一種龍脷葉懸浮細胞培養(yǎng)的快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明研究了一種龍脷葉懸浮細胞培養(yǎng)的快速繁殖方法，包括無菌葉片的獲得、愈傷組織的誘導、愈傷組織的誘變、懸浮細胞的培養(yǎng)等步驟，本發(fā)明方法所制備的龍脷葉懸浮細胞增殖率高，生長周期短，品質好，以期為工廠化生產提供技術支撐。
【專利說明】 一種龍脷葉懸浮細胞培養(yǎng)的快速繁殖方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及龍脷葉懸浮細胞培養(yǎng)的快繁方法，屬于生物【技術領域】。

【背景技術】
[0002]龍脷葉,Sauropus spa tulifolius Bei77e,大戟科，別名:龍舌葉、龍味葉、牛耳葉分布于福建、廣東、廣西。原產于越南北部，馬來半島有栽培。常綠小灌木，高10-40厘米；莖粗糙；枝條圓柱狀，直徑2-5毫米，蜿蜒狀彎曲，多皺紋；幼時被腺狀短柔毛，老漸無毛，節(jié)間短，長2-20毫米。具有清肺，治肺熱咳嗽，止痰火咳嗽哮喘，治內傷肺癆失音，喉痛的功效，目前主要采用野外采集，懸浮細胞的培養(yǎng)不受地域的影響，既方便又快捷。


【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術問題是一種龍脷葉懸浮細胞培養(yǎng)的快速繁殖方法，本發(fā)明方法所制備的龍脷葉懸浮細胞增殖率高，生長周期短，品質好，以期為工廠化生產提供技術支撐。
[0004]為解決上述技術問題，本發(fā)明采用下列技術方案:
取龍脷葉幼嫩葉片，在洗衣粉中浸泡15min，流水沖洗15min，超凈工作臺上0.3%氯化汞處理13min，無菌水沖洗5遍，消毒處理過的葉片接入BEMB+6-BA0.lmg/L+2,4-Dlmg/L培養(yǎng)基中進行愈傷組織誘導，附加7.5g/L，瓊脂30g/L蔗糖，溫度23°C，濕度75%，誘導出來的愈傷組織，對其進行C+誘變，劑量為1 X 10131ns/cm2,能量為30_50keV，誘變后的愈傷組織，接入BEMB+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培養(yǎng)基中進行愈傷組織增殖，附加7.5g/L，瓊脂30g/L蔗糖，溫度25°C，光照2500lx，濕度85%，增殖后的愈傷組織接入BEMB+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培養(yǎng)基中進行懸浮細胞培養(yǎng)，接種量60g/L，溫度27°C，水平振蕩培養(yǎng)，轉速70r/min，培養(yǎng)周期30天。
[0005]采用本發(fā)明制備的龍脷葉細胞增殖率高，周期短，產量大，污染小，利于大規(guī)模種植。
[0006]下面將結合【具體實施方式】對本發(fā)明作進一步闡述，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

【具體實施方式】
[0007]實施例1
取龍脷葉幼嫩葉片，在洗衣粉中浸泡15min，流水沖洗15min，超凈工作臺上0.3%氯化汞處理13min，無菌水沖洗5遍，消毒處理過的葉片接入BEMB+6-BA0.lmg/L+2,4-Dlmg/L培養(yǎng)基中進行愈傷組織誘導，附加7.5g/L，瓊脂30g/L蔗糖，溫度23°C，濕度75%，誘導出來的愈傷組織，對其進行C+誘變，劑量為1 X 10131ns/cm2,能量為30keV，誘變后的愈傷組織，接入BEMB+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培養(yǎng)基中進行愈傷組織增殖，附加7.5g/L，瓊脂30g/L蔗糖，溫度25°C，光照25001x，濕度85%，增殖后的愈傷組織接入BEMB+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培養(yǎng)基中進行懸浮細胞培養(yǎng)，接種量60g/L，溫度27°C，水平振蕩培養(yǎng)，轉速70r/min，培養(yǎng)周期30天，誘變增殖率78%。
[0008]實施例2
取龍脷葉幼嫩葉片，在洗衣粉中浸泡15min，流水沖洗15min，超凈工作臺上0.3%氯化汞處理13min，無菌水沖洗5遍，消毒處理過的葉片接入BEMB+6-BA0.lmg/L+2,4-Dlmg/L培養(yǎng)基中進行愈傷組織誘導，附加7.5g/L，瓊脂30g/L蔗糖，溫度23°C，濕度75%，誘導出來的愈傷組織，對其進行C+誘變，劑量為1 X 10131ns/cm2,能量為50keV，誘變后的愈傷組織，接入BEMB+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培養(yǎng)基中進行愈傷組織增殖，附加7.5g/L，瓊脂30g/L蔗糖，溫度25°C，光照25001x，濕度85%，增殖后的愈傷組織接入BEMB+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培養(yǎng)基中進行懸浮細胞培養(yǎng)，接種量60g/L，溫度27°C，水平振蕩培養(yǎng)，轉速70r/min，培養(yǎng)周期30天，誘變增值率74%。
[0009]實施例3
取龍脷葉幼嫩葉片，在洗衣粉中浸泡15min，流水沖洗15min，超凈工作臺上0.3%氯化汞處理13min，無菌水沖洗5遍，消毒處理過的葉片接入BEMB+6-BA0.lmg/L+2,4-Dlmg/L培養(yǎng)基中進行愈傷組織誘導，附加7.5g/L，瓊脂30g/L蔗糖，溫度23°C，濕度75%，誘導出來的愈傷組織，對其進行C+誘變，劑量為1 X 10131ns/cm2,能量為40keV，誘變后的愈傷組織，接入BEMB+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培養(yǎng)基中進行愈傷組織增殖，附加7.5g/L，瓊脂30g/L蔗糖，溫度25°C，光照25001x，濕度85%，增殖后的愈傷組織接入BEMB+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培養(yǎng)基中進行懸浮細胞培養(yǎng)，接種量60g/L，溫度27°C，水平振蕩培養(yǎng)，轉速70r/min，培養(yǎng)周期30天，誘變增殖率77%。
【權利要求】
1.一種龍脷葉懸浮細胞培養(yǎng)的快速繁殖方法，包括無菌葉片的獲得、愈傷組織的誘導、愈傷組織的誘變、懸浮細胞的培養(yǎng)，其主要步驟如下: (1)取龍脷葉幼嫩的葉片，在超凈工作臺上進行消毒處理； (2)取步驟(I)消毒處理過的葉片接入BEMB+6-BA0.lmg/L+2,4-Dlmg/L培養(yǎng)基中進行愈傷組織誘導，附加7.5g/L，瓊脂30g/L蔗糖，溫度23°C，濕度75% ； (3)取步驟(2)誘導出來的愈傷組織，對其進行C+誘變，劑量為IX10131nS/cm2，能量為 30-50keV ； (4)取步驟(3)誘變后的愈傷組織，接入BEMB+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培養(yǎng)基中進行愈傷組織增殖，附加7.5g/L，瓊脂30g/L蔗糖，溫度25°C，光照25001x，濕度85% ； (5)取步驟(4)增殖后的愈傷組織接入BEMB+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培養(yǎng)基中進行懸浮細胞培養(yǎng)。
2.按照權利要求1所述的一種龍脷葉懸浮細胞培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(I)中所述龍脷葉無菌葉片的獲得為，取龍脷葉幼嫩葉片，在洗衣粉中浸泡15min，流水沖洗15min,超凈工作臺上0.3%氯化萊處理13min,無菌水沖洗5遍。
3.按照權利要求1所述的一種龍脷葉懸浮細胞培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(5)中懸浮細胞的培養(yǎng)方法為接種量60g/L，溫度27°C，水平振蕩培養(yǎng)，轉速70r/min，培養(yǎng)周期30天。
【文檔編號】A01H4/00GK104285797SQ201410540508
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年10月14日 優(yōu)先權日:2014年10月14日
【發(fā)明者】劉東鋒, 楊成東 申請人:南京帝道農業(yè)科技有限公司