一種快速獲得洋桔梗品種間雜交種的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種快速獲得洋桔梗品種間雜交種的方法，通過(guò)將不同的洋桔梗品種將父、母本之間進(jìn)行雜交后取其胚作為外植體；置于接種培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，每瓶接種胚胎10-15個(gè)；35d后轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)，得到幼苗后轉(zhuǎn)到分化培養(yǎng)基中擴(kuò)繁，擴(kuò)繁得到幼苗后，將幼苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，篩選獲得單體植株；經(jīng)過(guò)移栽成活的洋桔梗苗正常管理，得到雜交一代洋桔梗新品種。本發(fā)明采用胚培養(yǎng)技術(shù)結(jié)合組織培養(yǎng)方法，只需要0.5～1年的時(shí)間就可以獲得優(yōu)良的雜交種，大大縮短了育種時(shí)間。
【專利說(shuō)明】一種快速獲得洋桔梗品種間雜交種的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于組織培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及雜交育種方法，具體涉及一種快速獲得洋桔 梗品種間雜交種的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 洋桔梗，株態(tài)輕盈滯灑，花色典雅明快，花形別致可愛(ài)，一致都是國(guó)際上十分流行 的盆花和切花種類之一。
[0003] 洋桔梗原產(chǎn)美國(guó)內(nèi)布拉斯加州和得克薩斯州，性喜溫暖、濕潤(rùn)和陽(yáng)光充足。較 耐寒，不耐水濕。引種到歐洲和日本通過(guò)雜交改良，現(xiàn)已成為一個(gè)妖媚動(dòng)人、異常新奇 的花丼。其中荷蘭的克?薩欣?扎登（K. SahinZaden)公司和基夫特?布洛邁扎登 (KieftBloemzaden)公司為洋桔梗的育種和新品種的推廣做了大量工作。在歐洲各國(guó)的花 店和家庭的窗臺(tái)上到處可見(jiàn)。在日本，世界著名的花丼種子公司坂田公司在洋桔梗育種方 面取得了卓越成就。
[0004] 目前，品種間雜交育種依然是花丼新品種的選育的主要方法之一。國(guó)外洋桔梗的 雜交選育已經(jīng)開(kāi)展了 100多年，已選育大批新品種，而國(guó)內(nèi)現(xiàn)在還處于引種階段，許多通過(guò) 雜交手段獲得雜交種技術(shù)還未能突破，如，洋桔梗部分品種間雜交存在受精后障礙，致使雜 交得不到種子，嚴(yán)重影響了桔梗花色、葉色等優(yōu)異基因的再組合，因此解決這一難題對(duì)桔梗 新品種選育具有重要的意義。
[0005] 而利用胚培養(yǎng)技術(shù)來(lái)克服洋桔梗品種間受精后障礙，可以直接獲得雜交新品種。 對(duì)加速洋桔梗特異遺資源應(yīng)用于生產(chǎn)提供技術(shù)支持。
[0006] 洋桔梗扦插繁殖系數(shù)比較低，另外因種子繁殖多采用的是Fl代種子，后代分離比 較大，使品種混雜相當(dāng)嚴(yán)重，因此提倡采用組培繁殖法，使后代保持良好的性狀。因此利用 組織培養(yǎng)快速繁殖，批量生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)種苗具有重要的實(shí)用價(jià)值。
[0007] 許多科研院所和生產(chǎn)單位采用洋桔梗的莖段和葉片作為外植體用組培繁殖法進(jìn) 行種苗的快速繁殖。"洋桔梗的組培快繁"（周俊英，農(nóng)業(yè)科技通訊，2004, 5) -文中公開(kāi)了 將洋桔梗種子作為外植體對(duì)其進(jìn)行快繁的技術(shù)；"植物激素在洋桔梗組培快繁中的應(yīng)用效 果"（詹革勝，安徽農(nóng)業(yè)通報(bào)，AnhuiAgri. Sci. Bull. 2004, 10 (6) : 52-53, 59) -文中選取的 是洋桔梗幼嫩葉片為外植體，采用不同的激素對(duì)其進(jìn)行處理來(lái)研宄激素在洋桔梗組培快繁 中的作用，可見(jiàn)，洋桔梗的莖段、葉片和種子都可以作為組織培養(yǎng)過(guò)程中的外植體，目前還 沒(méi)有利用桔梗胚作為外植體對(duì)其進(jìn)行組織培養(yǎng)來(lái)獲得品種間雜交種的研宄。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 針對(duì)現(xiàn)狀，本發(fā)明將提供一種將經(jīng)過(guò)受精的胚作為外植體通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)來(lái)快 速獲得桔梗品種間雜交種的方法，不僅提供了一種全新的獲得洋桔梗新品種的方法，還能 解決其繼代培養(yǎng)變異的問(wèn)題，成活率較高，不受季節(jié)的影響，大幅度降低增殖成本，滿足規(guī) ?；a(chǎn)需要。
[0009] 為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一個(gè)技術(shù)方案如下：
[0010] 一種快速獲得洋桔梗品種間雜交種的方法，包括以下步驟：
[0011] (1)將父、母本在開(kāi)花前一天進(jìn)行套袋隔離，第二天上午，取新鮮的父本花粉對(duì)母 本進(jìn)行授粉，授粉后進(jìn)行套袋隔離；
[0012] (2)摘取授粉后瘦果授粉，在超凈工作臺(tái)上取出子房，后將子房用流水沖洗5? lOmin，再用70?75%的乙醇消毒30?50s后，置于0. 1%的升采溶液中4?5min，然后用 無(wú)菌水沖洗5-6次，沖洗后用無(wú)菌的刀片劃開(kāi)種皮，取其胚作為外植體；
[0013] (3)將外植體置于接種培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，每瓶接種胚胎10-15個(gè)；35d后轉(zhuǎn)入繼 代培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)，得到幼苗后轉(zhuǎn)到分化培養(yǎng)基中擴(kuò)繁，擴(kuò)繁得到幼苗后，將幼苗轉(zhuǎn) 移到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，篩選獲得單體植株；
[0014] (4)煉苗移栽：先將培養(yǎng)瓶移至溫室，自然條件下煉苗4d，待洋桔梗苗健壯且有 5-7片真葉、6-8cm高時(shí)，然后解開(kāi)封口膜，煉苗6d，移栽到經(jīng)消毒的基質(zhì)中，溫度控制在 24-26°C，前7d濕度控制在70%左右，以后逐漸降低濕度，直至將移栽苗置于自然條件下；
[0015] (5)大田管理：將移栽成活的洋桔梗苗正常管理，得到雜交一代洋桔梗新品種。
[0016] 上述步驟二中，取子房的時(shí)間為授粉后8?12d。
[0017] 所述步驟三中接種培養(yǎng)基為：MS+2,4-D 2mg/L+6-BA I. 5mg/L ;
[0018] 上述繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)基為MS+6-BA I. Omg/L+NAA 0· lmg/L ;
[0019] 上述的分化培養(yǎng)基組成為MS+6-BA 0· 2mg/L ;
[0020] 上述生根培養(yǎng)基組成為1/2MS+NAA0. 1?0. 2mg/L+IBA0. 1?0. 2mg/L+蔗糖或白 砂糖20?30g/L+瓊脂7?8g/L。
[0021] 上述接種培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為溫度24-26°C，pH為6. 3,光周期為14h光照/IOh黑 暗，光強(qiáng)為1200Lx ;
[0022] 上述繼代培養(yǎng)和分化培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為溫度為23 ± 1°C，pH為6. 3,12h/d的光周 期，光照強(qiáng)度1600Lx ;
[0023] 上述生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度為23±1°C，pH為6,14-18h/d的光周期，光 照強(qiáng)度1400Lx。
[0024] 本發(fā)明有益效果：
[0025] 利用胚培養(yǎng)技術(shù)來(lái)克服洋桔梗品種間受精后障礙，可以直接獲得雜交新品種，對(duì) 加速洋桔梗特異遺資源應(yīng)用于生產(chǎn)提供了技術(shù)支持。
[0026] 傳統(tǒng)種植需要1年左右的時(shí)間才能有所收成，而利用組織培養(yǎng)技術(shù)能使洋桔梗在 半年左右的時(shí)間就能收獲，大大縮短了育種周期，利用連續(xù)的繼代增殖，具有快速有效的效 果。傳統(tǒng)育種方法要想獲得優(yōu)良的雜交品種，需要經(jīng)過(guò)連續(xù)4?5代雜交，大約需要3?5 年的時(shí)間才能獲得性狀穩(wěn)定的雜交種，而本發(fā)明通過(guò)胚培養(yǎng)技術(shù)直接獲得雜交新品種，大 大縮短了育種時(shí)間。
[0027] 本發(fā)明在獲得雜交種的同時(shí)，還可以獲得脫毒的植株，具有較好的抗逆性、不易受 病毒感染，減少病蟲(chóng)害防治所花的費(fèi)用，種苗的成活率也很高，因此起到一舉兩得的效果。

【具體實(shí)施方式】
[0028] 實(shí)施例1 一種快速獲得洋桔梗品種間雜交種的方法，包括以下步驟：
[0029] (1)分別選擇栽培品種"路西塔"作為父本A、牡丹型大花紫色品種"神話"作為母 本B，選擇生長(zhǎng)旺盛，花荀大的植株，在開(kāi)花前
[0030] 一天進(jìn)行套袋隔離，第二天上午，取新鮮的父本花粉對(duì)母本進(jìn)行授粉，授粉后進(jìn)行 套袋隔離；
[0031] (2授粉后12d摘取授粉后瘦果，在超凈工作臺(tái)上取出子房，后將子房用流水沖洗 l〇min，再用70%的乙醇消毒50s后，置于0. 1 %的升采溶液中4?5min，然后用無(wú)菌水沖洗 5-6次，沖洗后用無(wú)菌的刀片劃開(kāi)種皮，取其胚作為外植體；
[0032] (3)將外植體置于接種培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，每瓶接種胚胎10個(gè)；接種培養(yǎng)基為： MS+2,4-D 2mg/L+，6-BA I. 5mg/L ;培養(yǎng)條件為溫度 24-26°C，pH 為 6. 3,光周期為 14h 光照 /IOh黑暗，光強(qiáng)為1200Lx ;
[0033] (4)在接種培養(yǎng)基中培養(yǎng)35d后，轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)。培養(yǎng)基為 MS+6-BA l.Omg/L+NAA 0· lmg/L;培養(yǎng)條件為溫度為 23±l°C，pH 為 6.3，12h/d 的光周期，光 照強(qiáng)度1600Lx ;
[0034] (5)分化培養(yǎng)：接種后得到幼苗后轉(zhuǎn)到分化培養(yǎng)基中擴(kuò)繁。分化培養(yǎng)基組成 為MS+6-BA 0· 2mg/L ;培養(yǎng)條件為溫度為23± 1°C，pH為6. 3,12h/d的光周期，光照強(qiáng)度 1600Lx ；
[0035] (6)生根培養(yǎng)：擴(kuò)繁得到幼苗后，將幼苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，篩選 獲得單體植株；生根培養(yǎng)基組成為1/2MS+NAA0. lmg/L+IBAO. 2mg/L+白砂糖30g/L+瓊脂 7g/L。培養(yǎng)溫度為23±1°C，pH為6,14-18h/d的光周期，光照強(qiáng)度1400Lx。
[0036] (7)煉苗移栽：先將培養(yǎng)瓶移至溫室，自然條件下煉苗4d，待洋桔梗苗健壯且有 5-7片真葉、6-8cm高時(shí)，然后解開(kāi)封口膜，煉苗6d，移栽到經(jīng)消毒的基質(zhì)中，溫度控制在 24-26°C，前7d濕度控制在70%左右，以后逐漸降低濕度，直至將移栽苗置于自然條件下。
[0037] (8)大田管理：將移栽成活的洋桔梗苗定植15d后，緩苗期結(jié)束，此時(shí)撤掉遮陽(yáng)網(wǎng)， 結(jié)合澆水，施薄肥1次，因洋桔梗比較喜歡溫暖濕潤(rùn)的環(huán)境，因此每天用細(xì)霧噴壺葉面噴水 2次。
[0038] 肥水管理：每7d施銨態(tài)氮肥1次，每667m2施肥量為4?5kg。5月初，光照強(qiáng)度逐 漸增強(qiáng)，在溫室棚膜外覆蓋50%的遮陽(yáng)網(wǎng)以減少光照對(duì)苗的灼傷，溫室內(nèi)要加強(qiáng)通風(fēng)管理， 以利于苗莖的伸長(zhǎng)生長(zhǎng)。待苗長(zhǎng)至20cm時(shí)，用尼龍繩編成的菱形網(wǎng)進(jìn)行拉網(wǎng)處理，防止花 苗倒伏，以后每隔20cm拉1層網(wǎng)，共拉3層。
[0039] 花期管理：從4月15日開(kāi)始，各品種陸續(xù)現(xiàn)蕾，洋桔梗進(jìn)入營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)和生殖生長(zhǎng)并 進(jìn)期。此時(shí)期的洋桔梗，除施氮肥外，應(yīng)增加磷鉀肥的施用量，每周葉面噴施1%。的KH 2PO4I 次，逐漸減少葉面噴水次數(shù)，水分管理間干間濕，畦內(nèi)勿積水。當(dāng)有花蕾開(kāi)放時(shí)，停止葉面噴 水，防止花心積水腐爛。
[0040] 病蟲(chóng)害的防治：洋桔?？共∠x(chóng)能力較強(qiáng)，在整個(gè)生長(zhǎng)期，部分品種有灰斑病發(fā)生， 可噴施50 %的多菌靈可濕性粉劑800倍液和代森錳鋅1000倍液，每3d噴1次，2種藥劑交 替使用效果更佳。2周后，灰斑病得到控制，20d后，病害完全消失。
[0041] 另外，危害洋桔梗的主要害蟲(chóng)是潛葉蠅和小地老虎，潛葉蠅鉆食洋桔梗葉片，小地 老虎咬食洋桔梗的根部，防治潛葉蠅可葉面噴施500?800倍的蠅螨凈乳液，毒殺小地老虎 可用800?1000倍的鋅硫磷乳液灌根，每周1次，殺蟲(chóng)效果比較顯著。
[0042] (9)將得到的洋桔梗新品種與親本栽培性狀進(jìn)行比較見(jiàn)表1。
[0043] 表 1
[0044]

【權(quán)利要求】
1. 一種快速獲得洋桔梗品種間雜交種的方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 將父、母本在開(kāi)花前一天進(jìn)行套袋隔離，第二天上午，取新鮮的父本花粉對(duì)母本進(jìn) 行授粉，授粉后進(jìn)行套袋隔離； (2) 摘取授粉后瘦果授粉，在超凈工作臺(tái)上取出子房，后將子房用流水沖洗5?lOmin， 再用70?75%的乙醇消毒30?50s后，置于0. 1%的升采溶液中4?5min，然后用無(wú)菌水 沖洗5-6次，沖洗后用無(wú)菌的刀片劃開(kāi)種皮，取其胚作為外植體； (3) 將外植體置于接種培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，每瓶接種胚胎10-15個(gè)；35d后轉(zhuǎn)入繼代培 養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)，得到幼苗后轉(zhuǎn)到分化培養(yǎng)基中擴(kuò)繁，擴(kuò)繁得到幼苗后，將幼苗轉(zhuǎn)移到 生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，篩選獲得單體植株； (4) 煉苗移栽：先將培養(yǎng)瓶移至溫室，自然條件下煉苗4d，待洋桔梗苗健壯且有5-7片 真葉、6-8cm高時(shí)，然后解開(kāi)封口膜，煉苗6d，移栽到經(jīng)消毒的基質(zhì)中，溫度控制在24-26°C， 前7d濕度控制在70 %左右，以后逐漸降低濕度，直至將移栽苗置于自然條件下； (5) 大田管理：將移栽成活的洋桔梗苗正常管理，得到雜交一代洋桔梗新品種。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種快速獲得洋桔梗品種間雜交種的方法，其特征在于，所述 步驟二中，取子房的時(shí)間為授粉后8?12d。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的快速獲得洋桔梗品種間雜交種的方法，其特征在于， 所述步驟三中接種培養(yǎng)基為：MS+2,4-D 2mg/L+6-BA 1.5mg/L;所述繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)基為 MS+6-BA 1. Omg/L+NAAO. lmg/L ;所述的分化培養(yǎng)基組成為MS+6-BA 0? 2mg/L ;所述生根培 養(yǎng)基組成為1/2MS+NAA0. 1?0? 2mg/L+IBA0. 1?0? 2mg/L+蔗糖或白砂糖20?30g/L+瓊 脂7?8g/L。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的快速獲得洋桔梗品種間雜交種的方法，其特征在于，所 述接種培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為溫度24-26°C，pH為6. 3,光周期為14h光照/10h黑暗，光強(qiáng)為 1200Lx ;繼代培養(yǎng)和分化培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為溫度為23±1°C，pH為6. 3,12h/d的光周期，光 照強(qiáng)度1600Lx ;生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度為23±1°C，pH為6,14-18h/d的光周期， 光照強(qiáng)度1400Lx。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104488711SQ201410745960
【公開(kāi)日】2015年4月8日 申請(qǐng)日期:2014年12月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月8日
【發(fā)明者】邱林 申請(qǐng)人:邱林