一種玉米內(nèi)生枯草芽孢桿菌及其生防應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種玉米內(nèi)生枯草芽孢桿菌及其生防應(yīng)用，屬于玉米病害防治【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明所述該菌株為Bacillus subtilis BS0521，保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏起始日期為2014年11月16日，保藏號(hào)為CCTCC NO：M 2014566，保藏地址：中國(guó)武漢武漢大學(xué)。本發(fā)明菌株對(duì)健康玉米苗具有促生作用，同時(shí)能增加根系活力，可作為玉米苗期的生物肥料；在離體條件下對(duì)玉米多種病害的病原菌能產(chǎn)生抑制作用，可作為生物型種衣劑有效防治紋枯病，同時(shí)可作為玉米小斑病的誘抗劑；在防治玉米紋枯病和誘抗玉米小斑病中應(yīng)用。CCTCC NO：M 201456620141116
【專利說(shuō)明】-種玉米內(nèi)生枯草芽抱桿菌及其生防應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于玉米病害防治【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其設(shè)及一種玉米內(nèi)生枯草芽抱桿菌及其生 防應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 玉米是我國(guó)主要的糧食作物之一，種植面積和總產(chǎn)量?jī)H次于小麥和水稻，居第= 位。近年來(lái)，玉米除供食用外，還用作發(fā)展畜牧業(yè)的優(yōu)質(zhì)飼料和輕工業(yè)、醫(yī)藥工業(yè)的重要原 料，因此玉米在國(guó)民經(jīng)濟(jì)的發(fā)展中處于重要地位。
[0003] 近年來(lái)，隨著氣候的變遷，栽培制度的變革和品種的更換W及高淀粉品種的大 面積種植，玉米的±傳病害，尤其是紋枯病有逐年加重的趨勢(shì)。一般年份發(fā)病率大約在 10 % -30 %，嚴(yán)重年份甚至可W達(dá)到60 % W上，致使玉米產(chǎn)量顯著降低，所W上傳病害已成 為玉米穩(wěn)產(chǎn)、高產(chǎn)的主要制約因素之一。±傳病害的綜合防治方法主要有種子處理、清除病 殘?bào)w、選育抗病品種及輪作等措施。但由于±傳病害很難獲得抗性材料，所W種子處理顯得 尤為重要。在玉米葉斑病防治方面，除了應(yīng)用抗性品種、保健栽培和化學(xué)防治之外，仍缺少 更為有效的防治技術(shù)，尤其是生物防治技術(shù)。因此，生物農(nóng)藥W其安全、無(wú)殘毒、對(duì)人畜無(wú)害 和對(duì)環(huán)境無(wú)污染等特點(diǎn)備受國(guó)內(nèi)外科學(xué)家的關(guān)注。而內(nèi)生細(xì)菌W其存在于植物體內(nèi)，生存 環(huán)境穩(wěn)定，不易受到外界環(huán)境的影響等優(yōu)勢(shì)，在生物防治植物病害方面比葉際、根際的細(xì)菌 具有更大潛力。
[0004] 目前國(guó)內(nèi)外的玉米生物防治研究基本上只針對(duì)單種病害，且防效不穩(wěn)定，所W，本 領(lǐng)域技術(shù)人員迫切需要能夠有效防治玉米相關(guān)病害的多功能微生物新制劑的出現(xiàn)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為克服上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點(diǎn)與不足，本發(fā)明的首要目的在于提供一種玉米 內(nèi)生枯草芽抱桿菌。所述的玉米內(nèi)生枯草芽抱桿菌能夠有效防治玉米紋枯病和誘抗玉米小 斑病。
[0006] 本發(fā)明的另一目的在于提供上述玉米內(nèi)生枯草芽抱桿菌的生防應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)；一種玉米內(nèi)生枯草芽抱桿菌，該菌株為 Bacillus subtilis BS0521，保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中屯、，保藏起始日期為2014年11 月16日，保藏號(hào)為CCTCC NO ;M 2014566,保藏地址；中國(guó)武漢武漢大學(xué)。
[000引本發(fā)明玉米內(nèi)生枯草芽抱桿菌對(duì)健康玉米苗具有促生作用，同時(shí)能增加根系活 力，可作為玉米苗期的生物肥料應(yīng)用。
[0009] 上述的玉米內(nèi)生枯草芽抱桿菌在防治玉米紋枯病和誘抗玉米小斑病中的應(yīng)用?？?作為生物型種衣劑有效防治紋枯病，同時(shí)可作為玉米小斑病的誘抗劑。
[0010] 本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果：
[0011] 本發(fā)明公開(kāi)了一種防治玉米紋枯病和誘抗玉米小斑病的枯草芽抱桿菌菌株，經(jīng)鑒 定命名為枯草芽抱桿菌炬acillus subtilis)BS0521，保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中屯、，保 藏號(hào)為CCTCC NO ;M 2014566。本發(fā)明菌株對(duì)健康玉米苗具有促生作用，同時(shí)能增加根系活 力，可作為玉米苗期的生物肥料；在離體條件下對(duì)玉米多種病害的病原菌能產(chǎn)生抑制作用， 可作為生物型種衣劑有效防治紋枯病，同時(shí)可作為玉米小斑病的誘抗劑。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0012] 圖1為菌株BS0521對(duì)玉米小斑病病原菌的括抗活性結(jié)果圖；其中；A為僅接種病 原菌的對(duì)照組，B為接種BS0521后的處理組。
[001引 圖2為BS0521誘導(dǎo)后PAUP0D和PP0活性結(jié)果圖；其中；A為BS0521誘導(dǎo)后PAL 的活性結(jié)果圖，B為BS0521誘導(dǎo)后POD的活性結(jié)果圖，C為BS0521誘導(dǎo)后PP0的活性結(jié)果 圖。

【具體實(shí)施方式】
[0014] 下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限 于此。
[0015] 如未特殊說(shuō)明，實(shí)施例中的操作方法均為常規(guī)方法。
[0016] 實(shí)施例1 ;枯草芽抱桿菌BS0521的分離及鑒定
[0017] 本發(fā)明菌株枯草芽抱桿菌BS0521分離自甜玉米種子，具體操作方式如下：
[001引 （1)樣品處理；準(zhǔn)備浙鳳甜2號(hào)玉米種子，經(jīng)清水沖洗后，用30°C無(wú)菌水浸泡 30min ;
[0019] (2)表面滅菌；經(jīng)無(wú)菌水沖洗后置于95%的酒精3min，消毒結(jié)束后立即用無(wú)菌水 漂洗4次，同時(shí)取最后一次漂洗水120化涂布于NA培養(yǎng)基（牛肉浸膏Ig，蛋白腺5g，酵母 膏5g，氯化鋼5g，庶糖lOg，瓊脂20g，水lOOOmL)，28°C培養(yǎng)72h，檢測(cè)表面滅菌效果；
[0020] (3)分離；用滅菌剪刀將表面無(wú)菌材料剪成小塊后，轉(zhuǎn)入盛有ImL無(wú)菌水的離屯、管 中，充分震蕩，吸取菌懸液0. 2血涂布于NA培養(yǎng)基上，重復(fù)3次，28°C培養(yǎng)2-3d ;
[0021] (4)純化；挑取培養(yǎng)特征相異的單個(gè)菌落，經(jīng)培養(yǎng)純化后作為供試菌株。
[002引將待測(cè)內(nèi)生細(xì)菌菌株接種到PDA(馬鈴馨200g，庶糖20g，水lOOOmL)培養(yǎng)基中央， 在平板四周接入紋枯病病原菌，W僅接種病原菌的處理為對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)3次，觀察菌 落的生長(zhǎng)變化，W抑菌圈大小判斷括抗程度。
[0023] 挑選抑菌圈均大于10mm的供試菌，轉(zhuǎn)接至NA培養(yǎng)基試管斜面上，連續(xù)接種，傳代 5次，挑取仍對(duì)紋枯病菌有較強(qiáng)括抗效力的菌株進(jìn)行溫室盆栽篩選實(shí)驗(yàn)。具體如下；先用濃 度為l〇sCFU/ml的括抗菌懸液浸泡比，然后播種于花盆中，覆蓋3%紋枯病菌的菌±。W不 同括抗菌處理作對(duì)照1，W括抗菌處理后不接紋枯菌作對(duì)照2。每處理播5盆，每盆保留10 株，20天后觀察發(fā)病情況，選擇防效最好的一株菌株保存于NA斜面上。
[0024] 上述分離得到的菌株主要菌落形態(tài)及生物學(xué)特征如下；菌落形態(tài)為規(guī)則圓型，灰 白色無(wú)光澤，不透明，菌落表面皺權(quán)粗趟，低拱起，中間呈火山口狀，邊緣不整齊。革蘭氏陽(yáng) 性，鏡下視野內(nèi)呈長(zhǎng)絲狀或鏈狀。液體發(fā)酵2化后有芽抱出現(xiàn)，在液體基質(zhì)中呈均勻混濁， 不形成菌膜和菌環(huán)。專性好氧，不具凝乳作用，過(guò)氧化氨酶實(shí)驗(yàn)、硝酸鹽還原實(shí)驗(yàn)、V-P實(shí)驗(yàn) 陽(yáng)性；苯丙氨酸脫氨酶實(shí)驗(yàn)、卵黃卵磯脂酶實(shí)驗(yàn)陰性；分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，能分解阿拉 伯糖、甘露醇、酪素、明膠、淀粉。
[0025] 結(jié)合如下的16S rDNA序列測(cè)定，將該菌鑒定為枯草芽抱桿菌任acillus subtilis)，命名為Bacillus subtilis BS0521，保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中屯、，保藏起 始日期為2014年11月16日，保藏號(hào)為CCTCC NO ;M 2014566,保藏地址：中國(guó)武漢武漢大 學(xué)。
[0026] 枯草芽抱桿菌BS0521 16S rDNA的序列測(cè)定結(jié)果0如下；

【權(quán)利要求】
1. 一種玉米內(nèi)生枯草芽孢桿菌，其特征在于：該菌株為BacillussubtilisBS0521，保 藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏起始日期為2014年11月16日，保藏號(hào)為CCTCCNO:M 2014566,保藏地址：中國(guó)武漢武漢大學(xué)。
2. 權(quán)利要求1所述的玉米內(nèi)生枯草芽孢桿菌作為玉米苗期的生物肥料應(yīng)用。
3. 權(quán)利要求1中所述的玉米內(nèi)生枯草芽孢桿菌在防治玉米紋枯病和誘抗玉米小斑病 中應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A01N63/00GK104513802SQ201410777685
【公開(kāi)日】2015年4月15日 申請(qǐng)日期:2014年12月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月15日
【發(fā)明者】蘇婷, 王桂躍, 韓海亮, 趙福成, 譚禾平, 包斐 申請(qǐng)人:浙江省東陽(yáng)玉米研究所