一種血小板液態(tài)保存方法以及保存裝置制造方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種血小板液態(tài)保存方法以及保存裝置，本發(fā)明是向裝有濃縮或者單采血小板的密閉空間保存期間保持溫度為22±2℃，氫氣體積濃度為3.5％；保存裝置為一密閉恒溫可通氫氣裝置。本發(fā)明可降低濃縮或單采血小板22±2℃保存期間，氫氣可以降低血小板激活和CD62p表達(dá)水平，減輕血小板保存損傷，提高血小板體外功能。
【專利說(shuō)明】【技術(shù)領(lǐng)域】
[〇〇〇1] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，是一種將氫氣用于血小板22±2°C液態(tài)保存的方法以 及專用設(shè)備。 一種血小板液態(tài)保存方法以及保存裝置 【背景技術(shù)】
[0002] 血小板是血液中重要的止血和凝血成分，血小板輸注是臨床上治療血小板減少或 血小板功能障礙引起出血的不可替代的治療方法。（22±2)°C持續(xù)振蕩保存是目前國(guó)內(nèi)外 公認(rèn)的血小板保存方法，但是隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)，血小板會(huì)發(fā)生一系列形態(tài)、功能和代謝 上的改變-血小板保存損傷（platelet storage lesion)。
[0003] 盡管已有大量新技術(shù)，如高通透的血小板保存袋、血小板保存添加劑、低溫及冷凍 保存血小板等，應(yīng)用于血小板貯存，但是迄今為止還沒(méi)有找到降低血小板保存損傷的最佳 貯存方法。
[0004] 氫氣是1種非常理想的抗氧化物質(zhì)，可改善多種臟器的缺血再灌注損傷。至今未 見(jiàn)有關(guān)采用氫氣降低血小板保存損傷，提高血小板保存質(zhì)量的相關(guān)報(bào)道。也無(wú)任何有關(guān)氫 氣降低存儲(chǔ)血小板激活和CD62P表達(dá)水平、以及氫氣用于血小板22±2°C液態(tài)保存的相關(guān) 報(bào)道。將傳統(tǒng)血小板保存箱連接氫氣可制備新型血小板保存箱。
[0005] 所述的血小板保存損傷，是指隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)，血小板會(huì)發(fā)生一系列形態(tài)、功 能和代謝上的改變，導(dǎo)致回輸后血小板功能下降。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種血小板液態(tài)保存方法，本發(fā)明的另一目的在于提供一 種血小板液態(tài)保存裝置。
[0007] 本發(fā)明提供了一種血小板液態(tài)保存方法，該方法包括下述步驟：
[0008] 向裝有濃縮或者單采血小板的血小板保存袋血袋中緩慢注入純氫氣（氣體加在 血小板液面上，避免產(chǎn)生氣泡，10升/分鐘，持續(xù)充氣2分鐘），氫氣溶解至血小板液體中形 成飽和氫水。保存期間將血小板保存袋放入密閉空間（血小板保存箱），密閉空間內(nèi)保持氫 氣體積濃度為2-10%，優(yōu)選3. 5%，維持血小板液體內(nèi)氫氣濃度25 μ M/L以上。添加氫氣的 濃縮或者單采血小板可在血小板保存箱22±2°C保存5天。
[0009] 其中密閉空間內(nèi)保持氫氣體積百分比為2%已可降低血小板保存損傷，提高血 小板保存質(zhì)量，氫氣體積濃度超過(guò)10 %易產(chǎn)生氫氣爆炸，故密閉空間的氫氣濃度選擇 2-10% ；
[〇〇1〇] 所述的血小板液態(tài)保存方法，濃縮或者單采血小板在保存過(guò)程中還需要進(jìn)行振 蕩，振蕩較佳為水平振蕩，振幅為50mm，頻率60周/分。
[〇〇11] 所述的濃縮血小板是指采用血小板血漿法二次離心法制備，參見(jiàn)文獻(xiàn)：顧?；?，錢 寶華，馬秀珍，宋耘，查占山，郭峰；應(yīng)用小劑量第2信使調(diào)節(jié)劑混合物冰凍保存血小板的體 外功能研究；中國(guó)輸血雜志；2006, 19(6) ;454-456。
[0012] 所述的單采血小板是指用血液細(xì)胞分離機(jī)采集制備，參見(jiàn)文獻(xiàn)：王晨，馬秀珍，朱 燕霞，顧?；郏奂t，錢寶華；機(jī)采血小板獻(xiàn)血者整體護(hù)理的體會(huì)；深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志； 2010,20(2) ;125-127。
[0013] 所述的血小板液體是溶解在自體血漿中的血小板。
[0014] 保存期間保持溫度為22±2°C，作用是維持血小板的生理活性，因?yàn)?°C保存會(huì)導(dǎo) 致血小板激活。
[0015] 氫氣是裝在例如200巴下的鋼瓶中市售，或是在高度隔熱容器內(nèi)溫度為-253°c以 液態(tài)形式儲(chǔ)存。
[0016] 本發(fā)明還提供了一種血小板液態(tài)保存裝置，整體為密閉箱體，包括箱外殼、內(nèi)襯 箱、溫控調(diào)節(jié)裝置、氣體調(diào)節(jié)裝置、電源裝置等，所述溫控調(diào)節(jié)裝置、氣體調(diào)節(jié)裝置分別與電 源裝置電連接；其特征在于所述的氣體調(diào)節(jié)裝置為氫氣調(diào)節(jié)裝置；該血小板保存裝置還包 括振蕩裝置，振蕩裝置與電源裝置電連接。
[0017] 所述氫氣調(diào)節(jié)裝置包括氫氣探測(cè)器，氫氣探測(cè)器位于內(nèi)襯箱的頂部。
[0018] 所述振蕩裝置為水平振蕩裝置，包括振幅調(diào)控開(kāi)關(guān)，設(shè)定振幅為50_，頻率60周/ 分；
[0019] 所述振蕩裝置還包括搖動(dòng)支架，搖動(dòng)支架設(shè)置于內(nèi)襯箱內(nèi)部，搖動(dòng)支架上有4-10 層隔板，優(yōu)選6層；
[0020] 所述的溫控調(diào)節(jié)裝置包括溫控開(kāi)關(guān)和溫控感應(yīng)探頭，溫度感應(yīng)探頭放置于內(nèi)襯 箱的頂部，與溫控開(kāi)關(guān)相連，溫控開(kāi)關(guān)安裝于箱體外下部調(diào)控區(qū)。
[0021] 所述血小板液態(tài)保存裝置還包括報(bào)警裝置，報(bào)警裝置與電源裝置電連接。
[0022] 所述箱體的長(zhǎng)寬高尺寸為（1000-1500)mm*(400-800)mm*(400-600)mm，優(yōu)選 1200mm*600mm*550mm，箱內(nèi)支架的長(zhǎng)寬高尺寸為（900-1100)mm*(450-550)mm*(400-500) _，優(yōu)選 l〇〇〇nim*500mm*450mm，隔層間距厚 60mm。
[0023] 所述箱體外部設(shè)置有電源開(kāi)關(guān)、溫控開(kāi)關(guān)、溫度和氣體比例顯示屏、振幅調(diào)控開(kāi) 關(guān)、報(bào)警顯示、氫氣進(jìn)氣口等；
[0024] 所述箱體采用隔熱材料，箱門為雙層玻璃或其他材質(zhì)。
[0025] 本發(fā)明的有益效果：
[0026] 本發(fā)明經(jīng)血小板體外保存質(zhì)量檢測(cè)：添加氫氣后血小板平均體積（MPV)、血小板 體積分布寬度（PDW)、pH值和血小板⑶62p表達(dá)均顯著改善。
[0027] 本發(fā)明可降低濃縮或單采血小板22±2°C保存期間損失，氫氣可以降低血小板激 活和CD62p表達(dá)水平，減輕血小板保存損傷，提高血小板體外功能。 【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0028] 圖1是本發(fā)明的正視圖；
[0029] 圖2是本發(fā)明的后視圖；
[0030] 1-電源開(kāi)關(guān)；2-溫控開(kāi)關(guān)；3-溫度和氣體比例顯示屏；
[0031] 4-振幅調(diào)控開(kāi)關(guān)；5-報(bào)警顯示；6-振蕩開(kāi)關(guān)；
[0032] 7-開(kāi)門把手；8-內(nèi)襯箱；9-隔板；
[0033] 10-電源線；11-氫氣進(jìn)氣口； 12-溫控感應(yīng)探頭；
[0034] 13-氫氣探測(cè)器；14-搖動(dòng)支架。 【具體實(shí)施方式】
[0035] 現(xiàn)結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)描述，但本發(fā)明的實(shí)施不僅限于此。
[0036] 實(shí)施例1
[0037] 通過(guò)0. 22 μ m濾器（Millipore美國(guó)）向裝有濃縮或者單采血小板的密閉血袋中 緩慢注入純氫氣（氣體加在血小板液面上，避免產(chǎn)生氣泡，10升/分鐘，持續(xù)充氣2分鐘）， 氫氣溶解至血小板液體中形成飽和氫水。保存期間將血小板保存袋放入密閉空間（血小板 保存箱），密閉空間內(nèi)保持氫氣體積濃度為3. 5%，維持血小板液體內(nèi)氫氣濃度25 μ M/L以 上。添加氫氣的濃縮或者單采血小板可在血小板保存箱22±2°C保存5天。
[0038] 實(shí)施例2
[0039] 保存方法同實(shí)施例1，不同之處在于密閉空間內(nèi)保持氫氣體積濃度為2%。
[0040] 實(shí)施例3
[0041] 保存方法同實(shí)施例1，不同之處在于密閉空間內(nèi)保持氫氣體積濃度為10%。
[0042] 實(shí)施例4
[0043] 一種血小板液態(tài)保存裝置，整體為密閉箱體，包括箱外殼、內(nèi)襯箱（8)、溫控調(diào)節(jié)裝 置（0MR0N/歐姆龍型號(hào)：E5C4)、氣體調(diào)節(jié)裝置、振蕩裝置（匡貝GE-ID型振蕩架體，）、電源 裝置（上海海向儀器設(shè)備廠，CHW-80L)、報(bào)警裝置（上海海向儀器設(shè)備廠，CHW-80L)，溫控 調(diào)節(jié)裝置、振蕩裝置、氫氣調(diào)節(jié)裝置、控報(bào)警裝置分別與電源裝置電連接；氣體調(diào)節(jié)裝置為 氫氣調(diào)節(jié)裝置（億優(yōu)，3HYT氫氣傳感器）；氫氣調(diào)節(jié)裝置包括氫氣探測(cè)器（13)，氫氣探測(cè) 器位于內(nèi)襯箱的頂部；振蕩裝置為水平振蕩裝置，包括振幅調(diào)控開(kāi)關(guān)，振幅為50_，頻率60 周/分；振蕩裝置包括搖動(dòng)支架（14)，搖動(dòng)支架設(shè)置于內(nèi)襯箱內(nèi)部，搖動(dòng)支架上有6層隔 板（9);溫控調(diào)節(jié)裝置包括溫控開(kāi)關(guān)（2)和溫控感應(yīng)探頭（12)，溫度感應(yīng)探頭放置于內(nèi)襯 箱的頂部，與溫控開(kāi)關(guān)（2)相連，溫控開(kāi)關(guān)安裝于箱體外下部調(diào)控區(qū)。箱體的長(zhǎng)寬高尺寸為 1200mm*600mm*550mm，箱內(nèi)支架的長(zhǎng)寬高尺寸為1000mm*500mm*450mm，隔層間距厚60mm。 電源開(kāi)關(guān)（1)、溫控開(kāi)關(guān)（2)、溫度和氣體比例顯示屏（3)、振幅調(diào)控開(kāi)關(guān)（4)、報(bào)警顯示（5)、 氫氣進(jìn)氣口（11)設(shè)置于箱體外部。
[0044] 實(shí)施例5
[0045] 一種血小板液態(tài)保存裝置，同實(shí)施例2,不同之處在于箱體的長(zhǎng)寬高尺寸為 1000mm*800mm*400mm，，箱內(nèi)支架的長(zhǎng)寬高尺寸為 900mm*550mm*400mm。
[0046] 試驗(yàn)例1 :檢測(cè)血小板體外功能
[0047] 一、實(shí)驗(yàn)分組：
[0048] 隨機(jī)取新鮮血小板，包括濃縮血小板12份[40ml/份，ACD-A抗凝、（22 ±2) °C持續(xù) 振蕩保存]、機(jī)器單采血小板10份[40ml/份，ACD-A抗凝、（22±2) °C持續(xù)振蕩保存];濃縮 血小板采用富含血小板血楽法二次離心法（1617g8min和3423g8min)制備，單采血小板：用 血液細(xì)胞分離機(jī)采集制備。實(shí)驗(yàn)前（d0)檢測(cè)每份血小板的體外功能指標(biāo)，作為新鮮對(duì)照； 將每份血小板通過(guò)無(wú)菌接管機(jī)分裝成2袋，隨機(jī)取其中1半分別作為濃縮血小板實(shí)驗(yàn)組（η =12)和單采血小板實(shí)驗(yàn)組（η = 12):
[0049] 二、檢測(cè)血小板體外功能
[0050] 血小板計(jì)數(shù)（P11)、血小板平均體積（MPV)、血小板體積分布寬度（PDW)應(yīng)用用 全自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀直接測(cè)定；pH、葡萄糖和乳酸水平采用血?dú)夥治鰞x直接測(cè)定；血小板 ⑶62p表達(dá)采用細(xì)胞分析儀檢測(cè)：分別從濃縮血小板和單采血小板的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中取 血小板5 μ L/份，加入30 μ L PBS中，再分別各加入5 μ L的CD62p-FITC和CD41-PE，避光孵 育20min，洗滌、3423g離心8min后加入300 μ L1 %冷多聚甲醛固定，流式細(xì)胞儀檢測(cè)，以 ⑶41陽(yáng)性細(xì)胞設(shè)門，計(jì)算⑶62ρ陽(yáng)性細(xì)胞比例。
[0051] 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
[0052] 1、濃縮血小板添加飽和氫氣后保存期間Pit、MPV、PDW代謝指標(biāo)和體外功能的變 化與新鮮血小板相比，保存5d后濃縮血小板的Pit明顯減少（P〈0.01)，MPV和PDW均明顯 增加（P〈0. 01或〈0. 05)，實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組的變化幅度更?。≒>0. 05);對(duì)照組pH值明顯下降 (P〈0. 01)，實(shí)驗(yàn)組pH值雖也有所降低（P>0. 05)，但明顯高于對(duì)照組（P〈0. 05);葡萄糖含量 均明顯下降（P〈〇. 01)、乳酸水平及⑶62p表達(dá)水平均明顯增加（P〈0. 01)，除⑶62p表達(dá)水 平實(shí)驗(yàn)組明顯低于對(duì)照組（P〈〇. 01)外，其他指標(biāo)2組的變化無(wú)明顯差異（P>0. 05)。（表1)
[0053] 結(jié)果表明，氫氣可明顯改善濃縮血小板22±2°C保存質(zhì)量。
[0054] 2、單采血小板添加飽和氫氣后保存期間Pit、MPV、PDW代謝指標(biāo)和體外功能的變 化與新鮮血小板相比，單采血小板保存5d后單采血小板的Pit有所下降（P>0. 05), MPV和 PDW均明顯增加（P〈0. 01或〈0. 05)，實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組的變化幅度更小（P>0. 05);對(duì)照組pH 值明顯下降（P〈〇. 01)，實(shí)驗(yàn)組也有所降低（P>〇. 05)，但明顯高于對(duì)照組（P〈0. 05);葡萄糖 含量均明顯下降（P〈〇. 01)，乳酸水平、⑶62p表達(dá)水平均明顯增加（P〈0. 01)，除⑶62p表達(dá) 水平實(shí)驗(yàn)組明顯低于對(duì)照組（P〈〇. 05)外，其他指標(biāo)2組的變化無(wú)明顯差異（P>0. 05)。（表 2)
[0055] 結(jié)果表明，氫氣可明顯改善單采血小板22 ±2°C保存質(zhì)量。
[0056] 附表中，表1是本發(fā)明在濃縮血小板22±2°C保存中降低血小板保存損傷的情況； 表2是是本發(fā)明在單采血小板22±2°C保存中降低血小板保存損傷的情況。其中：保存當(dāng) 天為新鮮采集的血小板；保存第5天對(duì)照組為未處理組（采集后的濃縮或者單采血小板不 添加氫氣，直接保存在常規(guī)血小板保存箱內(nèi)）；保存第5天實(shí)驗(yàn)組為添加氫氣組（按實(shí)施例 1方法保存的氫氣組）。
[0057] 上述實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明可降低濃縮或單采血小板22±2°C保存期間，血小板形態(tài)變 化、pH值變化，及血小板表面CD62p表達(dá)水平，減輕血小板保存損傷，提高血小板體外功能。
[0058] 因此本發(fā)明可用做血小板22±2°C保存。
[0059] 以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本行業(yè)的技術(shù) 人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說(shuō)明書(shū)中描述的只是說(shuō)明本 發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變 化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書(shū)及其 等同物界定。
[0060]
【權(quán)利要求】
1. 一種血小板液態(tài)保存方法，該方法包括下述步驟：向裝有濃縮或者單采血小板的密 閉血袋中注入純氫氣，氣體加在血小板液面上，10升/分鐘，持續(xù)充氣2分鐘，氫氣溶解至血 小板液體中形成飽和氫水；保存期間將血小板保存袋放入密閉空間，密閉空間內(nèi)保持氫氣 體積濃度為2-10 %，維持溫度22 ± 2°C。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的血小板液態(tài)保存方法，其特征在于，其中保存期間密閉空間 內(nèi)保持氫氣體積濃度為3. 5%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的血小板液態(tài)保存方法，其特征在于：濃縮或者單采血小板在 保存過(guò)程中進(jìn)行水平振蕩，振幅為50mm，頻率60周/分。
4. 一種血小板液態(tài)保存裝置，整體為密閉箱體，包括箱外殼、內(nèi)襯箱、溫控調(diào)節(jié)裝置、氣 體調(diào)節(jié)裝置、電源裝置，所述溫控調(diào)節(jié)裝置、氣體調(diào)節(jié)裝置分別與電源裝置電連接；其特征 在于所述的氣體調(diào)節(jié)裝置為氫氣調(diào)節(jié)裝置；該血小板保存裝置還包括振蕩裝置，振蕩裝置 與電源裝置電連接。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的血小板液態(tài)保存裝置，特征在于，所述氫氣調(diào)節(jié)裝置包括氫 氣探測(cè)器，氫氣探測(cè)器位于內(nèi)襯箱的頂部。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的血小板液態(tài)保存裝置，特征在于，所述振蕩裝置為水平振蕩 裝置，包括振幅調(diào)控開(kāi)關(guān)，設(shè)定振幅為50mm，頻率60周/分；所述振蕩裝置還包括搖動(dòng)支 架，搖動(dòng)支架設(shè)置于內(nèi)襯箱內(nèi)部，搖動(dòng)支架上有4-10層隔板。
7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的血小板液態(tài)保存裝置，特征在于，所述的溫控調(diào)節(jié)裝置包括 溫控開(kāi)關(guān)和溫控感應(yīng)探頭，溫度感應(yīng)探頭放置于內(nèi)襯箱的頂部，與溫控開(kāi)關(guān)相連，溫控開(kāi)關(guān) 安裝于箱體外下部調(diào)控區(qū)。
8. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的血小板液態(tài)保存裝置，特征在于，所述血小板液態(tài)保存裝置 還包括報(bào)警裝置，報(bào)警裝置與電源裝置電連接；所述箱體采用隔熱材料，箱門為雙層玻璃或 其他材質(zhì)。
9. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的血小板液態(tài)保存裝置，特征在于，所述箱體的 長(zhǎng)寬高尺寸為1000-1500mm*400-800mm*400-600mm，箱內(nèi)支架的長(zhǎng)寬高尺寸為 900-1100mm*450-550mm*400-500mm，隔層間距厚 60mm。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的血小板液態(tài)保存裝置，特征在于，所述箱體的長(zhǎng)寬高尺寸為 1200mm*600mm*550mm，箱內(nèi)支架的長(zhǎng)寬高尺寸為1000mm*500mm*450mm，隔層間距厚60mm。
【文檔編號(hào)】A01N1/02GK104054696SQ201410265211
【公開(kāi)日】2014年9月24日 申請(qǐng)日期:2014年6月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月16日
【發(fā)明者】顧海慧, 錢寶華, 查占山, 臧燕, 郭慧軍 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)