一種建立茶壺棗高效再生體系的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種建立茶壺棗高效再生體系的方法，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明采用茶壺棗無菌苗的幼嫩葉片作為再生體系的外植體，在含有噻苯隆和6-芐氨基腺嘌呤的MS培養(yǎng)基上誘導(dǎo)形成不定芽，將形成的不定芽轉(zhuǎn)接到含有6-芐氨基腺嘌呤和吲哚丁酸的MS培養(yǎng)基上壯苗，經(jīng)過生根、煉苗、移栽，最后獲得茶壺棗再生植株。按本發(fā)明首次針對(duì)茶壺棗建立了高頻再生體系，為茶壺棗生物技術(shù)育種工作提供了理論基礎(chǔ)和試驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)也為今后選育茶壺棗優(yōu)良品種提供技術(shù)參考。
【專利說明】一種建立茶壺棗高效再生體系的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明所屬生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種以無菌苗幼嫩葉片為外植體獲得茶壺棗再生植株的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]Φ (Zizyphus.jujuba Mill.)為鼠李科(Rhamnaceae)率屬(Zizyphus.Mill.)植物，是原產(chǎn)于中國(guó)的特色優(yōu)勢(shì)經(jīng)濟(jì)樹種，其味道鮮美，果形美觀，富含人體所需的多種氨基酸和維生素，還含有多種多糖、微量元素及抗癌物質(zhì)環(huán)磷酸腺苷等藥用成分，是藥食兩用滋補(bǔ)品。
[0003]茶壺棗(‘Chahuzao’)原產(chǎn)于山東，數(shù)量極少。在果實(shí)身肩部或近肩部有肉質(zhì)突出物，大小、形狀似壺嘴、壺把，與橢圓形果實(shí)主體聯(lián)成一體，形似茶壺而得名。茶壺棗果肉松軟，汁液中多，味甜略酸，鮮食品質(zhì)較優(yōu)加之果面平滑光澤鮮艷，形似茶壺而惹人喜愛，是一種觀賞價(jià)值極高的優(yōu)良棗樹品種。近年來，茶壺棗的觀賞用途逐漸被人們所重視，或用于園林綠化、造景，或用于觀光采摘以及庭院、盆景觀賞等等，前景廣闊。
[0004]棗樹品種及取材部位不同，適宜再生的培養(yǎng)基與植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度配比就不同。目前，雖然已有冬棗、灰棗、酸棗等棗樹品種建立了再生體系，但其再生方法并不能適用于茶壺棗。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明提供一種建立茶壺棗高效再生體系的方法，以茶壺棗無菌苗幼嫩葉片愈傷組織間接器官發(fā)生途徑建立再生體系，以期實(shí)現(xiàn)該樹種的大量快速繁殖，為茶壺棗的基因轉(zhuǎn)化、品種改良奠定基礎(chǔ)。
[0006]一種建立茶壺棗高效再生體系的方法，包括如下步驟:(1)剪取茶壺棗無菌苗的幼嫩葉片，刻傷后接種到含有植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5-6周；(2)將葉片再生出的不定芽從葉片上剝離，轉(zhuǎn)接到含有植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的MS壯苗培養(yǎng)基中，培養(yǎng)3周；
(3)生長(zhǎng)健壯的不定芽轉(zhuǎn)接到含有植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的改良MS生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)4周；(4)待不定芽生出4-5cm的根，煉苗后移栽。
[0007]在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為
0.5mg/L的噻苯隆和1.0mg/L的6-節(jié)氨基腺嘌呤。
[0008]在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述壯苗培養(yǎng)基中的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為2.0mg/L的6-芐氨基腺嘌呤和0.4mg/L的吲哚丁酸，并添加lg/L的聚乙烯吡咯烷酮。
[0009]在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述生根培養(yǎng)基中的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為0.2mg/L的萘乙酸和0.4mg/L的吲哚丁酸。
[0010]在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述誘導(dǎo)、壯苗的MS培養(yǎng)基為本領(lǐng)域常見的MS培養(yǎng)基(Murashige and Skoog, 1962),其中，鹿糖 30g/L, ph=5.8-6.2,其配方如下表:
[0011]
【權(quán)利要求】
1.一種建立茶壺棗高效再生體系的方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)誘導(dǎo)培養(yǎng):剪取茶壺棗無菌苗的幼嫩葉片，刻傷后接種到含有植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)35-45d ； (2)壯苗培養(yǎng):將葉片再生出的不定芽從葉片上剝離，轉(zhuǎn)接到含有植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的MS壯苗培養(yǎng)基中，培養(yǎng)20d; (3)生根培養(yǎng):生長(zhǎng)健壯的不定芽轉(zhuǎn)接到含有植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的改良MS生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)4周； (4)待不定芽生出4-5cm的根，煉苗移栽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建立茶壺棗高效再生體系的方法，其特征在于，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為0.5mg/L的噻苯隆和1.0mg/L的6-芐氨基腺嘌呤。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建立茶壺棗高效再生體系的方法，其特征在于，所述壯苗培養(yǎng)基中的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為2.0mg/L的6-芐氨基腺嘌呤和0.4mg/L的吲哚丁酸，并添加lg/L的聚乙烯吡咯烷酮。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建立茶壺棗高效再生體系的方法，其特征在于，所述生根培養(yǎng)基中的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為0.2mg/L的萘乙酸和0.4mg/L的吲哚丁酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建立茶壺棗高效再生體系的方法，其特征在于，所述誘導(dǎo)、壯苗的MS培養(yǎng)基為本領(lǐng)域常見的MS培養(yǎng)基(Murashige and Skoog，1962)，其中，含蔗糖30g/L，ph=5.8-6.2，配方為:
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建立茶壺棗高效再生體系的方法，其特征在于，所述生根培養(yǎng)基的改良MS培養(yǎng)基配方為蔗糖20g/L，ph=5.8-6.2，其它成分為:
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建立茶壺棗高效再生體系的方法，其特征在于，所述幼嫩葉片為茶壺棗無菌苗植株形態(tài)學(xué)上端至下的第3-5枚葉片。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建立茶壺棗高效再生體系的方法，其特征在于，所述幼嫩葉片刻傷方法為沿中脈垂直方向橫切2-3個(gè)傷口，不傷及葉緣，不剪斷葉片。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建立茶壺棗高效再生體系的方法，其特征在于，所述葉片的接種方向?yàn)檫h(yuǎn)軸端向上。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建立茶壺棗高效再生體系的方法，其特征在于，所述葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)5-6周，前3周為暗培養(yǎng)。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103766220SQ201410043975
【公開日】2014年5月7日 申請(qǐng)日期:2014年1月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月30日
【發(fā)明者】李穎岳, 金琪, 龐曉明, 王巖, 王歡, 續(xù)九如 申請(qǐng)人:北京林業(yè)大學(xué)