保水劑與煙草青枯病菌拮抗菌在田間生產(chǎn)中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了保水劑與煙草青枯病病原菌拮抗菌共同在田間生產(chǎn)中的應(yīng)用，該保水劑具有延長拮抗菌在土壤中定殖的作用，由于延長了拮抗菌在土壤中的定殖，起到了更好的防病效果，對煙草青枯病具有良好的防治效果。
【專利說明】保水劑與煙草青枯病菌拮抗菌在田間生產(chǎn)中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于微生物和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)領(lǐng)域，涉及保水劑與煙草青枯病菌拮抗菌在田間生產(chǎn)中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]保水劑又稱高吸水劑、保濕劑、超強(qiáng)吸水樹脂、親水智多能交聚物等，是利用超強(qiáng)吸水性樹脂制成的一種具有超強(qiáng)吸水保水能力的功能性高分子聚合物。這類物質(zhì)含有大量結(jié)構(gòu)特異的強(qiáng)吸水基因團(tuán)，它能吸收自身重量幾百倍的水分。由于分子結(jié)構(gòu)交聯(lián)，分子網(wǎng)絡(luò)所吸水分不能用一般物理方法擠出，故具有很強(qiáng)的保水性能。保水劑具有反復(fù)吸水功能，吸水后膨脹為水凝膠，在干燥條件下又能將水分緩慢釋放供作物利用。保水劑能增強(qiáng)土壤保水性，改善土壤結(jié)構(gòu)，提高降雨入滲率，減少土壤水分和養(yǎng)分的流失，提高降雨、灌溉水和土壤蓄積水的利用率。此外保水劑還具有選擇吸液性、耐寒性、透水性、緩釋性、膨脹性等特點(diǎn)。
[0003]保水劑廣泛用于土壤改良劑，許多研究表明，土壤中施用保水劑可以改善土壤物理水分性狀，增大土壤持水性，增加對肥料的吸附作用，從而達(dá)到促進(jìn)作物出苗、成活、提高作物干物質(zhì)積累，促進(jìn)根系發(fā)育的目的。保水劑也可以作為培養(yǎng)基質(zhì)用于花卉、蔬菜等作物的育苗。趙瑞等在黃瓜上的研究結(jié)果表明，在育苗基質(zhì)中添加保水劑明顯改善了基質(zhì)的供水狀況，促進(jìn)了秧苗的根系生長發(fā)育，改善了秧苗的生理活性，利于形成壯苗并且可提高黃瓜的產(chǎn)量。
[0004]近年來，隨著科技進(jìn)步和人們環(huán)保意識的加強(qiáng)，生物防控方法引起了人們的高度重視。生物防控?zé)煵萸嗫莶【褪抢梦⑸镩g的拮抗、競爭、捕食、寄生等關(guān)系抑制病原菌的生長發(fā)育與繁殖，從而減少病害的發(fā)生。生物防控?zé)煵萸嗫莶≈饕譃橐韵聝蓚€方面:1、利用從煙草大田的根際土壤中篩選的拮抗菌來防控?zé)煵萸嗫莶?。這樣回接于原位生態(tài)環(huán)境中更容易定殖，更易與病原菌競爭生態(tài)位點(diǎn)。拮抗菌是通過抑制病原菌的生長和誘導(dǎo)煙株的系統(tǒng)抗性來起作用的。2、利用茄科勞爾氏菌無致病力菌株來抑制致病性茄科勞爾氏菌的生長。細(xì)菌素是一種細(xì)菌所產(chǎn)生的，對同種細(xì)菌或關(guān)系較近的細(xì)菌有殺傷作用、大多含蛋白的抗菌物質(zhì)。
[0005]但如何延長拮抗菌在田間的定制時(shí)間，充分發(fā)揮其作用是本領(lǐng)域的技術(shù)人員亟待解決的技術(shù)問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)所存在的上述不足，本發(fā)明一方面涉及保水劑與煙草青枯病菌拮抗菌在田間生產(chǎn)中的應(yīng)用，另一方面，還涉及煙草青枯病菌拮抗菌本身。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，擬采用如下技術(shù)方案:
[0007]本發(fā)明涉及保水劑與煙草青枯病菌拮抗菌共同在田間生產(chǎn)中的應(yīng)用。
[0008]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方式中，所述的煙草青枯病菌拮抗菌Ba-S屬于解淀粉芽孢桿菌或其直接傳代物，于2013年9月25日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏號為CGMCCN0.8262。
[0009]在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實(shí)施方式中，所述的田間是指煙草種植田。
[0010]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方式中，所述的保水劑是丙稀鹽酸-丙烯酰胺類保水劑(BJ2101)，購自北京漢力淼新技術(shù)有限公司。
[0011]在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明還涉及所述的煙草青枯病菌拮抗菌。
[0012]在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明還涉及保水劑在延長煙草青枯病菌拮抗菌定殖時(shí)間中的應(yīng)用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1拮抗菌對煙草青枯病菌的拮抗作用；
[0014]圖2拮抗菌數(shù)量在保水劑中動態(tài)監(jiān)測；
[0015]圖3 土壤中拮抗菌在保水劑中的數(shù)量動態(tài)變化；
[0016]圖4保水劑延長拮抗菌定殖以防控?zé)煵萸嗫莶　?br> [0017]微生物信息
[0018]本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方式以及【具體實(shí)施方式】中所使用的煙草青枯病菌拮抗菌Ba-S解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)已經(jīng)保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號CGMCCN0.8262，保藏地址為:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，保藏日期為2013年9月25日。
【具體實(shí)施方式】
[0019]下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對本發(fā)明的方法作進(jìn)一步詳細(xì)地說明。
[0020]一、煙草青枯病菌拮抗菌微生物的篩選
[0021 ] 選擇對煙草青枯病病原菌具有較好拮抗作用的一株拮抗菌Ba-S (Bacil Iusamyloliquefaciens解淀粉芽孢桿菌，中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心CGMCCN0.8262)，此菌株篩選自煙草青枯病發(fā)病嚴(yán)重?zé)熖镏形窗l(fā)病的煙株根際土壤中。按照稀釋涂布平板法將土壤樣品溶液稀釋到10-4~10-6，然后均勻的涂布于改良后的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上(葡萄糖IOg,蛋白胨5g,牛肉膏3g,酵母膏0.5g,去離子水1000mL,PH7.0~7.2，瓊脂粉20g，115°C滅菌30min)，在30°C黑暗條件下培養(yǎng)24h待菌落長出后，將青枯病病原菌48h發(fā)酵菌懸液均勻噴灑在平板上，進(jìn)行培養(yǎng)觀察，根據(jù)抑菌圈的有無、大小來進(jìn)行篩選并純化。篩選到的解淀粉芽孢桿菌Ba-S主要生物學(xué)特征為:革蘭氏染色陽性G+，細(xì)胞形態(tài)為桿狀，芽孢卵圓形，孢囊膨大，菌落白色、半透明，呈圓或不規(guī)則形，有鞭毛，可運(yùn)動，接觸酶實(shí)驗(yàn)陽性，氧化酶陰性，產(chǎn)纖維素酶，糖醇類發(fā)酵試驗(yàn)甘油、L-阿拉伯糖、D-木糖、葡萄糖、果糖、麥芽糖、蔗糖、甘露糖、淀粉等陽性，半乳糖、山梨糖、鼠李糖、木糖醇等陰性。
[0022]圖1平板中心接種拮抗菌，然后將煙草青枯病菌48h發(fā)酵液噴灑在平板上(約
0.5mL),于30°C微生物培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h后發(fā)現(xiàn),拮抗菌周圍病原菌的生長明顯被抑制,拮抗圈達(dá)到11_。由此可見，拮抗菌Ba-S對煙草青枯病菌有顯著的拮抗作用。
[0023]二、煙草青枯病菌拮抗菌在保水劑中的定殖[0024]將所篩選的煙草青枯病菌拮抗菌接種于牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中，170r/min，30°C搖床培養(yǎng)36h后，菌液濃度達(dá)到107cfu/mL，按1:16.85的吸水倍率接種于丙稀鹽酸-丙烯酰胺類保水劑(BJ2101，粒徑為M號)中，以接種于相同量的培養(yǎng)基中設(shè)為對照，于30°C下培養(yǎng)于微生物培養(yǎng)箱中，每隔5天測定保水劑中拮抗菌的數(shù)量，繪制數(shù)量動態(tài)監(jiān)測圖(圖2)。從圖中可以看出，煙草青枯病菌拮抗菌的數(shù)量在保水劑中0-10天內(nèi)呈先下降后升高的趨勢，65天內(nèi)數(shù)量級上未發(fā)生變化。而拮抗菌在液體培養(yǎng)基中呈一直下降趨勢，接種10天后保水劑中Ba-S拮抗菌數(shù)量顯著高于液體培養(yǎng)基，從而表明，保水劑對煙草青枯病菌拮抗菌具有延長定殖的作用。
[0025]三、保水劑與煙草青枯病菌拮抗菌在田間生產(chǎn)中的應(yīng)用
[0026]3.1保水劑延長煙草青枯病菌拮抗菌在田間的定殖實(shí)驗(yàn)
[0027]將拮抗菌Ba-S在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，NaC15.0g,ρΗ7.0)中，170r/min，30°C搖床培養(yǎng)36h后，菌液濃度達(dá)到107cfu/mL,以1:16.85的吸水倍率接種于丙稀鹽酸-丙烯酰胺類保水劑中。在煙草移栽時(shí)將吸附拮抗菌的保水劑施入到移栽穴土壤中，將煙苗栽于保水劑上，保水劑施用量為100g/株煙。定期從土壤中取得根際土，測定土壤中拮抗菌的數(shù)量動態(tài)變化。從圖3中可以看出，在長達(dá)90天的測定中，由于保水劑的存在，土壤中的拮抗菌只下降了一個數(shù)量級，這一結(jié)果充分說明，該保水劑具有延長拮抗菌在土壤中定殖的作用。
[0028]3.2拮抗菌保水劑防控?zé)煵萸嗫莶?br> [0029]將拮抗菌Ba-S在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，NaC15.0g,ρΗ7.0)中，170rpm/min，30°C搖床培養(yǎng)36h后，菌液濃度達(dá)到107cfu/mL,以1:16.85的吸水倍率接種于丙稀鹽酸-丙烯酰胺類保水劑中。在煙草移栽時(shí)將吸附拮抗菌的保水劑施入到移栽穴土壤中，將煙苗栽于保水劑上，保水劑施用量為100g/株煙。由于延長了拮抗菌在土壤中的定殖，解決了以往拮抗菌施入土壤快速死亡的難題，因此可以更好地抑制土壤中的青枯病菌，真正有效達(dá)到防控?zé)煵萸嗫莶〉哪康?，防控率高達(dá)72.08% (表1和圖4)。
[0030]防控率=[(對照病情指數(shù)一處理病情指數(shù))對照病情指數(shù)]X 100%
[0031]表1拮抗菌保水劑對煙草青枯病的防控效果
[0032]
【權(quán)利要求】
1.保水劑與煙草青枯病菌拮抗菌共同在田間生產(chǎn)中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，所述的煙草青枯病病原菌拮抗菌保藏號為CGMCCN0.8262的解淀粉芽孢桿菌或其直接傳代物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，所述的田間是指煙草種植田；優(yōu)選的，所述的應(yīng)用是指用于防治煙草青枯病的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，所述的保水劑是丙稀鹽酸-丙烯酰胺類保水劑。
5.權(quán)利要求2所述的 煙草青枯病菌拮抗菌。
6.保水劑在延長煙草青枯病菌拮抗菌定殖時(shí)間中的應(yīng)用。
【文檔編號】A01P1/00GK103931658SQ201410173900
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年4月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月28日
【發(fā)明者】劉艷霞, 李想 申請人:貴州省煙草科學(xué)研究院