一種甘藍(lán)小孢子苗從試管到田間的移栽方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種甘藍(lán)小孢子苗從試管到田間的移栽方法，包括下列步驟：1）當(dāng)試管苗生長有4～5片葉時，將生長有小孢子試管苗的瓶口打開，并放置在培養(yǎng)架上在溫度為24～25℃，光照強度為2500～3000Lx、光照時間12h/d的條件下鍛煉5～6天后連同試管放置在田間遮陽網(wǎng)棚內(nèi)，鍛煉生長2天，使試管苗基本適應(yīng)外界環(huán)境；2）從試管中取出小孢子苗，用清水洗去根部的培養(yǎng)基后在用CS浸根劑浸根30～60秒，將附帶有CS浸根劑的試管苗根部插入畦土中培養(yǎng)生長。該方法首次實現(xiàn)了由常規(guī)試管苗2次移栽方法變?yōu)?次移栽方法，使甘藍(lán)小孢子培養(yǎng)獲得的小孢子苗田間成活率高達(dá)98.5%。
【專利說明】一種甘藍(lán)小孢子苗從試管到田間的移栽方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物育種【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及利用甘藍(lán)游離小孢子培養(yǎng)技術(shù)獲得小孢子苗后實現(xiàn)小孢子苗成活移栽的方法，尤其是一種甘藍(lán)小孢子苗由試管直接移栽田間的方法。
[0002]
【背景技術(shù)】
[0003]甘藍(lán)是結(jié)球甘藍(lán){Bras sc i a oleracea.L, var.capi ta ta L )的簡稱，屬于十字花科蕓薹屬中一種主要蔬菜作物，世界各國都普遍栽培。甘藍(lán)游離小孢子培養(yǎng)技術(shù)是一種單倍體育種技術(shù)，是縮短甘藍(lán)育種年限，創(chuàng)制甘藍(lán)新資源材料，提高育種效率的一條有效途徑；利用游離小孢子培養(yǎng)技術(shù)可使甘藍(lán)育種材料快速純化，創(chuàng)制自交系無須連續(xù)自交，易克服自交衰退現(xiàn)象；創(chuàng)制一個純系僅需I~2年，能夠極大地縮短新品種育種周期；甘藍(lán)小孢子培養(yǎng)技術(shù)的成功關(guān)鍵是要獲得試管小孢子苗和保證更多的試管小孢子苗移栽田間成活，對于成活苗栽培 長成植株后在冬前必須生長到滿足綠體春化的最小營養(yǎng)體，才能實現(xiàn)抽薹開花結(jié)種。
[0004]常規(guī)甘藍(lán)小孢子培養(yǎng)技術(shù)體系中小孢子苗由試管苗到田間成苗要經(jīng)過2個重要環(huán)節(jié)，其一是小孢子試管苗移栽到營養(yǎng)缽鍛煉苗環(huán)節(jié)，其二是營養(yǎng)缽苗移栽田間成苗環(huán)節(jié)。甘藍(lán)或其它十字花科作物常規(guī)試管苗移栽方法中主要存在三大問題(I)兩次移栽易造成小孢子苗根系損傷和延遲緩苗時間；(2)營養(yǎng)缽鍛煉苗的環(huán)境條件通風(fēng)、保濕等不易控制，對于適宜涼爽濕潤特點的甘藍(lán)不利生長，小孢子苗易徒長或老化；(3)營養(yǎng)缽苗移栽田間時苗子根土易脫落，會引起斷根或產(chǎn)生傷口移栽田間易感染病害等；上述諸多問題不同程度致使小孢子苗移栽成活率低，兩次移苗費工費時也影響小孢子苗田間生長時間，導(dǎo)致冬季低溫來臨前部分小孢子植株生長過小，來年未通過春化不能獲得種子增加再生難度。據(jù)劉瑩瑩報道(西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報，2013，Vol41, N0.8)甘藍(lán)小孢子試管苗移栽營養(yǎng)缽時移栽成活率為76.9%，營養(yǎng)缽苗定植田間時移栽成活率為92.0% ;蔣武生報道(河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報2005，Vol39, N0.4),大白菜小孢子試管苗移栽營養(yǎng)缽鍛煉苗后，于9月下旬定植田間小孢子苗成活率為90% ;劉雪萍報道(遺傳，2003，25 (4))，油菜小孢子苗移栽營養(yǎng)缽鍛煉苗后定植田間，遮陽網(wǎng)覆蓋苗成活率87.56%，薄膜覆蓋苗成活率57.7%。如此較低的小孢子苗成活株率，嚴(yán)重影響著甘藍(lán)或十字花科其它作物單倍體育種效果和雜交種的選育進(jìn)程。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題與缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種甘藍(lán)小孢子苗從試管到田間的移栽方法，該方法使甘藍(lán)小孢子培養(yǎng)獲得的小孢子苗田間成活率高達(dá)98.5%。
[0006]為了實現(xiàn)上述任務(wù)，本發(fā)明采取如下的技術(shù)解決方案:
一種甘藍(lán)小孢子苗從試管到田間的移栽方法，其特征在于，包括下列步驟:
I)試管苗鍛煉(O室內(nèi)鍛煉苗:當(dāng)試管苗生長有4~5片葉時，將生長有小孢子試管苗的瓶口打開，并放置在培養(yǎng)架上在溫度為24-25°C，光照強度為2500-3000LX、光照時間12h/d的條件下鍛煉5-6天。
[0007](2)室外鍛煉苗:將經(jīng)室內(nèi)鍛煉5-6天試管苗連同試管放置在田間遮陽網(wǎng)棚內(nèi)，鍛煉生長2天，使試管苗基本適應(yīng)外界環(huán)境。
[0008]2)試管苗移栽:
(1)栽苗地準(zhǔn)備:打碎畦土，按照長度10-15厘米、寬度100-110厘米做畦，摟平畦面，放水澆灌畦土。待畦面上的水滲入畦面時用方形鐵鍬輕輕抹平畦面，待用。
[0009](2)獲取試管苗:由遮陽網(wǎng)棚內(nèi)取來試管苗，選用長把鑷子從試管中取出小孢子苗，用清水洗去根部的培養(yǎng)基待用。
[0010](3)夾苗移栽:
①浸根劑浸根:
沖洗試管苗根部培養(yǎng)基干凈后，用研制的CS浸根劑浸根30-60秒。
[0011]②夾苗移栽:將附帶有CS浸根劑的試管苗用鑷子夾住苗根部插入畦土中培養(yǎng)生長。
[0012]所述的CS浸根劑的配方為:50%可濕性粉劑多菌靈(Carbendazim) 5-10克+a_萘乙酸鈉(Scdium, a-naphthaleneaceticd) 0.5-1.0毫克溶入1000克水中混合均勻。
[0013]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的一種甘藍(lán)小孢子苗從試管到田間的移栽方法具有以下優(yōu)點:
1.本發(fā)明的一種甘藍(lán)小孢子苗從試管到田間的移栽方法首次實現(xiàn)了由常規(guī)試管苗2次移栽(試管苗移栽營養(yǎng)缽，營養(yǎng)缽苗移栽田間)方法變?yōu)镮次移栽(試管苗直接夾苗移栽田間)方法。
[0014]2.本發(fā)明研制的甘藍(lán)小孢子苗移栽CS浸根劑，配方50%可濕性粉劑多菌靈5-10克+ a-萘乙酸鈉0.5-1.0毫克+1000克水，浸根后小孢子苗移栽田間無病害發(fā)生，小孢子苗生長健壯，根系發(fā)育快、根系粗壯；克服了常規(guī)2次移栽小孢子苗緩苗時間長，發(fā)棵慢，根系少而細(xì)弱，田間植株發(fā)病率高達(dá)12.0%以上的缺陷。
[0015]3.本發(fā)明方法使甘藍(lán)小孢子培養(yǎng)獲得的小孢子苗田間成活率高達(dá)98.5%，與前人方法相比較比劉瑩瑩報道提高27.5%，比蔣武生報道提高8.5%，比劉雪萍報道提高10.94%和40.8% ;小孢子苗I次移栽田間無有緩苗或緩苗時間短暫，小孢子苗植株生長旺盛來年植株春化抽薹率比對照提高13.9%和16.4%。
【專利附圖】

【附圖說明】
圖1是實施例甘藍(lán)小孢子培養(yǎng)的試管中的小孢子苗；
圖2是實施例經(jīng)開口鍛煉后試管中的小孢子苗；
圖3是實施例由試管中取出小孢子苗的過程:
圖4是實施例清洗根部培養(yǎng)基后的小孢子苗；
圖5是實施例1次性夾苗移栽小孢子苗；
圖6是實施例1次性夾苗移栽后的小孢子苗群體。
【具體實施方式】[0016]按照本發(fā)明的技術(shù)方案，一種甘藍(lán)小孢子苗從試管到田間的移栽方法，包括下列步驟:
I)試管苗鍛煉
(I)室內(nèi)鍛煉苗:當(dāng)試管苗生長有4~5片葉時，將生長有小孢子試管苗的瓶口打開，并放置在培養(yǎng)架上在溫度為24-25°C，光照強度為2500-3000LX、光照時間12h/d的條件下鍛煉5-6天。
[0017](2)室外鍛煉苗:將經(jīng)室內(nèi)鍛煉5-6天試管苗連同試管放置在田間遮陽網(wǎng)棚內(nèi)，鍛煉生長2天，使試管苗基本適應(yīng)外界環(huán)境。
[0018]2)試管苗移栽:
(I)栽苗地準(zhǔn)備:打碎畦土，按照長度10-15厘米、寬度100-110厘米做畦，摟平畦面，放水澆灌畦土。待畦面上的水滲入畦面時用方形鐵鍬輕輕抹平畦面，待用。
[0019]上述所述的田間畦土的配方為:
①材料
田間畦土:不含十字花科作物病菌和害蟲，多為糧田土、豆田土、蔥蒜田土或三年以上未栽培過十字花科作物的田塊土。
[0020]有機肥和化肥:有機肥主要是雞糞、豬糞等質(zhì)地較為疏松、速效氮含量低的糞肥，有機肥必須充分腐熟；化肥為磷酸二胺復(fù)合肥。
[0021]②混拌
將搗碎的有機肥3~4kg/m2和化肥磷酸二胺0.1~0.2kg/m2，撒施田間畦內(nèi)土面，摟鋤并與25~30cm深田土混合均勻并耙平畦面。
[0022](2)獲取試管苗:由遮陽網(wǎng)棚內(nèi)取來試管苗，選用長把鑷子從試管中取出小孢子苗，用清水洗去根部的培養(yǎng)基待用。
[0023](3)夾苗移栽:
①浸根劑浸根:
沖洗試管苗根部培養(yǎng)基干凈后，用研制的CS浸根劑浸根30-60秒。
[0024]所述的CS浸根劑的配方為:50%可濕性粉劑多菌靈(Carbendazim) 5-10克+a_萘乙酸鈉(Scdium, a-naphthaleneaceticd) 0.5-1.0毫克溶入1000克水中混合均勻。
[0025]②夾苗移栽:將附帶有CS浸根劑的試管苗用鑷子夾住苗根部插入畦土中培養(yǎng)生長。
[0026]所述的夾苗移栽方法如下:
I?左手拿住小孢子苗的葉部，右手用鑷子夾住小孢子苗根系中下部，按照適宜株行距直接將小孢子苗根部插入到抹平畦面的土中；
II?插入深度為連接根系的莖基部插入畦面0.3-0.5厘米，隨后用鑷子將根莖周圍的空隙用畦土填平，扶正小孢子苗；
II1.夾苗移栽完成后，及時搭建小拱棚(一般在陜西省的10月中旬左右夾苗)覆蓋薄膜，保溫、保濕促其緩苗成活，I周后開始通風(fēng)直至揭膜，隨后正常栽培管理，促使小孢子苗生長發(fā)育，冬前達(dá)到滿足春化營養(yǎng)體。
[0027]以下是發(fā)明人給出的實施例:需要說明的是，根據(jù)實驗證明，本發(fā)明不限于這些實施例。[0028]實施例1:
本實施例選用 申請人:所在甘藍(lán)育種和生物技術(shù)研究室育成的國家審定甘藍(lán)品種“綠球66” 一代雜交種(F1)獲得的DH群為實驗材料。
[0029]I)試管苗鍛煉
(O室內(nèi)鍛煉苗:當(dāng)由“綠球66”F1小孢子培養(yǎng)獲得的DH群試管苗生長有4片葉(圖O時，將試管苗的瓶口打開，并放置在培養(yǎng)架上在溫度為24-25°C，光照強度為2500Lx、光照時間12h/d的條件下鍛煉6天。
[0030](2)室外鍛煉苗:將經(jīng)室內(nèi)鍛煉6天試管苗連同試管放置在田間遮陽網(wǎng)棚內(nèi)，鍛煉生長2天，使試管苗基本適應(yīng)外界環(huán)境。
[0031]2)試管苗移栽:
(I)栽苗地準(zhǔn)備:前茬地為西葫蘆地，施腐熟雞糞4kg/m2和磷酸二胺0.lkg/m2，摟鋤并與25厘米深田土混合均勻，按照長度10厘米、寬度110厘米做畦，摟平畦面，放水澆灌畦土。待畦面上的水滲入畦面時用方形鐵鍬輕輕抹平畦面。
[0032](2)獲取試管苗:由遮陽網(wǎng)棚內(nèi)取來由“綠球66”匕小孢子培養(yǎng)獲得的DH群試管苗(圖2)，用長把鑷子從試管中取出小孢子苗(圖3)，用清水洗去根部的培養(yǎng)基。
[0033](3)夾苗移栽: ①浸根劑浸根:沖洗干凈試管苗根部培養(yǎng)基后，用1000克水中含50%可濕性粉劑多菌靈5克+萘乙酸鈉1.0毫克的浸根劑浸根50秒。
[0034]②夾苗移栽:左手拿住試管苗的葉部，右手用鑷子夾住試管苗根系中下部，直接將苗根部移栽插入到抹平畦面的土中，插入深度莖基部插入畦面0.3厘米，隨后用鑷子將根莖周圍的空隙用畦土填平，陜西省10月20日搭建小拱棚正常栽培管理。15天后，統(tǒng)計小孢子再生苗移栽成活率(表1)，比對照提高27.0% ；30天后，統(tǒng)計小孢子苗生長勢(表2)，冬前植株達(dá)到11片蓮座葉滿足春化營養(yǎng)體，抽薹率為95.9%，比對照提高16.4%。
[0035]實施例2:
本實施例選用 申請人:所在甘藍(lán)育種和生物技術(shù)研究室由國外引進(jìn)甘藍(lán)一代雜交種(F1)品種“ GWF1-2 ”獲得的DH群為實驗材料。
[0036]I)試管苗鍛煉
(I)室內(nèi)鍛煉苗:當(dāng)由“GWF1-2”小孢子培養(yǎng)獲得的DH群試管苗生長有5片葉時，將試管苗的瓶口打開，并放置在培養(yǎng)架上在溫度為25°C，光照強度為3000Lx、光照時間12h/d的條件下鍛煉5天。
[0037](2)室外鍛煉苗:將經(jīng)室內(nèi)鍛煉5天試管苗連同試管放置在田間遮陽網(wǎng)棚內(nèi)，鍛煉生長2天，使試管苗基本適應(yīng)外界環(huán)境。
[0038]2)試管苗移栽:
(I)栽苗地準(zhǔn)備:前茬地為西葫蘆地，施腐熟雞糞3kg/m2和磷酸二胺0.lkg/m2，摟鋤并與25厘米深田土混合均勻，按照長度10厘米、寬度110厘米做畦，摟平畦面，放水澆灌畦土。待畦面上的水滲入畦面時用方形鐵鍬輕輕抹平畦面。
[0039](2)獲取試管苗:由遮陽網(wǎng)棚內(nèi)取來由“GWF1-2”小孢子培養(yǎng)獲得的DH群試管苗，用長把鑷子從試管中取出小孢子苗，用清水洗去根部的培養(yǎng)基獲得無粘帶培養(yǎng)基的試管苗(圖 4)。[0040](3)夾苗移栽:
①浸根劑浸根:沖洗干凈試管苗根部培養(yǎng)基后，用1000克水中含50%可濕性粉劑多菌靈10克+萘乙酸鈉0.8毫克的浸根劑浸根35秒。
[0041]②夾苗移栽:左手拿住試管苗的葉部，右手用鑷子夾住試管苗根系中下部(圖5)，將苗根部直接移栽插入到抹平畦面的土中，插入深度莖基部插入畦面0.3厘米，隨后用鑷子將根莖周圍的空隙用畦土填平(圖6)，陜西省10月25日搭建小拱棚正常栽培管理。15天后，統(tǒng)計小孢子再生苗移栽成活率(表1)，比對照提高29.0% ；30天后，統(tǒng)計小孢子苗生長勢(表2)， 冬前植株達(dá)到12片蓮座葉滿足春化營養(yǎng)體，抽薹率為97.0%，比對照提高13.9%。
[0042]表1甘藍(lán)小孢子試管苗到田間移栽方法對苗成活率的影響 表2甘藍(lán)小孢子試管苗到田間移栽方法成活植株長勢表現(xiàn)
注:植株病害主要是根腐病和根莖病。
【權(quán)利要求】
1.一種甘藍(lán)小孢子苗從試管到田間的移栽方法，其特征在于，包括下列步驟: 1)試管苗鍛煉 (O室內(nèi)鍛煉苗:當(dāng)試管苗生長有4~5片葉時，將生長有小孢子試管苗的瓶口打開，并放置在培養(yǎng)架上在溫度為24~25°C，光照強度為2500~3000Lx、光照時間12h/d的條件下鍛煉5~6天； (2)室外鍛煉苗:將經(jīng)室內(nèi)鍛煉5~6天試管苗連同試管放置在田間遮陽網(wǎng)棚內(nèi)，鍛煉生長2天，使試管苗基本適應(yīng)外界環(huán)境； 2)試管苗移栽 (1)栽苗地準(zhǔn)備:打碎畦土，按照長度10~15厘米、寬度100~110厘米做畦，摟平畦面，放水澆灌畦土，待畦面上的水滲入畦面時輕輕抹平畦面，待用； (2)獲取試管苗:由遮陽網(wǎng)棚內(nèi)取來試管苗，從試管中取出小孢子苗，用清水洗去根部的培養(yǎng)基待用； (3)夾苗移栽:沖洗試管苗根部培養(yǎng)基干凈后，用CS浸根劑浸根30~60秒，將附帶有CS浸根劑的試管苗用鑷子夾住苗根部插入畦土中培養(yǎng)生長； 所述的CS浸根劑由50%可濕性粉劑多菌靈5-10克、+a-萘乙酸鈉0.5-1.0毫、1000克水組成。
【文檔編號】A01P3/00GK103749127SQ201410011546
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2014年1月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月10日
【發(fā)明者】張恩慧, 程永安, 許忠民, 楊安平, 趙曉菲, 范國紅, 王鑫 申請人:西北農(nóng)林科技大學(xué)