本發(fā)明屬于海洋生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種濁度對刺參幼蟲發(fā)育和變態(tài)附著的影響研究方法。
背景技術(shù)：
刺參生態(tài)苗種繁育是一種基于生態(tài)學(xué)原理,充分利用自然環(huán)境條件,采用高效設(shè)施和生態(tài)增養(yǎng)殖模式,通過科學(xué)管理而生產(chǎn)出的優(yōu)質(zhì)健康苗種的方法。由于刺參從早期浮游幼蟲階段便進(jìn)入到野生環(huán)境下生存,與室內(nèi)培育條件相比更加復(fù)雜和多變。受到晝夜交替、潮汐、降水等環(huán)境因素的影響,水體的溫度、鹽度、濁度、浮游生物等的變化更為劇烈,對刺參幼蟲發(fā)育和生長勢必造成影響。因此在選擇適宜生態(tài)苗種繁育的海區(qū)之前,首先需要弄清各種環(huán)境因子對刺參幼蟲發(fā)育的影響,而在這些環(huán)境因子中,與室內(nèi)培育相比溫度、鹽度、光照、濁度等環(huán)境因素差異最為明顯。
在自然條件下,海流對海床底質(zhì)的擾動攪起的泥沙以及浮游生物死亡后形成的有機(jī)碎屑構(gòu)成了水體懸浮物的主要成分,使海水呈現(xiàn)出不同程度的渾濁狀態(tài)。海水中的懸浮物也稱懸浮沉積物(suspendedsediment)或稱懸浮顆粒物(suspendedparticulatematter,spm),其含量并不穩(wěn)定,而是受到海流的節(jié)律性運(yùn)動以及海面的風(fēng)應(yīng)力的影響在一定范圍內(nèi)波動,例如榮成月湖的spm濃度從一般在7mg/l到20mg/l之間波動,風(fēng)浪大時則偶爾會達(dá)到140mg/l左右(2011年6月至8月監(jiān)測數(shù)據(jù)),渤海灣中心區(qū)的近底層spm波動在40mg/l到140mg/l左右,青島膠州灣中心區(qū)7月份的平均懸浮顆粒物濃度在5mg/l到15mg/l左右,靠近大沽河口區(qū)的懸浮顆粒物濃度則可達(dá)到30mg/l以上?？梢?海區(qū)的濁度的變化是受海流、風(fēng)、徑流等多種因素綜合作用的結(jié)果,常處于變動的狀態(tài)。刺參從受精卵到變態(tài)附著需要經(jīng)歷約半個月的浮游期,這段時期是其生活史中生命力相對脆弱的時期,因此在這樣一個濁度較高且變動較大的環(huán)境下開展刺參生態(tài)苗種繁育工作,探明濁度對刺參幼蟲生長發(fā)育的影響顯得尤為必要。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
針對上述問題，本發(fā)明旨在提供一種方法，可以研究濁度對刺參幼蟲發(fā)育和變態(tài)附著的影響。
一種濁度對刺參幼蟲發(fā)育和變態(tài)附著的影響研究方法，具體如下：選取處于原腸胚時期的幼蟲,布放密度0.5ind/ml,20±0.5°c水浴控溫；spm設(shè)置5個濃度梯度,實(shí)驗(yàn)進(jìn)行兩次,3個平行；第一次各組濃度為:對照組、30mg/l、60mg/l、100mg/l和300mg/l；第二次實(shí)驗(yàn)各組濃度設(shè)置為:對照組,50mg/l,150mg/l,350mg/l和550mg/l。
通過向海水中添加稀釋的泥漿調(diào)節(jié)至所需濃度,誤差控制在±20mg/l以內(nèi)。
采用充氣的方式維持spm濃度水平,spm的測量采用濁度儀。
每隔12h人為攪動一次水體,以恢復(fù)懸浮物濃度至實(shí)驗(yàn)水平。
幼蟲自小耳幼蟲至變態(tài)前每天每桶投喂2-4滴海洋紅酵母和80-100ml角毛藻,至變態(tài)為樽形幼蟲后,各組均以海泥作為餌料。
幼蟲發(fā)育至大耳幼蟲期測量幼蟲存活率、體長并記錄發(fā)育情況,培養(yǎng)至30天后計數(shù)各組稚參數(shù)量,以稚參數(shù)量/初始受精卵數(shù)量作為變態(tài)附著率。
采用雙因素方差分析比較不同處理間差異顯著性,處理內(nèi)不同水平之間的差異采用單因素方差分析及duncan多重比較。
本發(fā)明的方法可以有效、全面地研究濁度對刺參幼蟲發(fā)育和變態(tài)附著的影響。利用采自榮成月湖的表層海泥模擬水體中的懸浮顆粒物,研究了不同濃度的懸浮顆粒物對刺參幼蟲生長發(fā)育的影響,可以為開放海域刺參生態(tài)苗種繁育工作提供借鑒。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明。
將收集的榮成月湖表層新鮮海泥利用200目標(biāo)準(zhǔn)篩過濾兩遍以除去大顆粒物質(zhì),然后經(jīng)3000r/min的離心機(jī)中離心10min,棄掉水分,儲藏于4°c中備用。滅活海泥在離心前煮沸30min,其他處理步驟與新鮮海泥相同。制備所得新鮮海泥和滅活海泥有機(jī)質(zhì)含量分別為5.36±0.33%,3.98±0.23%。實(shí)驗(yàn)在8l的透明塑料桶中進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)幼蟲處于原腸胚時期,布放密度0.5ind/ml(每桶約4000個幼蟲),20±0.5°c水浴控溫。spm設(shè)置5個濃度梯度,實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了兩次,3個平行。第一次各組濃度為:對照組(不添加海泥)、30mg/l、60mg/l、100mg/l和300mg/l。第二次實(shí)驗(yàn)各組濃度設(shè)置為:對照組(不添加海泥),50mg/l,150mg/l,350mg/l和550mg/l。通過向海水中添加稀釋的泥漿調(diào)節(jié)至所需濃度,誤差控制在±20mg/l以內(nèi),采用充氣的方式維持spm濃度水平,spm的測量采用濁度儀(myrateksentrym-2)。由于沉降導(dǎo)致spm一直在降低,因此每隔12h人為攪動一次水體,以恢復(fù)懸浮物濃度至實(shí)驗(yàn)水平。幼蟲自小耳幼蟲至變態(tài)前每天每桶投喂2-4滴海洋紅酵母和80-100ml角毛藻,至變態(tài)為樽形幼蟲后,各組均以海泥作為餌料。幼蟲發(fā)育至大耳幼蟲期測量幼蟲存活率、體長并記錄發(fā)育情況,培養(yǎng)至30天后計數(shù)各組稚參數(shù)量,以稚參數(shù)量/初始受精卵數(shù)量作為變態(tài)附著率。采用雙因素方差分析比較不同處理間差異顯著性,處理內(nèi)不同水平之間的差異采用單因素方差分析及duncan多重比較。