本發(fā)明涉及一種利用人工提取水芹花粉的方法，該方法是根據(jù)水芹雜交育種過程中，存在嚴(yán)重的花期不育問題以及水芹花粉保存特點(diǎn)設(shè)計(jì)。該發(fā)明包括：水芹花粉的提取、干燥、檢測(cè)、保存、水芹花粉與其它營(yíng)養(yǎng)元素配比技術(shù)。該技術(shù)較好的解決了水芹雜交育種中花期不遇問題，大大提高了水芹雜交的效率。該技術(shù)對(duì)促進(jìn)我國(guó)水芹育種及遺傳研究具有重要意義。

背景技術(shù)：

雜交育種，一直是遺傳育種研究的重要方法，是獲得新性狀及新品種的最好、最安全途徑?；ㄆ诓挥觯恢背蔀殡s交育種的難題。人們常通過人工的方法，如光調(diào)節(jié)、藥劑處理、調(diào)整播期、施肥、植株調(diào)整等方法，來解決花期不遇問題，取得了一些較好的結(jié)果。生產(chǎn)上，這些不同的方法，對(duì)某一種或某一類作物效果良好，但是，對(duì)其它作物不一定適用。存在嚴(yán)重花期不遇的水芹，很難通過光調(diào)節(jié)、激素調(diào)節(jié)、播期調(diào)整等來調(diào)節(jié)不同來源水芹花期相遇。水芹為傘形科植物，以無性繁殖為主，不同地域來源的水芹材料，花期可從4月開始一直延續(xù)到10月，水芹有些年份還存在不開花的現(xiàn)象，嚴(yán)重影響水芹雜交育種工作。同時(shí)水芹以無性繁殖為主，對(duì)表現(xiàn)良好的雜交F1代，便可進(jìn)行選擇擴(kuò)繁，作為新品種和新材料供蔬菜生產(chǎn)及遺傳研究使用，所以克服水芹花期不遇，對(duì)水芹育種具有重要意義。為此，我們通過多年在水芹雜交育種探索的基礎(chǔ)上，成功的運(yùn)用人工提取水芹花粉的方法，解決了水芹雜交過程中，存在嚴(yán)重花期不遇問題。該專利對(duì)水芹遺傳、育種研究具有重要意義。

由于水芹花發(fā)育存在嚴(yán)重的花期不遇問題，生產(chǎn)上很難通過人工調(diào)節(jié)方式，進(jìn)行花發(fā)育調(diào)節(jié)。通過人工提取花粉保存技術(shù)，來解決水芹花期不遇問題。該專利主要涉及到：水芹花采摘、水芹花粉提取、水芹花粉干燥、檢測(cè)、保存、水芹花粉與其它營(yíng)養(yǎng)元素配比技術(shù)。

附圖說明

圖1.水芹花采摘部位(箭頭處)

圖2.粗提的水芹花粉

圖3.水芹純花粉(2mL試管)

圖4.顯微鏡下，檢測(cè)提取的水芹花粉活力及完整性良好(堿性品紅法)

圖5.授粉前對(duì)水芹花粉萌發(fā)檢測(cè)，活力良好(碘-碘化鉀法)

圖6.人工提取水芹花粉授粉后得到的水芹雜交種

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

1.本發(fā)明目的在于提供一種人工提取水芹花粉方法，克服水芹雜交過程中存在的花期不遇問題。

2.發(fā)明通過人工提取水芹花粉，克服水芹雜交花期不遇過程中，涉及的技術(shù)方法及其參數(shù)控制，從而解決水芹花期不育問題。

具體實(shí)施方式

1、采摘水芹花的時(shí)間。水芹花采摘應(yīng)在早上進(jìn)行，采摘時(shí)水芹花序上約有50～75％花開放，能明顯看到花絲露出，且雄蕾由白色變成黃色為宜。采摘時(shí)將整個(gè)水芹花序剪下(圖1)，放入干凈的、涼爽的容器 中。采摘水芹花時(shí)應(yīng)注意避光，以免水芹花粉散開。

2、水芹花的培養(yǎng)。采摘的水芹花，將花朝上，放至于培養(yǎng)箱中。培養(yǎng)箱采用熒光燈為光源，光密度為200～500μmol·(m^-2·s)^-1，溫度在25～28℃，濕度在65％～75％，防止水芹花萎蔫。培養(yǎng)一天后，雄蕾將散開花粉。

3、水芹花粉粗提。將水芹花放置不銹鋼盤子中，進(jìn)行促進(jìn)水芹花藥散開花粉。此時(shí)濕度降低到40％～50％，溫度降低到22℃左右，5～8小時(shí)后，用手將花絲搓下，為粗提的水芹花粉(圖2)。

4、粗提水芹花粉的精提。粗提的水芹花粉，由于存在大量的花絲等雜物，嚴(yán)重影響水芹花粉保存。精提花粉是通過200目的篩子，將花粉與雜物分離，得到純凈的水芹花粉。

5、水芹花粉干燥。水芹花粉干燥是為了長(zhǎng)時(shí)間保存花粉，花粉干燥方法，采用暗室陰干方法，溫度控制在22±2℃，陰干12小時(shí)，水分含量在10～13％即可。陰干的水芹花粉，呈現(xiàn)出白黃色(圖3)，干燥的水芹花粉經(jīng)過堿性品紅檢測(cè)其活力及花粉完整性后(圖4)，及時(shí)進(jìn)行小袋或試管包裝。

6、水芹花粉保存技術(shù)。干燥的水芹花粉應(yīng)在逐漸降低溫度的冷藏庫(kù)中進(jìn)行保存，冷藏庫(kù)溫度降低為5℃/小時(shí)，最終冷藏溫度控制在2～4℃。水芹花粉可保存1～3年。

7、水芹花粉的活性檢測(cè)。水芹花粉進(jìn)行授粉時(shí)，將分裝好的水芹花粉，按需求拿取。拿取的水芹花粉，可采用溫度逐漸升高方式，進(jìn)行5℃/小時(shí)升溫，溫度到室溫即可。檢測(cè)采用碘-碘化鉀配制溶液進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)水芹花粉萌發(fā)率是否正常(圖5)。

8、水芹花粉與微量元素的配制。為了提高水芹花粉在柱頭上的萌發(fā)率，需要按照一定的比例與微量元素堿性配制，微量元素包括：硼、鎂等(配方未公布)，然后對(duì)事先去雄好的水芹花上，采用棉球方式進(jìn)行授粉。

9.結(jié)果1：得到質(zhì)量高、活力良好的水芹花粉。

10.結(jié)果2：經(jīng)過水芹花粉提取，授粉給水芹，得到雜交水芹種子(圖6)。