Noggin基因作為引入絨山羊細(xì)胞改善絨毛細(xì)度的外源基因的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了Noggin基因?qū)|寧絨山羊絨細(xì)度產(chǎn)生調(diào)控作用，即Noggin基因表達(dá)量越高，會(huì)促使KAP7.1和KAP8.2基因的表達(dá)量增高，這些基因的增高可降低絨毛細(xì)度，改善絨毛品質(zhì)，從而發(fā)明了Noggin基因作為引入絨山羊細(xì)胞改善絨毛細(xì)度的外源基因的應(yīng)用，將Noggin基因過表達(dá)慢病毒注射雄性遼寧絨山羊睪丸，通過病毒感染將KAP26.1基因作為外源基因引入絨山羊細(xì)胞之后選育KAP7.1和KAP8.2基因表達(dá)量高的遼寧絨山羊個(gè)體作為種羊，進(jìn)而可改善絨山羊絨毛細(xì)度，提高絨毛品質(zhì)。
【專利說明】Noggin基因作為引入絨山羊細(xì)胞改善絨毛細(xì)度的外源基 因的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種Noggin基因的新用途，尤其是一種Noggin基因作為引入絨山羊 細(xì)胞改善羊絨細(xì)度的外源基因的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 絨山羊毛被含有粗毛和絨毛，粗毛由初級(jí)毛囊產(chǎn)生，而絨毛（山羊絨）由次級(jí)毛囊 產(chǎn)生。絨毛具有纖細(xì)、輕盈、滑柔、保暖、光澤柔和、富有彈性、紡織性能優(yōu)良等其他纖維無法 比擬的特性，是世界紡織工業(yè)生產(chǎn)最珍貴的天然纖維原料，素有"軟黃金"的美譽(yù)。提高絨毛 品質(zhì)和增加絨毛產(chǎn)量是提高絨山羊經(jīng)濟(jì)價(jià)值的兩項(xiàng)主要指標(biāo)，而絨毛細(xì)度又是衡量絨毛品 質(zhì)的主要指標(biāo)，即絨毛越細(xì)，質(zhì)量越優(yōu)。1996年Zimmerman LB等發(fā)現(xiàn)Noggin蛋白作為BMP 信號(hào)通路細(xì)胞外重要的抑制劑之一，在胞外與BMP結(jié)合以抑制后者與受體相互作用，從而 有效地抑制BMP信號(hào)的激活。本領(lǐng)域技術(shù)人員都知道，外源基因是通過基因工程技術(shù)或病 毒感染等途徑引入靶細(xì)胞中的DNA序列，但是，迄今為止，還沒有關(guān)于以Noggin基因?yàn)橥庠?基因通過基因工程技術(shù)或病毒感染等途徑引入絨山羊細(xì)胞，以改善羊絨細(xì)度的相關(guān)報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明是發(fā)現(xiàn)了 Noggin基因?qū)|寧絨山羊絨細(xì)度產(chǎn)生調(diào)控作用，即Noggin基因 引入遼寧絨山羊細(xì)胞干擾后Kap7. 1和Kap8. 2基因的表達(dá)量增高，Kap6. 2的表達(dá)量減少。 這些基因表達(dá)量的變化會(huì)降低絨毛細(xì)度，改善絨毛品質(zhì)，從而發(fā)明了 Noggin基因作為引入 絨山羊細(xì)胞改善絨毛細(xì)度的外源基因的應(yīng)用。
[0004] 本發(fā)明是以Noggin基因?yàn)橥庠椿?，?gòu)建Noggin基因的慢病毒過表達(dá)載體并經(jīng) 病毒包裝，形成Noggin基因過表達(dá)慢病毒。將Noggin基因過表達(dá)慢病毒注射雄性遼寧絨 山羊睪丸，通過病毒感染將Noggin基因作為外源基因引入絨山羊細(xì)胞。之后選育Kap7. 1 和Kap8. 2基因表達(dá)量高的遼寧絨山羊個(gè)體作為種羊，進(jìn)而可改善絨山羊絨毛細(xì)度，提高絨 毛品質(zhì)。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0005] 圖 1 是 pLenti6. 3-EGFP-Noggin-l/-2/-3_miR 重組載體經(jīng) Ascl 和 PmeI 雙酶切鑒 定效果圖。
[0006] 圖2是Lenti-EGFP-Noggin-miR病毒液感染羊皮膚細(xì)胞熒光檢測照片（10X )。
[0007] 圖3是本發(fā)明實(shí)施例Noggin基因在不同樣本中的相對(duì)表達(dá)結(jié)果柱形圖。
[0008] 圖4是本發(fā)明實(shí)施例Kap7. 1基因在不同樣本中的相對(duì)表達(dá)結(jié)果柱形圖。
[0009] 圖5是本發(fā)明實(shí)施例KapS. 2基因在不同樣本中的相對(duì)表達(dá)結(jié)果柱形圖。
[0010] 圖6是本發(fā)明實(shí)施例Kap6. 2基因在不同樣本中的相對(duì)表達(dá)結(jié)果柱形圖。

【具體實(shí)施方式】 toon] 1.遼寧絨山羊原代皮膚細(xì)胞培養(yǎng) (1)在遼寧絨山羊一側(cè)的臀部選取大約5cm2的地方，用羊毛剪剪去長的毛和絨，碘酒消 毒，然后用75%的酒精脫典后，用刀片割取約0. 5cm3大小的組織塊，并立即放入75%的酒精 中，清洗30s，用含100U/ml雙抗的生理鹽水沖洗三次，最后將羊皮組織塊放入D-Hanks中， 封口膜封口，于4°C保存并于4h內(nèi)帶回實(shí)驗(yàn)室。
[0012] (2)把羊皮膚小塊置于含有D-Hanks緩沖液中，用D-Hanks液漂洗三次，然后用眼 科剪剪切成Imm 3左右的小組織塊。取組織小塊置于培養(yǎng)瓶均勻分布在培養(yǎng)瓶底部。擺布 完成后，瓶底向上，于37°C，5%C0 2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3h后，待小塊微干涸。干涸后，加入含 20%FBS的DMEM培養(yǎng)基10ml，將培養(yǎng)瓶置于37°C，5%C0 2培養(yǎng)箱中靜置5-7天，待有細(xì)胞從 組織塊中游出后增加培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。再2-3天后可去除組織塊和死細(xì)胞，加入新鮮的培 養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
[0013] (3)細(xì)胞傳代培養(yǎng)：細(xì)胞布滿瓶底70%-80%左右時(shí)可傳代培養(yǎng)。去除原培養(yǎng)基，力口 入D-Hanks沖洗3次，吸出緩沖液，加入含0. 02%EDTA的0. 25%胰酶lml，培養(yǎng)箱中培養(yǎng)Imin 左右后取出，鏡檢，細(xì)胞松動(dòng)變圓，加入2倍胰酶體積的10% FBS的DMEM培養(yǎng)基終止消化。 用移液槍吹打，吹打結(jié)束后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中，1000 r/min離心2min。吸去上清液。 將2ml含20%FBS的DMEM培養(yǎng)基注入到離心管中，吹打均勻后，平分到兩個(gè)培養(yǎng)瓶中，最后 補(bǔ)加適量的20%FBS的DMEM培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，一般在2天左右細(xì)胞就會(huì)貼壁。
[0014] 2.確定陰性慢病毒感染遼寧絨山羊原代皮膚細(xì)胞的最佳MOI值 利用陰性病毒液Lenti-EGFPniR (滴度3. OX 107IFU/ml，購自上海銳賽生物技術(shù)有限 公司）檢測慢病毒對(duì)遼寧絨山羊原代皮膚細(xì)胞的最佳感染復(fù)數(shù)(Μ0Ι值)，步驟如下： (1) 用胰酶將處于對(duì)數(shù)生長期的皮膚細(xì)胞消化下來制成細(xì)胞懸液，并利用血球計(jì)數(shù)板 進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)算出細(xì)胞的密度； (2) 將大約3000個(gè)細(xì)胞接種于96孔板中，每孔的培養(yǎng)基總體積為100ul，放于37°C 5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。
[0015] (3)第二天，進(jìn)行感染，此時(shí)細(xì)胞密度不宜過密，匯合度最好為30-50%，細(xì)胞數(shù)約 IO4個(gè)為宜。
[0016] (4)感染羊原代細(xì)胞的MOI范圍在1?200之間，因此設(shè)定MOI梯度為0，1，10, 30， 50,100。
[0017] (5)根據(jù)病毒滴度依次向細(xì)胞中加入相應(yīng)劑量的陰性病毒液Lenti-EGFP-miR，并 同時(shí)加入終濃度為5ug/ml的助染劑Polybrene以增強(qiáng)感染效果。
[0018] (6)繼續(xù)培養(yǎng)12h后觀察細(xì)胞的狀態(tài)：如果病毒和Polybrene對(duì)細(xì)胞沒有明顯的 毒性作用，則繼續(xù)培養(yǎng)，24h后更換新的培養(yǎng)基；如果對(duì)細(xì)胞有明顯的毒性作用，應(yīng)立即更 換培養(yǎng)基。
[0019] (7)病毒感染72h后，利用熒光顯微鏡觀察各孔內(nèi)的綠色熒光蛋白（GFP)的表達(dá)情 況，拍照記錄各組MOI值下感染效率。通過對(duì)比顯示，加 polybrene能明顯促進(jìn)病毒的感染 效果，但是促進(jìn)病毒感染的同時(shí)也有一些副作用，即抑制細(xì)胞的增殖，感染后的細(xì)胞形態(tài)發(fā) 生部分變化。因此慢病毒感染靶細(xì)胞皮膚原代細(xì)胞的MOI值選取M0I=30為最佳，且需要加 入一定濃度的助染劑polybrene以增強(qiáng)感染效率。
[0020] 3. Noggin基因慢病毒干擾載體的構(gòu)建與鑒定 (I)RNA干擾載體的構(gòu)建 根據(jù)綿羊中Noggin基因（GeneID: NM_001174110. 1)全長序列設(shè)計(jì)了 3對(duì)shRNA， 分別針對(duì)3個(gè)干擾靶點(diǎn)。將線性miRNA載體pcDNA?6. 2-EGFP-miR (陰性對(duì)照質(zhì)粒為 pcDNA?6. 2-EGFP-miR-neg control plasmid)與 3 對(duì)干擾 oligo 雙鏈在 T4 連接酶的作用 下22°C連接2小時(shí)，轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌DH5 α，搖菌過夜，次日抽提質(zhì)粒，并送往測序。
[0021] (2)干擾載體引物設(shè)計(jì) 根據(jù)干擾載體的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì) PCR 引物 Lenti-Ascl-F:5' -TACTGGCGCGCCGCCACCATGGTGAGC AAGGGCGAGGA-3' ； Lenti-Pmel-R: 5'-ACTAGITTAAACTGCGGCCAGATCTGGGC-3'（加粗字體標(biāo)記 分別為酶切位點(diǎn)AscI和PmeI) (3)干擾載體的PCR擴(kuò)增 分別以構(gòu)建好的 pcDNA6. 2-EGFP-Noggin-l/-2/-3 為模板，Lenti-Ascl-F / Lenti-Pmel -R為引物，分別PCR擴(kuò)增EGFP-N〇ggin-l/-2/-3片段，使所有的目的片段的兩 末端分別帶上酶切位點(diǎn)AscI和Pmel，反應(yīng)程序?yàn)椋?5°C、3 ;94°C、30 s，58°C、30 s，68°C、l min，30個(gè)循環(huán)；68°C、10 min。將擴(kuò)增干擾載體片段切膠回收。
[0022] (4)干擾載體PCR產(chǎn)物及慢病毒表達(dá)載體pLenti6. 3-MCS的酶切 用AscI和PmeI對(duì)上述純化后的產(chǎn)物和pLenti6. 3-MCS質(zhì)粒(本發(fā)明采用 pLenti6. 3-MCS/V5 DEST系列慢病毒表達(dá)載體)分別進(jìn)行37°C酶切4-5小時(shí)，切膠回收目的 干擾片段及目的載體。
[0023] (5)目的片段與目的載體的連接 凝膠電泳切膠回收的目的片段以及目的載體需要經(jīng)過紫外分光光度計(jì)檢測后，利用連 接酶T4 DNA ligase 16°C過夜連接上述經(jīng)過酶切后的PCR產(chǎn)物及目的載體。
[0024] (6)連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化及陽性克隆的篩選 取IOul連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5 α感受態(tài)細(xì)胞，涂布于含有氨芐(Amp+)抗性的固體LB平皿 上，37°C培養(yǎng)過夜。次日，進(jìn)行藍(lán)白斑篩選，并挑取培養(yǎng)板上白色的單菌落放入裝有Iml LB 培養(yǎng)基(Amp+)的離心管中，于37°C搖床中振蕩培養(yǎng)8-10小時(shí)，取渾池的菌液作為模板進(jìn)行 菌落PCR。取3ul菌落PCR鑒定結(jié)果呈陽性的克隆接到3ml LB液體培養(yǎng)基(Amp+)中，置于 37°C搖床中培養(yǎng)過夜，次日抽提質(zhì)粒，將菌落PCR呈陽性的質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切鑒定，鑒定效果 圖如圖1所示。把菌落PCR產(chǎn)物檢測結(jié)果以及經(jīng)酶切鑒定結(jié)果均呈陽性的克隆送往測序， 進(jìn)行比對(duì)分析，陽性質(zhì)粒命名為pLenti6. 3-EGFP-Noggin-l/-2/-3-miR。
[0025] 4. Noggin基因干擾慢病毒包裝收集和滴度測定 (1)將測序正確的pLenti-Noggin-EGFP-miR (-1#/-2#/-3#)菌液分別劃線培養(yǎng)，挑取 單克隆接入50ml含Amp+的LB液體培養(yǎng)基，30°C搖菌培養(yǎng)過夜。次日用AXYGEN質(zhì)粒抽提 試劑盒進(jìn)行質(zhì)粒抽提，將質(zhì)粒DNA最終溶于除菌的TE緩沖液中，用Thermo Nanodrop儀器 檢測質(zhì)粒濃度和純度。
[0026] (2) 293T細(xì)胞的準(zhǔn)備 轉(zhuǎn)染的前一天，取生長狀態(tài)良好的293Τ細(xì)胞，棄去舊的培養(yǎng)液，加入2 ml PBS溶液， 輕輕晃動(dòng)，洗滌細(xì)胞生長面，然后棄去PBS溶液。分別向每個(gè)培養(yǎng)皿中加入I ml胰酶消 化液，消化約I min直到細(xì)胞收縮、變圓，吸去胰酶，并立即加入3ml DMEM+ 10% FBS培養(yǎng) 基，用移液槍吹打?qū)⒚蟮椎募?xì)胞沖洗下來，重懸均勻。按1:5的比例傳至Poly-(D-Iysine) (PDL)包被的IOcm培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿中加入8. 5 ml DMEM+ 10% FBS，置于37 °C、5% CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)大約24h左右。
[0027] (3)慢病毒包裝 轉(zhuǎn)染之前，觀察細(xì)胞狀態(tài)，若細(xì)胞生長狀態(tài)良好，密度約在50-70%時(shí)即可用于轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn) 染時(shí)，首先向無菌的1.5ml離心管中加入750ul的Opti-MEM，然后向其中加入之前制備好 的各DNA溶液，6ug慢病毒表達(dá)質(zhì)粒，6ug包裝質(zhì)粒Packaging Mix,并將其混合均勻，于室 溫下靜置5 min。與此同時(shí)，取另一無菌的1.5ml離心管，并向其中加入Opti-MEM 750ul， POLOdeliverer 3000 Transfection Reagent 24ul ,輕輕混勻，室溫下靜置 5 min。把經(jīng) 過稀釋的DNA溶液和同樣經(jīng)過稀釋的POLOdeliverer 3000 Transfection Reagent混合 在一起，并小心地上下顛倒混勻，室溫下孵育20 min，以便使其形成DNA-P0L03000復(fù)合物。 取1.5ml上述混合液均勻加入到293T細(xì)胞培養(yǎng)液中，搖勻，然后置于37 °C，5% CO2細(xì)胞 培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
[0028] (4)病毒收獲 轉(zhuǎn)染后48小時(shí)，收集293T細(xì)胞的上清液(第一次收液)，并暫存4 °C中。給細(xì)胞更 換新鮮的完全培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)至72-80h，再次收集病毒上清，與第一次收集的混合，約 20ml。將收集液于4 °C，3000 rpm離心10 min，除去細(xì)胞碎片，然后分裝，每管裝Iml病 毒，于-80° C保存。
[0029] (5)慢病毒滴度測定(熒光顯微鏡觀察法） 細(xì)胞感染前一天，準(zhǔn)備約5X 10 5個(gè)細(xì)胞/ml的293T細(xì)胞接種于24孔板中，每孔 0.5ml。次日，將病毒液稀釋成10 -1病毒液以及10 -2病毒液，每個(gè)孔內(nèi)加入400ul無 抗生素的DMEM+10%FBS的細(xì)胞培養(yǎng)液，除對(duì)照組外其余各孔中均加入助染劑polybrene至 終濃度為8 ug/ml，向各感染孔內(nèi)分別加入相應(yīng)稀釋度的病毒液及病毒原液100ul，感染細(xì) 胞24小時(shí)后換液，需要向每孔里加入500ul DMEM+10% FBS+1% P/S+ 1% Glutamax，繼續(xù)培 養(yǎng)。感染72h后，利用熒光倒置相差顯微鏡觀察熒光表達(dá)情況，選取合適的稀釋度所對(duì)應(yīng)的 細(xì)胞培養(yǎng)孔，對(duì)GFP陽性的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，并依此來計(jì)算待測的慢病毒滴度（Tu/ml)。經(jīng)計(jì) 算 3 組病毒滴度分別為 6· 86X 105Tu/ml，I. 18X 106Tu/ml，I. 14X 106Tu/ml。
[0030] (6). Noggin基因干擾慢病毒感染靶細(xì)胞羊皮膚細(xì)胞后的qPCR干擾評(píng)價(jià) 胰酶消化處于對(duì)數(shù)生長期的絨山羊皮膚細(xì)胞，接種于12孔板中，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)對(duì)MOI 摸索的結(jié)果選擇對(duì)于慢病毒感染羊皮膚細(xì)胞的最佳MOI值為30,依據(jù)病毒滴度向細(xì)胞中 分別加入適量的干擾慢病毒600 ul和300 ul陰性對(duì)照病毒（NC病毒液)，同時(shí)加入濃度 終為4-8ug/ml的Polybrene以增強(qiáng)感染效果。感染24h后將細(xì)胞培養(yǎng)液更換成沒有病毒 和Polybrene的完全培養(yǎng)基繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，感染7天后，利用熒光顯微鏡觀察慢病毒上報(bào) 告基因 GFP的表達(dá)情況，拍照記錄感染結(jié)果(如圖2, a是Lenti-EGFP-Noggin-1-miR慢病 毒液感染羊皮膚細(xì)胞后的鏡檢照片，b是Lenti-EGFP-Noggin-2-miR慢病毒液感染羊皮膚 細(xì)胞的熒光照片，c是Lenti-EGFP -Noggin-3-miR慢病毒液感染羊皮膚細(xì)胞后的鏡檢照 片，d是Lenti- EGFP NC慢病毒液感染羊皮膚細(xì)胞后的檢測照片，作為本實(shí)驗(yàn)的陰性對(duì)照 組，而e代表空白對(duì)照組)。分別提取病毒液感染后實(shí)驗(yàn)組羊皮膚細(xì)胞及陰性對(duì)照組的總 尺隱，反轉(zhuǎn)錄后形成。0嫩，951：21^11，1個(gè)循環(huán) ；951：158,591：2〇8,721：2〇8,40個(gè)循環(huán)； 60°C -95°C 30s，39個(gè)循環(huán)，進(jìn)行qPCR反應(yīng)。用ΛΛ Ct法對(duì)各組的Noggin基因表達(dá)情況 進(jìn)行相對(duì)定量分析，以確定最佳干擾靶點(diǎn)。qPCR檢測結(jié)果如圖3所示。結(jié)果表明針對(duì)3個(gè) 靶點(diǎn)的Lenti-EGFP-Noggin-l/2/3-miR感染皮膚細(xì)胞樣品中Noggin基因的表達(dá)量比陰性 對(duì)照組Lenti- EGFP NC感染的羊皮膚細(xì)胞中的表達(dá)量分別下調(diào)了 52%，46%以及66%，故3 號(hào)革巴點(diǎn)的干擾慢病毒對(duì)Noggin基因的干擾效果最為顯著。
[0031] 5. Noggin基因干擾慢病毒感羊皮膚細(xì)胞后相關(guān)角蛋白家基因和角蛋白關(guān)聯(lián)蛋白 基因的qPCR檢測 利用最佳干擾病毒液（3號(hào)靶點(diǎn)的Lenti-EGFP-Noggin -3-miR)感染羊皮膚細(xì)胞，同時(shí) 設(shè)立空白對(duì)照組以及陰性病毒對(duì)照組，首先根據(jù)KAP6. 2、KAP7. 1、KAP8. 2、BMP4以及BMP_ IB基因的序列信息分別設(shè)計(jì)并合成qPCR引物，細(xì)胞用0. 25%的胰酶消化后，制成細(xì)胞懸液 接種于6培養(yǎng)板中，于37°C 5%C02培養(yǎng)箱培養(yǎng)。根據(jù)MOI值的檢測，向細(xì)胞中加入適宜病 毒滴度的病毒液的目的病毒和陰性對(duì)照病毒液，同時(shí)在培養(yǎng)板的各孔中加入4-8ug/ml的 Polybrene助染劑。感染24h后更換無慢病毒病毒液的20%FBS的DMEM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。 感染7天h后，在熒光顯微鏡下觀察目的基因慢病毒GFP的表達(dá)情況，拍照記錄感染結(jié)果。 從各組細(xì)胞中抽提總RNA，反轉(zhuǎn)錄cDNA，qPCR檢測，用AACt法對(duì)各組的中相關(guān)角蛋白關(guān) 聯(lián)蛋白基因 KAP6. 2、KAP7. 1、KAP8. 2以及BMP4和BMP_IB進(jìn)行定量分析。
[0032] 圖4是Kap7. 1基因在不同樣本(空白對(duì)照組、NC組及Noggin基因干擾組)中的相 對(duì)表達(dá)結(jié)果柱形圖。
[0033] 圖5是Kap8. 2基因在不同樣本(空白對(duì)照組、NC組及Noggin基因干擾組)中的相 對(duì)表達(dá)結(jié)果柱形圖。
[0034] 圖6是Kap6. 2基因在不同樣本(空白對(duì)照組、NC組及Noggin基因干擾組）中的相 對(duì)表達(dá)結(jié)果柱形圖。
[0035] qPCR結(jié)果顯示，對(duì)比Noggin敲減慢病毒和NC慢病毒感染后，Kap6. 2基因表達(dá)出 現(xiàn)明顯降低（Ρ〈〇· 05)，Kap7. l、Kap8. 2基因的表達(dá)出現(xiàn)上調(diào)趨勢（ρ〈0· 05)。
[0036] 6. Noggin基因干擾慢病毒注射睪丸的成年雄性遼寧絨山羊并選ΚΑΡ7. 1、ΚΑΡ8. 2 高表達(dá)的成年雄性遼寧絨山羊?yàn)榉N羊，培育絨毛品質(zhì)優(yōu)良的遼寧絨山羊 首先將Noggin基因慢病毒注射成年雄性遼寧絨山羊睪丸，之后在其中選KAP7. 1和 KAP8. 2高表達(dá)的成年雄性遼寧絨山羊?yàn)榉N羊作為實(shí)驗(yàn)組，正常成年種羊作為對(duì)照組，對(duì)后 代各組絨山羊的絨細(xì)度及絨產(chǎn)量等指標(biāo)進(jìn)行檢測，結(jié)果見表1與表2。
[0037] 表1遼寧絨山羊Noggin基因干擾實(shí)驗(yàn)組生產(chǎn)性能平均測試指標(biāo)

【權(quán)利要求】
1. 一種Noggin基因作為引入絨山羊細(xì)胞改善絨毛細(xì)度的外源基因的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A01K67/027GK104372026SQ201410549120
【公開日】2015年2月25日 申請(qǐng)日期:2014年10月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月14日
【發(fā)明者】金梅, 趙鳳琴, 張麗麗 申請(qǐng)人:遼寧師范大學(xué)