本發(fā)明屬于脂肪細胞保存的
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種脂肪細胞保護液及其制備方法。
背景技術(shù)：
：近年來，細胞技術(shù)被廣泛用于多種疾病的臨床試驗及治療中，并且表現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景，逐漸成為近年來新的醫(yī)學(xué)研究熱點之一。脂肪細胞能夠在體外穩(wěn)定增殖且衰亡率低，具有取材容易、不限年齡及時間、少量組織即可獲取大量細胞、適宜大規(guī)模培養(yǎng)、對機體損傷小等優(yōu)點，而且脂肪來源廣泛，體內(nèi)儲備量大，適宜自體移植，因此研究一種有效的脂肪細胞的保存方法，使具有臨床應(yīng)用價值的脂肪細胞可以在體外長期保存并保持細胞活性，顯得尤為重要。目前常用的脂肪細胞保存技術(shù)一般是采用生理鹽水或者細胞培養(yǎng)基作為脂肪細胞的保存介質(zhì)，如果單純用生理鹽水保存脂肪細胞，由于脂肪干細胞在生理鹽水中活力下降的速度非?？?，兩小時后脂肪細胞活力就會降低10％左右，因此生理鹽水只適用于脂肪細胞即時使用的情況；而細胞培養(yǎng)基中含有脂肪細胞生長代謝所需的糖類、氨基酸、無機鹽、維生素等物質(zhì)，對于維持脂肪細胞滲透壓及活力有較好的作用，可以在較長時間內(nèi)保持脂肪細胞活性，但如果單獨使用細菌培養(yǎng)基來保存脂肪細胞，其安全性及可靠性還不夠理想。現(xiàn)有技術(shù)中也公開了許多細胞保存液，例如cn201510060953.1公布了一種保護劑組合物，由一種或多種細胞保護劑、抑制劑、螯合穩(wěn)定劑、酸堿緩沖液組成；cn201510724842.6公布了一種脂肪間充質(zhì)干細胞的凍存保護液，由dmso、脂肪間充質(zhì)干細胞條件培養(yǎng)基和胎牛血清組成?，F(xiàn)有技術(shù)中公開的細胞保護液一般都存在細胞存活率較低、安全性較差、使用條件較為苛刻等問題，在臨床應(yīng)用上存在一定困難。技術(shù)實現(xiàn)要素：為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種脂肪細胞保護液，所述保護液主要是將低氧保護劑、維生素c和氨基糖苷類抗生素用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑5-10mg、所述維生素c10-50μg、所述氨基糖苷類抗生素50-200u，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為30-40mg/ml。dmem/f12培養(yǎng)基由dmem培養(yǎng)基和f12培養(yǎng)基按照重量份數(shù)為1:1的比例結(jié)合，其成分豐富、營養(yǎng)濃度高、含有多種微量元素，可作為無血清或血清含量較低條件下的哺乳動物細胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。每升dmem/f12培養(yǎng)基中含有下列成分：在濃度為30-40mg/ml的dmem/f12培養(yǎng)基水溶液中加入低氧保護劑、維生素c和氨基糖苷類抗生素，制得的脂肪細胞保護液可以長時間保持脂肪干細胞活性，提高脂肪干細胞存活率。進一步的，所述氨基糖苷類抗生素由慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素中的一種或多種組成。優(yōu)選的，所述氨基糖苷類抗生素由慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素按照2:2:1的重量份數(shù)比組成，比單用一種氨基糖苷類抗生素、采用其他幾種氨基糖苷類抗生素或采用其它重量配比的抗細菌效果更好。進一步的，所述保護液中還含有苯扎氯銨和甲酸鈣，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述苯扎氯銨50-100μg、所述甲酸鈣50-100μg。在保護液中加入苯扎氯銨和甲酸鈣起到防止脂肪細胞保護液中產(chǎn)生真菌和病毒感染作用，保障所保存的脂肪細胞的質(zhì)量安全，可應(yīng)用于人體疾病的治療。進一步的，所述低氧保護劑包括如下重量份數(shù)的各成分：大花紫薇葉提取物2-5酢漿草提取物2-5氧化苦參堿1-2。在脂肪細胞保護液中采用大花紫薇葉提取物、酢漿草提取物和氧化苦參堿作為低氧保護劑可以顯著降低脂肪干細胞內(nèi)活性氧水平，調(diào)節(jié)脂肪干細胞抗氧化能力、減少低氧引起的脂肪干細胞凋亡，有效提高低氧條件下的脂肪干細胞存活率。進一步的，所述低氧保護劑還包括如下重量份數(shù)的各成分：麥角硫因2-5二丁基羥基甲苯1-3。在低氧保護劑中加入麥角硫因和二丁基羥基甲苯與大花紫薇葉提取物、酢漿草提取物和氧化苦參堿配合使用，可以使低氧條件下的脂肪干細胞存活率的更高。進一步的，所述保護液中還含有透明質(zhì)酸、甲殼質(zhì)和硫酸乙酰肝素，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述透明質(zhì)酸10-20mg、所述甲殼質(zhì)1-5mg、所述硫酸乙酰肝素1-5mg。在保護液中加入透明質(zhì)酸、甲殼質(zhì)和硫酸乙酰肝素，可以有效提高脂肪干細胞存活率。進一步的，所述保護液中還含有海藻糖、羥丙基環(huán)糊精和海藻酸鈉，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述海藻糖1-5mg、所述羥丙基環(huán)糊精10-50μg、所述海藻酸鈉10-50μg。在保護液中加入海藻糖、羥丙基環(huán)糊精和海藻酸鈉，可以起到提高脂肪干細胞增殖速度的效果。進一步的，所述保護液中還含有葡聚糖、羥丙甲基纖維素和月桂酸單甘油酯，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述葡聚糖3-5mg、所述羥丙甲基纖維素3-5mg、所述月桂酸單甘油酯50-100μg。在保護液中加入葡聚糖、羥丙甲基纖維素和月桂酸單甘油酯，可以有效改善脂肪細胞保護液的穩(wěn)定性，延長脂肪細胞保護液的保質(zhì)期。本發(fā)明還提供一種脂肪細胞保護液的制備方法，包括：(1)向dmem/f12培養(yǎng)基水溶液中加入nahco3，直至dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的ph值為6-6.5；(2)將除維生素c以外的其他原料加入步驟(1)得到的dmem/f12培養(yǎng)基水溶液中，再將所得混合液升溫至80-100℃，攪拌至溶解均勻；(3)將步驟(2)得到的混合液降溫至20-30℃，加入維生素c，攪拌至溶解均勻；(4)將步驟(3)得到的混合液用細菌過濾器過濾，然后冰水浴中降溫至0-10℃即可獲得脂肪細胞保護液。進一步的，所述步驟(2)在壓強為0.16-0.2mpa的條件下進行。在增壓條件下進行攪拌操作，可以提高攪拌的效果，使脂肪細胞保護液中的各種原料充分混合均勻。本發(fā)明提供的脂肪細胞保護液性能穩(wěn)定，可以較長時間地保存脂肪細胞，起到有效保持脂肪干細胞活性、保護脂肪干細胞的作用，并能提高脂肪干細胞的增殖能力，可以滿足將脂肪細胞運輸?shù)絿鴥?nèi)大多數(shù)地區(qū)及周邊國家的要求，并且安全無毒，可以直接應(yīng)用于人體。附圖說明圖1為本發(fā)明實施例4、實施例19、對照例13和對照例14的脂肪干細胞生長曲線圖。具體實施方式實施例1一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑、維生素c和慶大霉素用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑8mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素100u，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。實施例2一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑、維生素c和慶大霉素用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑5mg、所述維生素c10μg、所述慶大霉素50u，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為30mg/ml。實施例3一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑、維生素c和慶大霉素用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑10mg、所述維生素c50μg、所述慶大霉素200u，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為40mg/ml。實施例4一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑8mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。實施例5一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑5mg、所述維生素c10μg、所述慶大霉素20u、所述卡那霉素20u、所述鏈霉素10u，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為30mg/ml；所述脂肪細胞保護液的制備方法包括：(1)向dmem/f12培養(yǎng)基水溶液中加入nahco3，直至dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的ph值為6；(2)將除維生素c以外的其他原料加入步驟(1)得到的dmem/f12培養(yǎng)基水溶液中，再將所得混合液升溫至80℃，攪拌至溶解均勻；(3)將步驟(2)得到的混合液降溫至20℃，加入維生素c，攪拌至溶解均勻；(4)將步驟(3)得到的混合液用細菌過濾器過濾，然后冰水浴中降溫至0℃即可獲得脂肪細胞保護液。實施例6一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑10mg、所述維生素c50μg、所述慶大霉素80u、所述卡那霉素80u、所述鏈霉素40u，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為40mg/ml。實施例7一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、苯扎氯銨、甲酸鈣用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑8mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述苯扎氯銨75μg、所述甲酸鈣75μg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。實施例8一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、苯扎氯銨、甲酸鈣用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑8mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述苯扎氯銨50μg、所述甲酸鈣50μg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml；所述脂肪細胞保護液的制備方法包括：(1)向dmem/f12培養(yǎng)基水溶液中加入nahco3，直至dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的ph值為6.5；(2)將除維生素c以外的其他原料加入步驟(1)得到的dmem/f12培養(yǎng)基水溶液中，再將所得混合液升溫至100℃，攪拌至溶解均勻；(3)將步驟(2)得到的混合液降溫至30℃，加入維生素c，攪拌至溶解均勻；(4)將步驟(3)得到的混合液用細菌過濾器過濾，然后冰水浴中降溫至10℃即可獲得脂肪細胞保護液。實施例9一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、苯扎氯銨、甲酸鈣用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑8mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述苯扎氯銨100μg、所述甲酸鈣100μg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。實施例10一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將大花紫薇葉提取物、酢漿草提取物、氧化苦參堿、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述大花紫薇葉提取物3.5mg、所述酢漿草提取物3mg、所述氧化苦參堿1.5mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。實施例11一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將大花紫薇葉提取物、酢漿草提取物、氧化苦參堿、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、苯扎氯銨、甲酸鈣用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述大花紫薇葉提取物3.2mg、所述酢漿草提取物3.2mg、所述氧化苦參堿1.6mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述苯扎氯銨75μg、所述甲酸鈣75μg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml；所述脂肪細胞保護液的制備方法包括：(1)向dmem/f12培養(yǎng)基水溶液中加入nahco3，直至dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的ph值為6.3；(2)將除維生素c以外的其他原料加入步驟(1)得到的dmem/f12培養(yǎng)基水溶液中，再將所得混合液升溫至90℃，攪拌至溶解均勻；(3)將步驟(2)得到的混合液降溫至23℃，加入維生素c，攪拌至溶解均勻；(4)將步驟(3)得到的混合液用細菌過濾器過濾，然后冰水浴中降溫至4℃即可獲得脂肪細胞保護液。實施例12一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將大花紫薇葉提取物、酢漿草提取物、氧化苦參堿、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、苯扎氯銨、甲酸鈣用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述大花紫薇葉提取物3.33mg、所述酢漿草提取物3.33mg、所述氧化苦參堿1.34mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述苯扎氯銨75μg、所述甲酸鈣75μg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。實施例13一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將大花紫薇葉提取物、酢漿草提取物、氧化苦參堿、麥角硫因、二丁基羥基甲苯、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述大花紫薇葉提取物2mg、所述酢漿草提取物2mg、所述氧化苦參堿1mg、所述麥角硫因2mg、所述二丁基羥基甲苯1mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。實施例14一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將大花紫薇葉提取物、酢漿草提取物、氧化苦參堿、麥角硫因、二丁基羥基甲苯、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、苯扎氯銨、甲酸鈣用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述大花紫薇葉提取物1.8mg、所述酢漿草提取物1.8mg、所述氧化苦參堿1mg、所述麥角硫因2.2mg、所述二丁基羥基甲苯1.2mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述苯扎氯銨75μg、所述甲酸鈣75μg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml；所述脂肪細胞保護液的制備方法包括：(1)向dmem/f12培養(yǎng)基水溶液中加入nahco3，直至dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的ph值為6.3；(2)將除維生素c以外的其他原料加入步驟(1)得到的dmem/f12培養(yǎng)基水溶液中，再將所得混合液升溫至90℃，在壓強為0.2mpa下攪拌至溶解均勻；(3)將步驟(2)得到的混合液降溫至23℃，加入維生素c，攪拌至溶解均勻；(4)將步驟(3)得到的混合液用細菌過濾器過濾，然后冰水浴中降溫至4℃即可獲得脂肪細胞保護液。實施例15一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將大花紫薇葉提取物、酢漿草提取物、氧化苦參堿、麥角硫因、二丁基羥基甲苯、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、苯扎氯銨、甲酸鈣用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述大花紫薇葉提取物2mg、所述酢漿草提取物2mg、所述氧化苦參堿0.8mg、所述麥角硫因2mg、所述二丁基羥基甲苯1.2mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述苯扎氯銨75μg、所述甲酸鈣75μg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。實施例16一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、透明質(zhì)酸、甲殼質(zhì)、硫酸乙酰肝素用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑8mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述透明質(zhì)酸15mg、所述甲殼質(zhì)2mg、所述硫酸乙酰肝素2mg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。實施例17一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將大花紫薇葉提取物、酢漿草提取物、氧化苦參堿、麥角硫因、二丁基羥基甲苯、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、苯扎氯銨、甲酸鈣、透明質(zhì)酸、甲殼質(zhì)、硫酸乙酰肝素用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述大花紫薇葉提取物2mg、所述酢漿草提取物2mg、所述氧化苦參堿1mg、所述麥角硫因2mg、所述二丁基羥基甲苯1mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述苯扎氯銨75μg、所述甲酸鈣75μg、所述透明質(zhì)酸10mg、所述甲殼質(zhì)1mg、所述硫酸乙酰肝素1mg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml；所述脂肪細胞保護液的制備方法包括：(1)向dmem/f12培養(yǎng)基水溶液中加入nahco3，直至dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的ph值為6.3；(2)將除維生素c以外的其他原料加入步驟(1)得到的dmem/f12培養(yǎng)基水溶液中，再將所得混合液升溫至90℃，在壓強為0.18mpa下攪拌至溶解均勻；(3)將步驟(2)得到的混合液降溫至23℃，加入維生素c，攪拌至溶解均勻；(4)將步驟(3)得到的混合液用細菌過濾器過濾，然后冰水浴中降溫至4℃即可獲得脂肪細胞保護液。實施例18一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將大花紫薇葉提取物、酢漿草提取物、氧化苦參堿、麥角硫因、二丁基羥基甲苯、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、苯扎氯銨、甲酸鈣、透明質(zhì)酸、甲殼質(zhì)、硫酸乙酰肝素用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述大花紫薇葉提取物2mg、所述酢漿草提取物2mg、所述氧化苦參堿1mg、所述麥角硫因2mg、所述二丁基羥基甲苯1mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述苯扎氯銨75μg、所述甲酸鈣75μg、所述透明質(zhì)酸20mg、所述甲殼質(zhì)5mg、所述硫酸乙酰肝素5mg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。實施例19一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、海藻糖、羥丙基環(huán)糊精、海藻酸鈉用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑8mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述海藻糖2mg、所述羥丙基環(huán)糊精30μg、所述海藻酸鈉30μg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。實施例20一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將大花紫薇葉提取物、酢漿草提取物、氧化苦參堿、麥角硫因、二丁基羥基甲苯、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、苯扎氯銨、甲酸鈣、透明質(zhì)酸、甲殼質(zhì)、硫酸乙酰肝素、海藻糖、羥丙基環(huán)糊精、海藻酸鈉用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述大花紫薇葉提取物2mg、所述酢漿草提取物2mg、所述氧化苦參堿1mg、所述麥角硫因2mg、所述二丁基羥基甲苯1mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述苯扎氯銨75μg、所述甲酸鈣75μg、所述透明質(zhì)酸15mg、所述甲殼質(zhì)2mg、所述硫酸乙酰肝素2mg、所述海藻糖1mg、所述羥丙基環(huán)糊精10μg、所述海藻酸鈉10μg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。實施例21一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將大花紫薇葉提取物、酢漿草提取物、氧化苦參堿、麥角硫因、二丁基羥基甲苯、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、苯扎氯銨、甲酸鈣、透明質(zhì)酸、甲殼質(zhì)、硫酸乙酰肝素、海藻糖、羥丙基環(huán)糊精、海藻酸鈉用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述大花紫薇葉提取物2mg、所述酢漿草提取物2mg、所述氧化苦參堿1mg、所述麥角硫因2mg、所述二丁基羥基甲苯1mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述苯扎氯銨75μg、所述甲酸鈣75μg、所述透明質(zhì)酸15mg、所述甲殼質(zhì)2mg、所述硫酸乙酰肝素2mg、所述海藻糖5mg、所述羥丙基環(huán)糊精50μg、所述海藻酸鈉50μg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。實施例22一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、葡聚糖、羥丙甲基纖維素、月桂酸單甘油酯用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑8mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述葡聚糖4mg、所述羥丙甲基纖維素4mg、所述月桂酸單甘油酯75μg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。實施例23一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將大花紫薇葉提取物、酢漿草提取物、氧化苦參堿、麥角硫因、二丁基羥基甲苯、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、苯扎氯銨、甲酸鈣、透明質(zhì)酸、甲殼質(zhì)、硫酸乙酰肝素、海藻糖、羥丙基環(huán)糊精、海藻酸鈉、葡聚糖、羥丙甲基纖維素、月桂酸單甘油酯用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述大花紫薇葉提取物2mg、所述酢漿草提取物2mg、所述氧化苦參堿1mg、所述麥角硫因2mg、所述二丁基羥基甲苯1mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述苯扎氯銨75μg、所述甲酸鈣75μg、所述透明質(zhì)酸15mg、所述甲殼質(zhì)2mg、所述硫酸乙酰肝素2mg、所述海藻糖2mg、所述羥丙基環(huán)糊精30μg、所述海藻酸鈉30μg、所述葡聚糖3mg、所述羥丙甲基纖維素3mg、所述月桂酸單甘油酯50μg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。實施例24一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將大花紫薇葉提取物、酢漿草提取物、氧化苦參堿、麥角硫因、二丁基羥基甲苯、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、苯扎氯銨、甲酸鈣、透明質(zhì)酸、甲殼質(zhì)、硫酸乙酰肝素、海藻糖、羥丙基環(huán)糊精、海藻酸鈉、葡聚糖、羥丙甲基纖維素、月桂酸單甘油酯用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述大花紫薇葉提取物2mg、所述酢漿草提取物2mg、所述氧化苦參堿1mg、所述麥角硫因2mg、所述二丁基羥基甲苯1mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述苯扎氯銨75μg、所述甲酸鈣75μg、所述透明質(zhì)酸15mg、所述甲殼質(zhì)2mg、所述硫酸乙酰肝素2mg、所述海藻糖2mg、所述羥丙基環(huán)糊精30μg、所述海藻酸鈉30μg、所述葡聚糖5mg、所述羥丙甲基纖維素5mg、所述月桂酸單甘油酯100μg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。對照例1一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑和慶大霉素用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑8mg、所述慶大霉素100u，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。對照例2一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑、胱氨酸和慶大霉素用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑8mg、所述胱氨酸20μg、所述慶大霉素100u，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。對照例3一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑、維生素c、青霉素用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑8mg、所述維生素c20μg、所述青霉素100u，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。對照例4一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑8mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素20u、所述卡那霉素60u、所述鏈霉素20u，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。對照例5一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、苯扎氯銨用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑8mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述苯扎氯銨75μg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。對照例6一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、苯扎氯銨、硫酸鉀用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑8mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述苯扎氯銨75μg、所述硫酸鉀75μg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。對照例7一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。對照例8一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將板藍根提取物、酢漿草提取物、氧化苦參堿、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述板藍根提取物3.5mg、所述酢漿草提取物3mg、所述氧化苦參堿1.5mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。對照例9一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將大花紫薇葉提取物、酢漿草提取物、氧化苦參堿、麥角硫因、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述大花紫薇葉提取物2mg、所述酢漿草提取物2mg、所述氧化苦參堿1mg、所述麥角硫因3mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。對照例10一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將大花紫薇葉提取物、酢漿草提取物、氧化苦參堿、麥角硫因、抗壞血酸鈉、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述大花紫薇葉提取物2mg、所述酢漿草提取物2mg、所述氧化苦參堿1mg、所述麥角硫因2mg、所述抗壞血酸鈉1mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。對照例11一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、透明質(zhì)酸、硫酸乙酰肝素用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑8mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述透明質(zhì)酸15mg、所述硫酸乙酰肝素2mg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。對照例12一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、透明質(zhì)酸、肝素、硫酸乙酰肝素用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑8mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述透明質(zhì)酸15mg、所述肝素2mg、所述硫酸乙酰肝素2mg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。對照例13一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、海藻糖、海藻酸鈉用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑8mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述海藻糖2mg、所述海藻酸鈉30μg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。對照例14一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、海藻糖、羥丙基環(huán)糊精、維生素e用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑8mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述海藻糖2mg、所述羥丙基環(huán)糊精30μg、所述維生素e30μg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。對照例15一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、葡聚糖、羥丙甲基纖維素用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑8mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述葡聚糖4mg、所述羥丙甲基纖維素4mg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。對照例16一種脂肪細胞保護液，該保護液主要是將低氧保護劑、維生素c、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、葡聚糖、海藻酸銨、月桂酸單甘油酯用dmem/f12培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述低氧保護劑8mg、所述維生素c20μg、所述慶大霉素40u、所述卡那霉素40u、所述鏈霉素20u、所述葡聚糖4mg、所述海藻酸銨4mg、所述月桂酸單甘油酯75μg，所述dmem/f12培養(yǎng)基水溶液的濃度為37.5mg/ml。脂肪細胞保護液安全性分析：取實施例1、實施例4、實施例7、對照例3-6的脂肪細胞保護液，均在溫度40℃±2℃下，相對濕度為75％±5％的條件下放置12個月，在試驗期間1個月、3個月、6個月、9個月、12個月末分別取樣一次，檢測脂肪細胞保護液中細菌、真菌和病毒的感染情況，檢驗結(jié)果見表1。表1脂肪細胞保護液安全性分析其中：“-”表示“沒有”，“√”表示“有”。比較實施例4與實施例1、對照例3-4的脂肪細胞保護液的細菌感染狀況可知，在脂肪細胞保護液中添加重量份數(shù)為2:2:1的比慶大霉素、卡那霉素和鏈霉素可以有效提高脂肪細胞保護液防止細菌感染的能力，減少抗生素、變化抗生素、或調(diào)整抗生素的重量份數(shù)比，都會導(dǎo)致脂肪細胞保護液抗細菌感染的能力減弱。比較實施例7與實施例4、對照例5-6的脂肪細胞保護液的真菌和病毒感染狀況可知，在脂肪細胞保護液中添加苯扎氯銨和甲酸鈣可以有效防止脂肪細胞保護液感染真菌和病毒，減少其中一個成分，或變化其中一個成分，脂肪細胞保護液防止真菌和病毒感染的效果會減弱。低氧保護劑對脂肪干細胞在低氧條件下的存活率的影響分析：將相同數(shù)量的脂肪干細胞分別放入實施例10、實施例13以及對照例7-10的脂肪細胞保護液中，置于滅菌的西林瓶中，在4℃的低氧培養(yǎng)箱(1％的o2、5％的co2和94％的n2)中保存24小時后用臺盼蘭染色計數(shù)脂肪干細胞存活率，結(jié)果見表2。表2低氧條件下的細胞存活率實施例10實施例13對照例7對照例8對照例9對照例10細胞成活率(％)85.394.451.870.387.285.7由上述結(jié)果可知：選用大花紫薇葉提取物、酢漿草提取物和氧化苦參堿作為低氧保護劑可以提高低氧條件下脂肪干細胞的存活率；加入麥角硫因和二丁基羥基甲苯與大花紫薇葉提取物、酢漿草提取物和氧化苦參堿一起用作低氧保護劑，對于提高低氧條件下的脂肪干細胞存活率效果更佳。脂肪細胞保護液對脂肪干細胞存活率的影響分析：設(shè)置試驗1-4和對比試驗1-6，將相同數(shù)量的脂肪干細胞分別放入不同的細胞保護液中，置于滅菌的西林瓶中，在4℃下保存240小時，期間分別于第12h、24h、48h、96h、240h時觀察脂肪干細胞形態(tài)，并用臺盼蘭染色計數(shù)脂肪干細胞存活率。其中試驗1-4分別采用實施例1、實施例4、實施例16、實施例18的脂肪細胞保護液作為脂肪干細胞的保護液；對比試驗1采用生理鹽水作為脂肪干細胞的保護液；對比試驗2采用dmem/f12培養(yǎng)基作為脂肪干細胞的保護液，對比試驗5-6采用對照例1、對照例2、對照例11、對照例12的脂肪細胞保護液作為脂肪干細胞的保護液，試驗結(jié)果見表3。表3不同種類細胞保護液對脂肪干細胞存活率的影響其中：a表示細胞分散度好、大小均勻、形態(tài)不變、輪廓清晰；b表示細胞體積變大、大小不等、輪廓模糊、出現(xiàn)橢圓或不規(guī)則等異常形態(tài)。上述試驗結(jié)果表明，試驗1-4與對比試驗1-4相比，其脂肪干細胞存活率明顯較高，且脂肪干細胞的形態(tài)也保持得更好，由此可知本發(fā)明提供的的脂肪細胞保護液可以有效保持脂肪干細胞活性、提高脂肪干細胞存活率。試驗3-4的脂肪干細胞存活率明顯高于試驗1-2和對比實驗5-6，說明在脂肪細胞保護液中加入透明質(zhì)酸、甲殼質(zhì)和硫酸乙酰肝素有利于提高脂肪干細胞存活率，減少其中一個成分，或變化其中一個成分，提高脂肪干細胞存活率的效果會變差。脂肪細胞保護液對脂肪干細胞增殖能力的影響分析分別采用實施例4、實施例19、對照例13和對照例14的脂肪細胞保護液保存脂肪干細胞1h，并將上述脂肪干細胞均以每cm2接種25個脂肪干細胞的標準在培養(yǎng)板上接種后培養(yǎng)7天，每天計算脂肪干細胞數(shù)量，繪制其生長曲線，其生長曲線如圖1所示。從圖1中可知，經(jīng)過實施例19的脂肪細胞保護液保存的脂肪干細胞的增殖速度明顯高于經(jīng)過實施例4、對照例13和對照例14的的脂肪細胞保護液保存的脂肪干細胞，上述結(jié)果表明在脂肪細胞保護液中添加海藻糖、羥丙基環(huán)糊精和海藻酸鈉可以有效提高脂肪干細胞的增殖速度，減少其中一個成分，或變化其中一個成分，提高脂肪干細胞的增殖速度的效果會減弱。脂肪細胞保護液穩(wěn)定性試驗分析取實施例4、實施例22、對照例15-16的脂肪細胞保護液，均在溫度40℃±2℃下，相對濕度為75％±5％的條件下放置12個月，在試驗期間1個月、3個月、6個月、9個月、12個月末分別取樣一次，檢測脂肪細胞保護液的性狀和色澤，試驗結(jié)果見表4。表4脂肪細胞保護液穩(wěn)定性試驗結(jié)果其中：“-”表示沒有，“√”表示有。比較實施例22與實施例4和對照例15-16的脂肪細胞保護液的穩(wěn)定性狀況可知，在脂肪細胞保護液中添加葡聚糖、羥丙甲基纖維素和月桂酸單甘油酯可以有效提高脂肪細胞保護液的穩(wěn)定性，避免脂肪細胞保護液產(chǎn)生沉淀、分層和變色等問題，減少其中一個成分，或變化其中一個成分，脂肪細胞保護液的穩(wěn)定性會減弱。最后應(yīng)說明的是，以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實施例對本發(fā)明進行了詳細說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。當(dāng)前第1頁12