本發(fā)明涉及一種牛羊食道-咽部分泌物(o/p液)的保存液，還涉及該保存液的制備方法及其在保存牛羊食道-咽部分泌物中的用途。本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

口蹄疫是口蹄疫病毒引起的急性、熱性、高度接觸性傳染病，主要感染豬、牛、羊等偶蹄動物，對經(jīng)濟危害嚴(yán)重的動物傳染病。我國地域遼闊，地形多樣，與許多國家接壤，病原易感動物多而復(fù)雜，但病原持續(xù)性感染的研究相對滯后，食道探杯采集牛羊食道及咽部的上皮細(xì)胞及黏液是目前檢測口蹄疫病毒感染的最好方法，牛羊o/p液采集作為口蹄疫監(jiān)測的必檢項目。如何將采集的o/p液很好的保存，更好的保護好o/p液中的上皮細(xì)胞及活體病毒也是一項必要的工作。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種能夠有效保護采集的牛羊食道-咽部分泌物(o/p液)的保存液配方及其制備方法和用途。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)手段：

本發(fā)明的一種用于牛羊食道-咽部分泌物的保存液，其特征在于由ph值為6.8—7.6的磷酸鹽緩沖液，穩(wěn)定劑以及防腐劑組成；

其中，所述的磷酸鹽緩沖液中還含有氯化鈉及/或氯化鉀，氯化鈉或氯化鉀的濃度為0.2-10g/l，或氯化鈉以及氯化鉀的總濃度為0.2-10g/l；

其中，所述的穩(wěn)定劑選自質(zhì)量百分比濃度為8-10％的牛血清白蛋白溶液，質(zhì)量百分比濃度為0.8-1.2％的酪蛋白溶液、馬血清或甘油中的一種或多種，所述的穩(wěn)定劑的含量為50—100ml/l；

其中，所述的防腐劑選自疊氮鈉、盤尼西林、青霉素或氯霉素中的一種或多種，所述的防腐劑的含量為0.1—0.3g/l。

在本發(fā)明中，優(yōu)選的，所述的磷酸鹽緩沖液為ph7.4的0.1mol/l的磷酸鹽緩沖液。

在本發(fā)明中，優(yōu)選的，所述的磷酸鹽緩沖液為ph7.4的0.1mol/l的磷酸鹽緩沖液，所述的磷酸鹽緩沖液中還含有氯化鈉，氯化鈉的濃度為8.5g/l。

在本發(fā)明中，優(yōu)選的，所述的磷酸鹽緩沖液為ph7.4的0.1mol/l的磷酸鹽緩沖液，所述的磷酸鹽緩沖液中還含有氯化鈉和氯化鉀，氯化鈉的濃度為8.0g/l，氯化鉀的濃度為0.2g/l。

本發(fā)明專為保存牛羊口蹄疫查毒所采集的牛羊o/p液而提出，本發(fā)明保存液中緩沖鹽、穩(wěn)定劑與防腐劑為保存牛羊o/p液提供有力保障。本發(fā)明保護液保護的o/p液樣品應(yīng)在冰凍狀態(tài)下送到實驗室。研究表明，本發(fā)明能很好的解決o/p液的保存問題，有利于進一步的實驗室檢測。

因此，更進一步的，本發(fā)明還提出了所述的保存液在牛羊食道-咽部分泌物保存中的用途。

在本發(fā)明中，優(yōu)選的，將采集的牛羊食道-咽部分泌物與本發(fā)明所述的保存液按照體積比1：2混合。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例來進一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點和特點將會隨著描述而更為清楚。但這些實施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。

實施例1

1、用于牛羊食道-咽部分泌物的保存液的制備

(1)0.1mol/l磷酸鹽緩沖液(ph7.4)的制備

準(zhǔn)確稱取氯化鈉(nacl)85.00g、磷酸氫二鈉(na2hpo4)15.49g以及磷酸二氫鈉(nah2po4)2.03g，將上述組分溶解于一定量的蒸餾水中，用氫氧化鈉或鹽酸溶液調(diào)ph值為7.4，補加蒸餾水至10l，即得0.1mol/l磷酸鹽緩沖液(ph7.4)；

(2)向步驟(1)得到的磷酸鹽緩沖液的中加入甘油800ml以及疊氮化鈉2g，混合均勻，即為牛羊食道-咽部分泌物的保存液，0℃—4℃下保存。

2、保存液在牛羊食道-咽部分泌物保存中的用途

采樣時動物應(yīng)站立保定，將探杯隨吞咽動作送入食道上部10-15cm處，輕輕來回抽動2-3次，然后將探杯拉出。取出8-10mlo/p液倒入含有16-20ml保存液的滅 菌廣口瓶中，充分搖勻加蓋封口，室溫保存。同時取出8-10mlo/p液倒入空的滅菌廣口瓶中，加蓋封口，作為平行對照。室溫下存放24h，進行染菌觀察，結(jié)果表明，無保存液的o/p液對照有菌長出，而加入本發(fā)明保存液的o/p液無菌長出，而且持續(xù)觀察15天后，加入本發(fā)明保存液的o/p液仍無菌長出。15天后，對兩組的病毒檢出率進行實驗，結(jié)果表明，對照組病毒檢出率為40％，且有異味，而加入本發(fā)明保存液的o/p液的病毒檢出率為98％，無異味。

實施例2

1、用于牛羊食道-咽部分泌物的保存液的制備

(1)0.1mol/l磷酸鹽緩沖液(ph7.4)的制備

準(zhǔn)確稱取氯化鈉(nacl)80.00g、氯化鉀(kci)2.0g、磷酸氫二鈉(na2hpo4)30.0g以及磷酸二氫鉀(kh2po4)2.0g，將上述組分溶解于一定量的蒸餾水中，用氫氧化鈉或鹽酸溶液調(diào)ph值為7.4，補加蒸餾水至10l，即得0.1mol/l磷酸鹽緩沖液(ph7.4)；

(2)向步驟(1)得到的磷酸鹽緩沖液的中加入質(zhì)量百分比濃度為8％的牛血清白蛋白溶液600ml以及盤尼西林3g，混合均勻，即為牛羊食道-咽部分泌物的保存液，0℃—4℃下保存。

2、保存液在牛羊食道-咽部分泌物保存中的用途

采樣時動物應(yīng)站立保定，將探杯隨吞咽動作送入食道上部10-15cm處，輕輕來回抽動2-3次，然后將探杯拉出。取出8-10mlo/p液倒入含有16-20ml保存液的滅菌廣口瓶中，充分搖勻加蓋封口，室溫保存。同時取出8-10mlo/p液倒入空的滅菌廣口瓶中，加蓋封口，作為平行對照。室溫下存放24h，進行染菌觀察，結(jié)果表明，無保存液的o/p液對照有菌長出，而加入本發(fā)明保存液的o/p液無菌長出，而且持續(xù)觀察15天后，加入本發(fā)明保存液的o/p液仍無菌長出。對兩組的病毒檢出率進行實驗，結(jié)果表明，對照組病毒檢出率為40％，且有異味而加入本發(fā)明保存液的o/p液的病毒檢出率為95％，無異味。

實施例3

1、用于牛羊食道-咽部分泌物的保存液的制備

(1)0.1mol/l磷酸鹽緩沖液(ph7.4)的制備

準(zhǔn)確稱取氯化鈉(nacl)85.00g、磷酸氫二鈉(na2hpo4)15.49g以及磷酸 二氫鈉(nah2po4)2.03g，將上述組分溶解于一定量的蒸餾水中，用氫氧化鈉或鹽酸溶液調(diào)ph值為7.4，補加蒸餾水至10l，即得0.1mol/l磷酸鹽緩沖液(ph7.4)；

(2)向步驟(1)得到的磷酸鹽緩沖液的中加入馬血清800ml以及青霉素2g，混合均勻，即為牛羊食道-咽部分泌物的保存液，0℃—4℃下保存。

2、保存液在牛羊食道-咽部分泌物保存中的用途

采樣時動物應(yīng)站立保定，將探杯隨吞咽動作送入食道上部10-15cm處，輕輕來回抽動2-3次，然后將探杯拉出。取出8-10mlo/p液倒入含有16-20ml保存液的滅菌廣口瓶中，充分搖勻加蓋封口，室溫保存。同時取出8-10mlo/p液倒入空的滅菌廣口瓶中，加蓋封口，作為平行對照。室溫下存放24h，進行染菌觀察，結(jié)果表明，無保存液的o/p液對照有菌長出，而加入本發(fā)明保存液的o/p液無菌長出，而且持續(xù)觀察15天后，加入本發(fā)明保存液的o/p液仍無菌長出。對兩組的病毒檢出率進行實驗，結(jié)果表明，對照組病毒檢出率為40％，且有異味，而加入本發(fā)明保存液的o/p液的病毒檢出率為90％，無異味。

實施例4

1、用于牛羊食道-咽部分泌物的保存液的制備

(1)0.1mol/l磷酸鹽緩沖液(ph7.4)的制備

準(zhǔn)確稱取氯化鈉(nacl)85.00g、磷酸氫二鈉(na2hpo4)15.49g以及磷酸二氫鈉(nah2po4)2.03g，將上述組分溶解于一定量的蒸餾水中，用氫氧化鈉或鹽酸溶液調(diào)ph值為7.4，補加蒸餾水至10l，即得0.1mol/l磷酸鹽緩沖液(ph7.4)；

(2)向步驟(1)得到的磷酸鹽緩沖液的中加入質(zhì)量百分比濃度為1.0％的酪蛋白溶液500ml以及氯霉素2g，混合均勻，即為牛羊食道-咽部分泌物的保存液，0℃—4℃下保存。

2、保存液在牛羊食道-咽部分泌物保存中的用途

采樣時動物應(yīng)站立保定，將探杯隨吞咽動作送入食道上部10-15cm處，輕輕來回抽動2-3次，然后將探杯拉出。取出8-10mlo/p液倒入含有16-20ml保存液的滅菌廣口瓶中，充分搖勻加蓋封口，室溫保存。同時取出8-10mlo/p液倒入空的滅菌廣口瓶中，加蓋封口，作為平行對照。室溫下存放24h，進行染菌觀察，結(jié)果表明，無保存液的o/p液對照有菌長出，而加入本發(fā)明保存液的o/p液無菌長出，而且持續(xù)觀察15天后，加入本發(fā)明保存液的o/p液仍無菌長出。對兩組的病毒檢出率進行實驗，結(jié)果表明，對照組病毒檢出率為40％，且有異味，而加入本發(fā)明保存液的 o/p液的病毒檢出率為95％，無異味。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用上述原料制成保存液，無毒無刺激性氣味，安全性高，保存效果好，能較長時間保存不會變質(zhì)，不會影響后期o/p液檢測效果，達(dá)到了本發(fā)明的目的。