莫哈韋芽孢桿菌kjs-3作為飼料添加劑的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了莫哈韋芽孢桿菌KJS-3作為飼料添加劑的應(yīng)用。該莫哈韋芽孢桿菌KJS-3（保藏編號(hào)：KCCM10961P），其芽孢轉(zhuǎn)化率達(dá)99%以上，可實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。本菌株對(duì)常見的各種致病真菌、致病細(xì)菌，特別是對(duì)抗耐萬古霉素腸球菌和抗藥性金黃色葡萄球菌等有害菌具有廣譜抗菌特性。本菌株能產(chǎn)生各種消化酶、維生素以及乳酸等物質(zhì)，是對(duì)動(dòng)物安全無毒的益生菌，可以作為飼料添加劑，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，能促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)。
【專利說明】莫哈韋芽孢桿菌KJS-3作為飼料添加劑的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及莫哈韋芽孢桿菌KJS-3作為飼料添加劑的應(yīng)用，屬于微生物領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]莫哈韋芽孢桿菌最早是1994年從莫哈韋沙漠地區(qū)分離得到的一類新的芽孢桿菌屬，它在菌種分類學(xué)上，與解淀粉芽孢桿菌、萎縮芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌有著密切的關(guān)系。最初在1996年，莫哈韋芽孢桿菌被證實(shí)是一種植物內(nèi)生菌，能減少由植物內(nèi)的內(nèi)生真菌產(chǎn)生的霉菌毒素的積累。經(jīng)過進(jìn)一步的研究證實(shí)發(fā)現(xiàn)，莫哈韋芽孢桿菌屬這一類的所有菌株都具有內(nèi)生拮抗真菌的作用。并且在2002年證實(shí)這類菌種還能生存于植物細(xì)胞間隙而促進(jìn)植物生長(zhǎng)。在2007年，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，對(duì)禾谷鐮刀菌引起的小麥赤霉病有極強(qiáng)的防治作用，同年3月13日?qǐng)?bào)道的海南省香蕉“巴拿馬病”(被稱為香蕉世界的SARS)就是由于感染此類鐮刀菌所致。最近又有報(bào)道證實(shí)，莫哈韋芽孢桿菌產(chǎn)生的二次代謝產(chǎn)物環(huán)脂肽具有極強(qiáng)的抗菌活性。雖然目前對(duì)莫哈韋芽孢桿菌屬的研究還不是很多，還面臨著發(fā)酵生產(chǎn)工藝復(fù)雜、活性物質(zhì)分離難等諸多難題，但隨著生物科技的快速發(fā)展，莫哈韋芽孢桿菌所具有的巨大潛力和開發(fā)價(jià)值必將被--證實(shí)。
[0003]莫哈韋芽孢桿菌(bacillus mojavensis) KJS-3是由韓國(guó)姜在璿教授從食物垃圾里霉菌無法生長(zhǎng)的一片潔凈部分中分離得到的，經(jīng)過電子顯微鏡觀察、16srDNA序列分析確認(rèn)本菌株是一個(gè)新發(fā) 現(xiàn)的新型莫哈韋芽孢桿菌，于2008年8月22日保藏于韓國(guó)微生物保藏中心，保藏編號(hào)為KCCM10961P。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供莫哈韋芽孢桿菌(bacillus mojavensis)KJS-3作為飼料添加劑的用途。
[0005]莫哈韋芽孢桿菌(bacillus mojavensis)KJS_3是由韓國(guó)姜在璿教授于2008年8月22日保藏于韓國(guó)微生物保藏中心，保藏編號(hào)為KCCM10961P。該菌的生長(zhǎng)條件為:20~50°C, pH=6 ~7.5。
[0006]本發(fā)明的莫哈韋芽孢桿菌(bacillus mojavensis)KJS_3,采用自動(dòng)化液體發(fā)酵罐發(fā)酵，發(fā)酵原料為98%水和2%培養(yǎng)基原料，生產(chǎn)成本低廉；發(fā)酵一次一般為2-3天，發(fā)酵周期短；經(jīng)過2天左右時(shí)間發(fā)酵后，芽孢轉(zhuǎn)化率達(dá)到99%以上，幾乎全部由營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞轉(zhuǎn)化為芽孢，世界少見；生產(chǎn)過程中無需不斷添加除泡劑，節(jié)省原料成本；經(jīng)過離心過濾，沉淀干燥制粉，每升發(fā)酵液制得純活菌粉2-3克，每克含菌種數(shù)約為3~5X10ncfu/g，產(chǎn)率高，濃度大；經(jīng)離心分離的上層清液再經(jīng)過酸處理、逐項(xiàng)分離提純，又可提煉出抗菌活性物質(zhì)；整個(gè)發(fā)酵過程，利用率高，幾乎沒有“三廢”產(chǎn)品，環(huán)保無污染，少量廢水可回收再利用。
[0007]本發(fā)明的莫哈韋芽孢桿菌(bacillus mojavensis) KJS-3是一種可以附著于動(dòng)物腸道內(nèi)正常生長(zhǎng)的益生菌，通過Caco-2細(xì)胞的附著率實(shí)驗(yàn)證實(shí)，本菌種約有51.2±8.14%的附著能力，與目前效果得到證實(shí)的Lactobacillus casei TMC0409菌株的61.1±7.1%的附著率不相上下，說明其具有較強(qiáng)的腸道附著作用。
[0008]本發(fā)明的莫哈韋芽孢桿菌(bacillus mojavensis)KJS-3是一種內(nèi)生細(xì)菌，對(duì)常見的各種致病真菌、致病細(xì)菌，特別是對(duì)抗耐萬古霉素腸球菌和抗藥性金黃色葡萄球菌等有害菌的廣譜抗菌特性，可用作生物抗菌制劑等產(chǎn)品。本菌株能產(chǎn)生各種消化酶、維生素以及乳酸等物質(zhì)。
[0009]本發(fā)明的莫哈韋芽孢桿菌(bacillus mojavensis) KJS-3可以比較牢固的附著于動(dòng)物腸道內(nèi)，加上其廣譜抗菌特性，添加在動(dòng)物飼料中喂食動(dòng)物后，附著于動(dòng)物腸道內(nèi)不僅可以阻止有害菌、病毒的侵襲，還能殺菌抗菌，從而保護(hù)動(dòng)物健康，提高動(dòng)物免疫力。
[0010]本發(fā)明的莫哈韋芽孢桿菌(bacillus mojavensis)KJS_3能產(chǎn)生各種消化酶,提高動(dòng)物的消化功能，并且利用本菌種的高效的乳酸轉(zhuǎn)化率，還能幫助動(dòng)物分解飼料中高分子糖類等動(dòng)物不易消化的成分，最后轉(zhuǎn)化成的乳酸和生成的各種維生素均是促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)成分。
[0011]本發(fā)明的莫哈韋芽孢桿菌(bacillus mojavensis) KJS-3作為飼料添加劑安全可靠性，經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，大劑量喂食也無毒性，安全可靠。
[0012]總之，本發(fā)明提供了莫哈韋芽孢桿菌(bacillus mojavensis)KJS_3作為動(dòng)物飼料添加劑的用途，以及莫哈韋芽孢桿菌(bacillus mojavensis)KJS_3在制備動(dòng)物飼料添加劑上的用途。
[0013]從另外一個(gè)角度，本發(fā)明還提供了一種動(dòng)物飼料添加劑，其中含有莫哈韋芽孢桿菌(bacillus mojavensis) KJS-3。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0014]圖1，莫哈韋芽孢桿菌KJS-3附著率對(duì)比圖(左圖為革蘭氏染色后用光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞的效果圖，右圖為左圖被附著細(xì)胞的放大圖像，明顯看到很多小黑點(diǎn)為本菌種)。
[0015]圖2，莫哈韋芽孢桿菌KJS-3 —級(jí)代謝產(chǎn)物酶活性測(cè)試。
【具體實(shí)施方式】
[0016]實(shí)施例1，莫哈韋芽孢桿菌KJS-3附著率實(shí)驗(yàn)
[0017]試驗(yàn)方法:
[0018]1.先將濃度為lX105cells/4ml的Caco_2細(xì)胞在組織培養(yǎng)皿中培養(yǎng)。
[0019]2.再將本菌種和對(duì)照組菌種(L.rhamnosus GG)分別配制成4.lX105cfu/ml、
4.9X105cfu/ml的濃度的溶液后再加入到預(yù)先準(zhǔn)備的Caco_2細(xì)胞培養(yǎng)液中。
[0020]3.在37°C，5%C02培養(yǎng)機(jī)中，將兩組培養(yǎng)皿培養(yǎng)2個(gè)小時(shí)。
[0021]4.培養(yǎng)結(jié)束后，用無菌磷酸鹽緩沖液(pH=7.4)處理3遍后，再將附著后的細(xì)胞用胰蛋白酶回收處理，用PBS洗滌后，再用TSA培養(yǎng)液覆蓋。
[0022]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:對(duì)照組菌種(L.rhamnosus GG)是世界公認(rèn)的附著率最高的菌種,其附著率達(dá)到83.6±6.8%，但一般常用附著率高的菌種為L(zhǎng)actobacillus casei TMC0409，其附著率為61.10±7.1%，本菌種附著率為51.2±8.14%，與常用菌種附著率不相上下，體現(xiàn)出較強(qiáng)的動(dòng)物腸道內(nèi)附著作用。如圖1所示。莫哈韋芽孢桿菌KJS-3具有開發(fā)成動(dòng)物用藥物以及飼料產(chǎn)品的潛力。[0023]實(shí)施例2，莫哈韋芽孢桿菌KJS-3抗菌實(shí)驗(yàn)
[0024]為檢測(cè)莫哈韋芽孢桿菌(bacillus mojavensis)KJS_3的抗菌性特征,將莫哈韋芽孢桿菌(bacillus mojavensis) KJS-3對(duì)超級(jí)病毒抗耐萬古霉素腸球菌(VRE)的2種亞型和抗藥性金黃色葡萄球菌(MRSA)的4種亞型進(jìn)行實(shí)驗(yàn):
[0025]試驗(yàn)方法一從含有莫哈韋芽孢桿菌KJS-3的培養(yǎng)皿中取適量菌種置于含有TSB培養(yǎng)液的試管中制成4毫升菌體培養(yǎng)液,過夜培養(yǎng)后，于次日接種于100毫升的TSB培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)3小時(shí)以上，培養(yǎng)完成后將100毫升菌液投入到發(fā)酵罐中制得4升發(fā)酵液再次培養(yǎng)2日后，離心分離，取上層清液，加入3摩爾鹽酸進(jìn)行pH值調(diào)整，調(diào)至pH值為2后，置于4°C冰柜進(jìn)行保管，次日再進(jìn)行離心分離，取沉淀溶于甲醇溶液，配成濃度不同的溶液對(duì)上述兩種病毒的6種亞型進(jìn)行測(cè)定，觀察菌種旁的透明區(qū)間大小，來判斷本菌株是否具有抗菌性。
[0026]結(jié)果顯示如下:
【權(quán)利要求】
1.莫哈韋芽孢桿菌KJS-3作為動(dòng)物飼料添加劑的用途。
2.莫哈韋芽孢桿菌KJS-3在制備動(dòng)物飼料添加劑上的用途。
3.一種動(dòng)物飼料添加劑，其中含有莫哈韋芽孢桿菌KJS-3。
【文檔編號(hào)】A23K1/00GK103960461SQ201410168267
【公開日】2014年8月6日 申請(qǐng)日期:2014年4月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月24日
【發(fā)明者】姜在璿, 歐黎虹, 劉杰 申請(qǐng)人:武漢虹睿生物科技開發(fā)有限公司