1.高效育成黃鱔雄性四倍體純系的方法,包括如下步驟:
(1)他莫昔芬抑制劑配備:取純度為95%以上的他莫昔芬粉劑,加入90%的乙醇溶液進行溶解,制成母液,其中他莫昔芬含量約為100~120mg/ml,待用;
(2)他莫昔芬注射液的配制:取上述母液直接加入到已配制好的催產(chǎn)劑溶液中,其比例為1ml他莫昔芬母液加入到250~500ml的已配制好的催產(chǎn)劑溶液中,制成注射液待用;催產(chǎn)劑溶液是由絨毛膜促性腺激素、腦垂體經(jīng)過0.9%生理鹽水稀釋配制,催產(chǎn)劑溶液中絨毛膜促性腺激素的劑量為5-10 IU/g、腦垂體的劑量為0.1-0.2mg/g;
(3)注射處理母本:在母本人工產(chǎn)卵前,按常規(guī)人工催產(chǎn)方法對母本進行人工注射他莫昔芬注射液,其中他莫昔芬注射液的用量約為100~300μg/kg,即每kg母本注射100-300μg他莫昔芬注射液;
(4)冷休克+靜水壓處理:在一次卵裂時,采用冷休克與靜水壓相結(jié)合的方法,把經(jīng)過注射處理的母本與不經(jīng)過任何處理的父本雜交獲得的受精卵放入溫度為-1~1.0℃的冷水中,靜水壓壓力為250~340Kg/cm2,持續(xù)時間為3~5min;
(5)雌激素抑制劑溶液的配制:將氯米芬和睪酮一起溶于80%~90%的乙醇中,再加蒸餾水配制成雌激素抑制劑溶液,其中雌激素抑制劑溶液中氯米芬的濃度為150~350mg/l,睪酮的濃度為60~140mg/l;
(6)取步驟(4)處理后的受精卵放入按步驟(5)所制備的雌激素抑制劑溶液中,常溫浸泡10~30s,然后取出放于孵化器中正常孵化;從而獲得100%黃鱔雄性四倍體純系。