水浸泡后的種子置于100～140℃的烘箱中烘干，自然冷卻到室溫后將種子播種于采用體積濃度0.3%的高錳酸鉀溶液消毒過的沙床上。

以上所述的芽苗移植與管理方法是當(dāng)芽苗高6～8 cm時(shí)移植到無紡布育苗袋內(nèi)，每隔7～10天施一次質(zhì)量濃度0.5%復(fù)合肥溶液，40天后芽苗生根穩(wěn)定。

以上步驟（3）選取苗高40～60 cm，地徑0.3～0.6 cm，主干通直，側(cè)枝少的容器苗作為母株。

以上步驟（3）所述的基質(zhì)的組分和重量比是：黃心土∶椰糠∶珍珠巖∶草木灰為5∶2∶2∶1。

以上所述的母株管理方法是用遮陰度為40～60%的遮陰網(wǎng)搭建高1.8～2.5 m的蔭棚，每隔7～15天施肥一次體積濃度為0.5～1%復(fù)合肥溶液，每20天向葉面噴施一次質(zhì)量濃度為0.2%～0.5％的磷酸二氫鉀溶液；當(dāng)母株種植30天后，于距離地面30 cm處截?cái)嘀鞲伞?/p>

以上所述的外植體獲取方法是剪取長6～9cm，直徑0.2～0.4 cm的萌芽條，用體積濃度75%的酒精溶液對(duì)萌芽條進(jìn)行噴霧消毒后，于萌芽條頂部0.5～1.0 cm處剪除頂芽，余下部分由上至下修剪成3.0～4.0 cm長的莖段作為外植體，每根萌芽條取1～2個(gè)莖段。

以上所述的復(fù)合肥溶液中的NPK的有效成分≥48%。

對(duì)比于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有的優(yōu)點(diǎn)及有益效果如下：

1、本發(fā)明是在苗圃里進(jìn)行母株種植，方便母株管理和萌條采集；在母株選擇時(shí)已經(jīng)過優(yōu)良種源和優(yōu)良?jí)衙绲膬奢嗊x擇，能很好的保證了所獲取的外植體的優(yōu)良品質(zhì)，并且在管理下，萌條可以不斷萌發(fā)，生長快，可滿足規(guī)模化生產(chǎn)的需要。

2、本發(fā)明及時(shí)對(duì)母株進(jìn)行截干促萌，既保證了有足夠的萌芽生長空間，又更好的保持了營養(yǎng)的均衡；選取適合的萌芽條作為外植體材料，其木質(zhì)化程度和生理老化程度可較好的滿足了組培需要。

4、本發(fā)明根據(jù)杏葉柯的生理特性配制的母株基質(zhì)，材料易得，營養(yǎng)均衡，減少了生產(chǎn)成本，提高了母株的成活率。

5、本發(fā)明在消毒萌芽條后，于其頂部剪除頂芽，可除掉受消毒液傷害的幼嫩頂芽，保證了外植體接種后的成活率；每根萌條從上往下剪取1-2個(gè)莖段，保證取莖段均具有較強(qiáng)的再生能力，保證了不定芽誘導(dǎo)過程中不定芽集中萌發(fā)，萌芽整齊。

6、本發(fā)明的母株管理和萌條采集都十分方便，所獲得的外植體品質(zhì)優(yōu)良，污染率、死亡率低，不定芽萌發(fā)率高，萌芽整齊，可操作性強(qiáng)，滿足了杏葉柯組織培養(yǎng)快速繁殖體系建立的需求，具有較強(qiáng)的經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益和生態(tài)效益。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。

實(shí)施例1：

選取無病蟲害、顆粒飽滿的杏葉柯優(yōu)良家系種子，經(jīng)常規(guī)消毒和熱水浸泡后將種子置于100～140℃的烘箱中烘干，自然冷卻到室溫后將種子播種于采用體積濃度0.3%的高錳酸鉀溶液消毒過的沙床上。

芽苗出土后，當(dāng)芽苗高6～8 cm時(shí)移植到規(guī)格為15cm×15cm無紡布育苗袋內(nèi)，視情況淋水、噴藥，并每隔7～10天施一次質(zhì)量濃度0.5%復(fù)合肥溶液，其中復(fù)合肥溶液中的NPK的有效成分≥48%，40天后芽苗生根穩(wěn)定。

當(dāng)移植苗木生根穩(wěn)定后，選取苗高40～60 cm，地徑0.3～0.6 cm，主干通直，側(cè)枝少的容器苗作為母株，移栽到規(guī)格為30cm×30cm并裝有基質(zhì)的容器杯內(nèi)，所述的基質(zhì)的組分和重量比是：黃心土∶椰糠∶珍珠巖∶草木灰為5∶2∶2∶1。用遮陰度為40～60%的遮陰網(wǎng)搭建高1.8～2.5 m的蔭棚，每隔7～15天施肥一次體積濃度為0.5～1%復(fù)合肥溶液，復(fù)合肥溶液中的NPK的有效成分≥48%；每20天向葉面噴施一次質(zhì)量濃度為0.2～0.5％的磷酸二氫鉀溶液；當(dāng)母株種植30天后，于距離地面30 cm處截?cái)嘀鞲伞?/p>

剪取長6～9cm，直徑0.2～0.4 cm的萌芽條，用體積濃度75%的酒精溶液對(duì)萌芽條進(jìn)行噴霧消毒后，于萌芽條頂部0.5～1.0 cm處剪除頂芽，余下部分由上至下修剪成3.0～4.0 cm長的莖段作為外植體，每根萌芽條取1～2個(gè)莖段。

實(shí)施例2：

選取無病蟲害、顆粒飽滿的杏葉柯優(yōu)良家系種子，經(jīng)常規(guī)消毒和熱水浸泡后將種子置于110℃的烘箱中烘干，自然冷卻到室溫后將種子播種于采用體積濃度0.3%的高錳酸鉀溶液消毒過的沙床上。

芽苗出土后，當(dāng)芽苗高6～8 cm時(shí)移植到規(guī)格為15cm×15cm無紡布育苗袋內(nèi)，視情況淋水、噴藥，并每隔8天施一次質(zhì)量濃度0.5%復(fù)合肥溶液，其中復(fù)合肥溶液中的NPK的有效成分≥48%，40天后芽苗生根穩(wěn)定。

當(dāng)移植苗木生根穩(wěn)定后，選取苗高45～50 cm，地徑0.3～0.4 cm，主干通直，側(cè)枝少的容器苗作為母株，移栽到規(guī)格為30cm×30cm并裝有基質(zhì)的容器杯內(nèi)，所述的基質(zhì)的組分和重量比是：黃心土∶椰糠∶珍珠巖∶草木灰為5∶2∶2∶1。用遮陰度為50%的遮陰網(wǎng)搭建高2.0 m的蔭棚，每隔8天施肥一次體積濃度為0.5%復(fù)合肥溶液，復(fù)合肥溶液中的NPK的有效成分≥48%；每20天向葉面噴施一次質(zhì)量濃度為0.2～0.3％的磷酸二氫鉀溶液；當(dāng)母株種植30天后，于距離地面30 cm處截?cái)嘀鞲伞?/p>

剪取長6～8cm，直徑0.2～0.3 cm的萌芽條，用體積濃度75%的酒精溶液對(duì)萌芽條進(jìn)行噴霧消毒后，于萌芽條頂部0.5 cm處剪除頂芽，余下部分由上至下修剪成3.0cm長的莖段作為外植體，每根萌芽條取1～2個(gè)莖段。

實(shí)施例3：

選取無病蟲害、顆粒飽滿的杏葉柯優(yōu)良家系種子，經(jīng)常規(guī)消毒和熱水浸泡后將種子置于120℃的烘箱中烘干，自然冷卻到室溫后將種子播種于采用體積濃度0.3%的高錳酸鉀溶液消毒過的沙床上。

芽苗出土后，當(dāng)芽苗高6～8 cm時(shí)移植到規(guī)格為15cm×15cm無紡布育苗袋內(nèi)，視情況淋水、噴藥，并每隔9天施一次質(zhì)量濃度0.5%復(fù)合肥溶液，其中復(fù)合肥溶液中的NPK的有效成分≥48%，40天后芽苗生根穩(wěn)定。

當(dāng)移植苗木生根穩(wěn)定后，選取苗高50～55 cm，地徑0.4～0.5 cm，主干通直，側(cè)枝少的容器苗作為母株，移栽到規(guī)格為30cm×30cm并裝有基質(zhì)的容器杯內(nèi)，所述的基質(zhì)的組分和重量比是：黃心土∶椰糠∶珍珠巖∶草木灰為5∶2∶2∶1。用遮陰度為40～60%的遮陰網(wǎng)搭建高2.2 m的蔭棚，每隔10天施肥一次體積濃度為1%復(fù)合肥溶液，復(fù)合肥溶液中的NPK的有效成分≥48%；每20天向葉面噴施一次質(zhì)量濃度為0.3～0.4％的磷酸二氫鉀溶液；當(dāng)母株種植30天后，于距離地面30 cm處截?cái)嘀鞲伞?/p>

剪取長7～8cm，直徑0.2～0.3cm的萌芽條，用體積濃度75%的酒精溶液對(duì)萌芽條進(jìn)行噴霧消毒后，于萌芽條頂部0.5～1.0 cm處剪除頂芽，余下部分由上至下修剪成3.0～4.0 cm長的莖段作為外植體，每根萌芽條取1～2個(gè)莖段。

實(shí)施例4：

選取無病蟲害、顆粒飽滿的杏葉柯優(yōu)良家系種子，經(jīng)常規(guī)消毒和熱水浸泡后將種子置于140℃的烘箱中烘干，自然冷卻到室溫后將種子播種于采用體積濃度0.3%的高錳酸鉀溶液消毒過的沙床上。

芽苗出土后，當(dāng)芽苗高6～8 cm時(shí)移植到規(guī)格為15cm×15cm無紡布育苗袋內(nèi)，視情況淋水、噴藥，并每隔10天施一次質(zhì)量濃度0.5%復(fù)合肥溶液，其中復(fù)合肥溶液中的NPK的有效成分≥48%，40天后芽苗生根穩(wěn)定。

當(dāng)移植苗木生根穩(wěn)定后，選取苗高55～60 cm，地徑0.5～0.6 cm，主干通直，側(cè)枝少的容器苗作為母株，移栽到規(guī)格為30cm×30cm并裝有基質(zhì)的容器杯內(nèi)，所述的基質(zhì)的組分和重量比是：黃心土∶椰糠∶珍珠巖∶草木灰為5∶2∶2∶1。用遮陰度為60%的遮陰網(wǎng)搭建高2.5 m的蔭棚，每隔15天施肥一次體積濃度為1%復(fù)合肥溶液，復(fù)合肥溶液中的NPK的有效成分≥48%；每20天向葉面噴施一次質(zhì)量濃度為0.4～0.5％的磷酸二氫鉀溶液；當(dāng)母株種植30天后，于距離地面30 cm處截?cái)嘀鞲伞?/p>

剪取長8～9cm，直徑0.3～0.4 cm的萌芽條，用體積濃度75%的酒精溶液對(duì)萌芽條進(jìn)行噴霧消毒后，于萌芽條頂部0.5～1.0 cm處剪除頂芽，余下部分由上至下修剪成4.0 cm長的莖段作為外植體，每根萌芽條取1～2個(gè)莖段。