云南紫薇的組培快繁方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及云南紫薇的組培快繁方法，在云南紫薇種子成熟季節(jié)，采收已木質(zhì)化但未開裂的果實，在4℃條件下儲存2周，然后對整個果實進行滅菌，剖開果實，取出種子，去除種翅，接種于含0.5g/L活性炭的1/2MS基本培養(yǎng)基中，暗培養(yǎng)1-2周直到種子萌發(fā)，然后轉(zhuǎn)到光下進行培養(yǎng)；將高度超過2cm的萌發(fā)苗接種到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)5-6周，獲得大量叢生芽，將叢生芽接種到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)6-8周，直到所有的無菌苗均生根，然后對生根苗進行煉苗，移栽出瓶。本發(fā)明從云南紫薇的繁殖入手，利用組織培養(yǎng)的方法來解決其在自然條件下種子萌發(fā)困難、繁殖系數(shù)較低的問題，為云南紫薇種質(zhì)資源保存及進行更加深入的研究奠定基礎(chǔ)。
【專利說明】云南紫薇的組培快繁方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)，具體地說，涉及云南紫薇的組培快繁方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 云南紫薇（Lagerstroemia intermedia Koehne)是千屈菜科（Lythraceae)，紫薇 屬常綠大喬木，為國家三級保護植物。目前全世界有紫薇屬植物約55個種，主要分布在亞 洲東部、東南部和澳大利亞北部，我國原產(chǎn)18種紫薇屬植物，后從東南亞引進栽培3種，共 21種。紫薇屬植物與其他花木相比而言，花色鮮艷美麗，花期長，壽命長，另外還具有抗污染 能力強，適應(yīng)城市環(huán)境等優(yōu)點，因此深受人們的喜愛，在園林綠化中得到廣泛的應(yīng)用。
[0003] 目前城市中常見的紫薇屬植物有紫薇、大花紫薇、福建紫薇、川黔紫薇等，云南紫 薇是紫薇屬植物的一個重要的種，是中國特產(chǎn)樹種，主要分布在云南思茅及瀾滄，混生于 1800米的雜木林中。與其他紫薇屬植物相比，云南紫薇不僅擁有美麗碩大的花朵，而且其花 期早，5月份即進入盛花期，而北京地區(qū)的紫薇5月份才剛剛萌動，因此其可以作為紫薇屬 植物早花育種研究的重要親本；云南紫薇的另一個重要的特征是其是常綠大喬木，是紫薇 屬植物中僅有的一種常綠種，因此云南紫薇種質(zhì)資源的引入對紫薇屬植物觀賞性狀的改良 有著重要的意義。
[0004] 云南紫薇植株高大挺拔，葉片呈橢圓形或矩圓狀橢圓形，葉片同花朵一樣大而美 麗，極具觀賞價值，是難得的早花樹種和常綠樹種，而且植株高大，株型挺拔。自然條件下著 果力雖強，但自然更新不良，林下幼樹稀少，這可能是由于云南紫薇的種子種皮堅硬且種翅 較大造成的，因此很難獲得大量的幼苗。組織培養(yǎng)技術(shù)是一種常見的植物快繁手段，對于在 自然條件下繁殖困難的種類大多可以通過組培的手段實現(xiàn)快繁，從而使種質(zhì)保存及生產(chǎn)推 廣成為可能。
[0005] 由于云南紫薇是我國特有樹種，僅在云南思茅瀾滄等地分布，目前關(guān)于云南紫薇 的研究還處于空白狀態(tài)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供云南紫薇的組培快繁方法。
[0007] 為了實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明提供的云南紫薇的組培快繁方法，在云南紫薇種子 成熟季節(jié)，采收已木質(zhì)化但未開裂的果實，在4°c條件下儲存2周，然后對整個果實進行滅 菌，剖開果實，取出種子，去除種翅，接種于含〇. 5g/L活性炭的1/2MS基本培養(yǎng)基中，暗培養(yǎng) 1-2周直到種子萌發(fā)，然后轉(zhuǎn)到光下進行培養(yǎng)；將高度超過2cm的萌發(fā)苗接種到叢生芽誘導(dǎo) 培養(yǎng)基上，培養(yǎng)5-6周，獲得大量叢生芽，將叢生芽接種到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)6-8周，直到 所有的無菌苗均生根，然后對生根苗進行煉苗，移栽出瓶。
[0008] 具體地，所述方法包括以下步驟：
[0009] (1)11-12月份，云南紫薇種子成熟季節(jié)，采收已木質(zhì)化但未開裂的果實，在4°C冰 箱中儲存2周，用稀釋100倍的洗潔靈浸泡30min，用清潔球磨去果皮，然后在流水下沖洗 2h以上，在超凈工作臺中用75%酒精滅菌lmin，然后用4%次氯酸鈉溶液滅菌30min，用無 菌水沖洗5-6遍；
[0010] ⑵剖開滅菌過的果實，取出種子，用無菌解剖刀切掉種翅，以露出種子為宜，接種 到含0. 5g/L活性炭的1/2MS基本培養(yǎng)基中，暗培養(yǎng)1-2周左右，種子開始萌發(fā)出幼苗，然后 轉(zhuǎn)移至光下培養(yǎng)；
[0011] 基本培養(yǎng)基為：l/2MS+0. 5g/L活性炭+30g/L蔗糖+6. 5g/L瓊脂，ρΗ5· 8-6. 0 ;培養(yǎng) 溫度25±2°C，光照時間12-14h/d，光照強度2000-30001χ ;
[0012] (3)選擇高度超過2cm的無菌播種苗，用無菌剪刀剪去根部及多余的葉片，接種到 叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，進行叢生芽誘導(dǎo)；
[0013] 叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：WPM+0. 5-1. 0mg/L6-BA+0. 025-0. lmg/L IBA+20g/L 蔗糖 +6. 5g/L 瓊脂，pH5. 2-5. 4 ;培養(yǎng)溫度 25±2°C，光照時間 12-14h/d，光照強度 2000-30001x ;
[0014] (4)待叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)5-6周之后，選擇高度超過3cm，且生長健壯的叢生芽接種 到生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，進行生根誘導(dǎo)；
[0015] 生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：l/2MS+0. 025-0. 05mg/L6-BA+0. 1-1. Omg/L ΙΒΑ+0. 5g/L 活性 炭+30g/L蔗糖+6. 5g/L瓊脂，pH5. 8-6. 0 ;培養(yǎng)溫度25±2°C，光照時間12-14h/d，光照強度 2000-30001x ；
[0016] (5)當(dāng)無菌苗根系生長完好達到3-4cm長，且不少于5根時，打開封口膜在組培室 內(nèi)煉苗1周，然后用無菌水洗去組培苗根部的培養(yǎng)基，移栽至已滅菌的草炭與珍珠巖體積 比為3:1的混合基質(zhì)中，套袋保持濕度，并保持每天噴水2-3次，然后逐漸降低濕度并增加 光照強度，2周后待移栽苗成活后在溫室中進行常規(guī)培養(yǎng)。
[0017] 本發(fā)明還提供用于云南紫薇組培的基本培養(yǎng)基，所述基本培養(yǎng)基為：l/2MS+0. 5g/ L 活性炭 +30g/L 鹿糖 +6. 5g/L 瓊脂，pH5. 8-6. 0。
[0018] 本發(fā)明還提供用于云南紫薇組培的叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，所述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基 為：WPM+0. 5-1. 0mg/L6-BA+0. 025-0. lmg/L IBA+20g/L 蔗糖 +6. 5g/L 瓊脂，ρΗ5· 2-5. 4。
[0019] 本發(fā)明還提供用于云南紫薇組培的生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基，所述生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基為： 1/2MS+0. 025-0. 05mg/L6-BA+0. 1-1. Omg/L ΙΒΑ+0. 5g/L 活性炭 +30g/L 蔗糖 +6. 5g/L 瓊脂， ρΗ5· 8_6· 0〇
[0020] 本發(fā)明從云南紫薇的繁殖入手，利用組織培養(yǎng)的方法來解決其在自然條件下種子 萌發(fā)困難、繁殖系數(shù)較低的問題，利用本發(fā)明方法，每粒種子實生苗可一次性獲得4-7棵幼 苗，為后續(xù)云南紫薇種質(zhì)資源保存及進行更加深入的研究奠定基礎(chǔ)。
[0021] (一）本發(fā)明首次提供了一套完整的我國特有的紫薇屬植物云南紫薇的組培快繁 技術(shù)。
[0022] (二）用云南紫薇的種子作為外植體，容易獲得，且方便運輸，適宜在不同地方對 其進行研究。利用組織培養(yǎng)的方法，可以在短期內(nèi)獲得大量的叢生芽，解決了云南紫薇在自 然條件下繁殖困難的問題。
[0023] (三）本發(fā)明提供了一種簡單、經(jīng)濟、高效的組培快繁方法，有利于云南紫薇的種 質(zhì)資源保存及推廣應(yīng)用。同時也可以推廣到紫薇屬其他不易繁殖的種類及品種。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0024] 圖1為本發(fā)明實施例1中云南紫薇成熟但未開裂果實示意圖。
[0025] 圖2為本發(fā)明實施例1中云南紫薇無菌播種及種子萌發(fā)示意圖。
[0026] 圖3為本發(fā)明實施例1中云南紫薇叢生芽誘導(dǎo)示意圖。
[0027] 圖4為本發(fā)明實施例1中云南紫薇組培苗生根示意圖。
[0028] 圖5為本發(fā)明實施例1中云南紫薇組培苗根系示意圖。
[0029] 圖6為本發(fā)明實施例1中云南紫薇組培苗移栽示意圖。

【具體實施方式】
[0030] 以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實施例 中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段，所用原料均為市售商品。
[0031] 實施例1云南紫薇的組培快繁方法
[0032] 1、11_12月份，云南紫薇種子成熟季節(jié)，采收已木質(zhì)化但未開裂的果實（圖1)，帶 回實驗室，在4°C的冰箱中低溫儲存2周。用稀釋100倍的洗潔靈浸泡30min，用清潔球磨 去果皮，然后在流水下沖洗2h以上，在超凈工作臺中用75%酒精滅菌lmin，用4%次氯酸鈉 溶液滅菌30min，用無菌水沖洗5-6遍。
[0033] (2)剖開滅菌過的果實，取出種子，用無菌解剖刀切掉種翅，以露出種子為宜。接種 到含0. 5g/L活性炭的1/2MS基本培養(yǎng)基中，暗培養(yǎng)1-2周左右，種子開始萌發(fā)出幼苗，然后 轉(zhuǎn)移至光下培養(yǎng)（圖2)。
[0034] 基本培養(yǎng)基為：l/2MS+0. 5g/L活性炭+30g/L蔗糖+6. 5g/L瓊脂，培養(yǎng)基pH值為 5. 8-6. 0,培養(yǎng)溫度25±2°C，光照時間12-14h/d，光照強度2000-30001x，可以獲得30-40% 的萌發(fā)率。
[0035] (3)選擇高度超過2cm的無菌播種苗，用無菌剪刀剪去根部及多余的葉片，接種到 叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，進行叢生芽誘導(dǎo)（圖3)。
[0036] 叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：WPM+0. 5-1. 0mg/L6-BA+0. 025-0. lmg/L IBA+20g/L 蔗糖 +6. 5g/L瓊脂，培養(yǎng)基pH值為5. 2-5. 4,培養(yǎng)溫度25±2°C，光照時間12-14h/d，光照強度 2000-30001x，每個外植體可以獲得3-5個再生芽。
[0037] (4)待叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)5-6周之后，選擇高度超過3cm，且生長健壯的叢生芽接種 到生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，進行生根誘導(dǎo)（圖4)。
[0038] 生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：l/2MS+0. 025-0. 05mg/L6-BA+0. 1-1. Omg/L ΙΒΑ+0. 5g/L 活性 炭+30g/L蔗糖+6. 5g/L瓊脂，培養(yǎng)基pH值為5. 8-6. 0,培養(yǎng)溫度25±2°C，光照時間12-14h/ d，光照強度2000-30001x，生根率達到100%。
[0039] (5)當(dāng)無菌苗根系生長完好達到3-4cm長，且不少于5根時（圖5)，打開封口膜在 組培室內(nèi)煉苗1周，然后用無菌水洗去組培苗根部的培養(yǎng)基，移栽至已滅菌的草炭與珍珠 巖體積比為3:1的混合基質(zhì)中（圖6)，套袋保持濕度，并保持每天噴水2-3次，然后逐漸降 低濕度并增加光照強度，2周后待移栽苗成活后可在溫室中進行常規(guī)培養(yǎng)，移栽成活率達到 70%以上。
[0040] 實施例2云南紫薇的組培快繁方法
[0041] (1)11-12月份，云南紫薇種子成熟季節(jié)，采收已木質(zhì)化但未開裂的果實，帶回實驗 室，在4°C的冰箱中低溫儲存2周。用稀釋100倍的洗潔靈浸泡30min，用清潔球磨去果皮， 然后在流水下沖洗2h以上，在超凈工作臺中用75%酒精滅菌lmin，用4%次氯酸鈉溶液滅 菌30min，用無菌水沖洗5-6遍。
[0042] (2)剖開滅菌過的果實，取出種子，用無菌解剖刀切掉種翅，以露出種子為宜。接種 到含0. 5g/L活性炭的1/2MS基本培養(yǎng)基中，暗培養(yǎng)1-2周左右，種子開始萌發(fā)出幼苗，然后 轉(zhuǎn)移至光下培養(yǎng)。
[0043] 基本培養(yǎng)基為：l/2MS+0. 5g/L活性炭+30g/L蔗糖+6. 5g/L瓊脂，培養(yǎng)基pH值為 5. 8-6. 0,培養(yǎng)溫度25±2°C，光照時間12-14h/d，光照強度2000-30001x，可以獲得30-40% 的萌發(fā)率。
[0044] (3)選擇高度超過2cm的無菌播種苗，用無菌剪刀剪去根部及多余的葉片，接種到 叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，進行叢生芽誘導(dǎo)。
[0045] 叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：WPM+0. 5-1. 0mg/L6-BA+0. 025-0. lmg/L IBA+20g/L 蔗糖 +6. 5g/L瓊脂，培養(yǎng)基pH值為5. 2-5. 4,培養(yǎng)溫度25±2°C，光照時間12-14h/d，光照強度 2000-30001x，每個外植體可以獲得4-7個再生芽。
[0046] (4)待叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)5-6周之后，選擇高度超過3cm，且生長健壯的叢生芽接種 到生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，進行生根誘導(dǎo)。
[0047] 生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：l/2MS+0. 025-0. 05mg/L6-BA+0. 1-1. Omg/L ΙΒΑ+0. 5g/L 活性 炭+30g/L蔗糖+6. 5g/L瓊脂，培養(yǎng)基pH值為5. 8-6. 0,培養(yǎng)溫度25±2°C，光照時間12-14h/ d，光照強度2000-30001x，生根率達到100%。
[0048] (5)當(dāng)無菌苗根系生長完好達到3-4cm長，且不少于5根時，打開封口膜在組培室 內(nèi)煉苗1周，然后用無菌水洗去組培苗根部的培養(yǎng)基，移栽至已滅菌的草炭與珍珠巖體積 比為3:1的混合基質(zhì)中，套袋保持濕度，并保持每天噴水2-3次，然后逐漸降低濕度并增加 光照強度，2周后待移栽苗成活后可在溫室中進行常規(guī)培養(yǎng)，移栽成活率達到70%以上。 [0049] 雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在 本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因 此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進，均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。
【權(quán)利要求】
1. 云南紫薇的組培快繁方法，其特征在于，在云南紫薇種子成熟季節(jié)，采收已木質(zhì)化但 未開裂的果實，在4°c條件下儲存2周，然后對整個果實進行滅菌，剖開果實，取出種子，去 除種翅，接種于含〇. 5g/L活性炭的1/2MS基本培養(yǎng)基中，暗培養(yǎng)1-2周直到種子萌發(fā)，然后 轉(zhuǎn)到光下進行培養(yǎng)；將高度超過2cm的萌發(fā)苗接種到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)5-6周，獲 得大量叢生芽，將叢生芽接種到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)6-8周，直到所有的無菌苗均生根，然 后對生根苗進行煉苗，移栽出瓶。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 11-12月份，云南紫薇種子成熟季節(jié)，采收已木質(zhì)化但未開裂的果實，在4°C冰箱中 儲存2周，用稀釋100倍的洗潔靈浸泡30min，用清潔球磨去果皮，然后在流水下沖洗2h以 上，在超凈工作臺中用75%酒精滅菌lmin，然后用4%次氯酸鈉溶液滅菌30min，用無菌水 沖洗5-6遍； (2) 剖開滅菌過的果實，取出種子，用無菌解剖刀切掉種翅，以露出種子為宜，接種到含 0. 5g/L活性炭的1/2MS基本培養(yǎng)基中，暗培養(yǎng)1-2周，種子開始萌發(fā)出幼苗，然后轉(zhuǎn)移至光 下培養(yǎng)； 基本培養(yǎng)基為：l/2MS+0. 5g/L活性炭+30g/L蔗糖+6. 5g/L瓊脂，pH5. 8-6. 0 ;培養(yǎng)溫度 25±2°C，光照時間 12-14h/d，光照強度 2000-30001x ; (3) 選擇高度超過2cm的無菌播種苗，用無菌剪刀剪去根部及多余的葉片，接種到叢生 芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，進行叢生芽誘導(dǎo)； 叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：WPM+0. 5-L 0mg/L6-BA+0. 025-0. lmg/L IBA+20g/L 蔗糖 +6. 5g/ L瓊脂，pH5. 2-5. 4 ;培養(yǎng)溫度25±2°C，光照時間12-14h/d，光照強度2000-30001x ; (4) 待叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)5-6周之后，選擇高度超過3cm，且生長健壯的叢生芽接種到生 根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，進行生根誘導(dǎo)； 生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：l/2MS+0. 025-0. 05mg/L6-BA+0. 1-1. Omg/L ΙΒΑ+0. 5g/L 活性炭 +30g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂，ρΗ5·8-6·0 ;培養(yǎng)溫度25±2°C，光照時間12-14h/d，光照強度 2000-30001x ； (5) 當(dāng)無菌苗根系生長完好達到3-4cm長，且不少于5根時，打開封口膜在組培室內(nèi)煉 苗1周，然后用無菌水洗去組培苗根部的培養(yǎng)基，移栽至已滅菌的草炭與珍珠巖體積比為 3:1的混合基質(zhì)中，套袋保持濕度，并保持每天噴水2-3次，然后逐漸降低濕度并增加光照 強度，2周后待移栽苗成活后在溫室中進行常規(guī)培養(yǎng)。
3. 用于云南紫薇組培的基本培養(yǎng)基，其特征在于，所述基本培養(yǎng)基為：l/2MS+0. 5g/L 活性炭 +3〇g/L 鹿糖 +6. 5g/L 瓊脂，pH5. 8-6. 0。
4. 用于云南紫薇組培的叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其特征在于，所述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為： WPM+0. 5-1. 0mg/L6-BA+0. 025-0. lmg/L IBA+20g/L 蔗糖 +6. 5g/L 瓊脂，ρΗ5· 2-5. 4。
5. 用于云南紫薇組培的生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其特征在于，所述生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基為： 1/2MS+0. 025-0. 05mg/L6-BA+0. 1-1. Omg/L ΙΒΑ+0. 5g/L 活性炭 +30g/L 蔗糖 +6. 5g/L 瓊脂， ρΗ5· 8_6· 0〇
【文檔編號】A01H4/00GK104186317SQ201410394862
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年8月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月12日
【發(fā)明者】張啟翔, 王軻, 潘會堂, 蔡明 , 程堂仁, 王佳 申請人:北京林業(yè)大學(xué)