一種含有β-葡聚糖酶的小麥日糧酶及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及含有β-葡聚糖酶的一種小麥日糧酶及其制備方法，屬于飼料酶制劑領(lǐng)域。所述小麥日糧酶由以下重量份數(shù)的酶制劑組成：木聚糖酶100-140份，纖維素酶8-12份，β-葡聚糖酶15-20份，中溫α-淀粉酶6-10份，中草藥粉劑0.5-2份。其中其中β-葡聚糖酶產(chǎn)自地衣芽孢桿菌（Βacillus?licheniformis）β-10-25，保藏編號CCTCC?NO：M2013538，制備方法如下：斜面菌種活化培養(yǎng)獲得液體種子；發(fā)酵階段采用低溫培養(yǎng)基補入和分批接種相結(jié)合的方法；發(fā)酵液經(jīng)過濾、濃縮、精濾、干燥得獲得熱穩(wěn)定性好的β-葡聚糖酶。所得復(fù)合酶能提高飼料轉(zhuǎn)化率，降低飼料成本。
【專利說明】一種含有β-葡聚糖酶的小麥日糧酶及其制備方法【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于酶制劑【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種含有β-葡聚糖酶的小麥日糧酶及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著近代酶技術(shù)及生物技術(shù)的發(fā)展，高效能生物活性物質(zhì)——酶制劑已能大規(guī)模地工業(yè)化生產(chǎn)，并被應(yīng)用于飼料工業(yè)中，許多實驗和實際應(yīng)用結(jié)果都表明，飼用酶制劑作為一種飼料添加劑能有效地提高飼料的利用率、促進動物生長和防治動物疾病的發(fā)生，與抗生素和激素類物質(zhì)相比，具有卓越的安全性，引起了全球范圍內(nèi)飼料行業(yè)的高度重視。
[0003]飼料酶制劑是為了提高動物對飼料的消化、利用或改善動物體內(nèi)的代謝效能而加入飼料中的酶類物質(zhì)。目前可以在飼料中添加的酶制劑包括淀粉酶、α-半乳糖苷酶、纖維素酶、β -葡聚糖酶、葡萄糖氧化酶、脂肪酶、麥芽糖酶、甘露聚糖酶、果膠酶、植酸酶、蛋白酶、角蛋白酶、木聚糖酶等。由于飼料原料結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，目前飼料工業(yè)生產(chǎn)中更多使用的是復(fù)合酶制劑。小麥日糧酶是一種新型的飼料添加劑，在國外其應(yīng)用始于20世紀70年代，而我國的飼料工業(yè)在20世紀90年代才開展酶制劑的應(yīng)用。因此，加大對飼料酶制劑的研究對于我國的養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展具有非常重要的意義。
[0004]飼用酶種類繁多，在畜禽生產(chǎn)中均取得了相當好的效果。前蘇聯(lián)科學(xué)家在早期斷奶仔豬日糧中添加淀粉糊精酶，使得日增重提高14.6%，碳水化合物消化率提高77.2%。據(jù)美國有關(guān)資料報道，Collier在早期斷奶仔豬日糧中補充酶制劑(含蛋白酶、淀粉酶、葡聚糖酶)，結(jié)果實驗組比對照組日增重提高了 25%，飼料轉(zhuǎn)化率提高了 15.5%。西德學(xué)者曾多次進行育肥豬添加復(fù)合酶制劑的實驗研究，在以大麥為主的日糧中，添加0.1%的復(fù)合酶制劑，結(jié)果為:實驗組比對照組生長速度提高5.1%，飼料利用率提高4.1%?？梢姡钢苿┠茱@著提高畜禽對飼料的消化吸收，促進`生長，降低飼料成本，并且作為一種綠色飼料添加劑，它的使用具有安全性，有利于畜牧業(yè)生產(chǎn)走上經(jīng)濟節(jié)約型的發(fā)展道路。
[0005]長期以來，人們習慣以玉米作為能量飼料，但隨著養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展對玉米需求量加大和國際市場上玉米行情的變化，造成玉米采購難和價格上揚，尤其在非玉米主產(chǎn)區(qū)，玉米的短缺成為限制當?shù)匦竽翗I(yè)發(fā)展的重要因素。而在非玉米主產(chǎn)區(qū)往往小麥的來源較廣，其價格也較為穩(wěn)定，而且在小麥收獲季節(jié)，其價格和玉米相比往往具有一定的優(yōu)勢，特別是隨著我國小麥產(chǎn)量的逐漸增大，以及WTO的加入，進口小麥涌入帶來的沖擊，使得小麥價格呈下降趨勢。同時，畜牧業(yè)發(fā)展迅速，飼料用量不斷增大，制造淀粉和賴氨酸也消耗掉大量的玉米，以前主要用作能量飼料的玉米價格不斷上漲，小麥以其種植面積廣、產(chǎn)量高、價格低等優(yōu)點成為替代玉米的首選。
[0006]目前，糧食的短缺是困擾我國飼料工業(yè)發(fā)展的主要因素。因此，要選擇有利于節(jié)約糧食資源的畜牧業(yè)發(fā)展道路，提高飼料利用率，充分利用有限的糧食資源獲得盡可能多的畜產(chǎn)品。β_葡聚糖酶等酶制劑的使用，能有效的解決這個問題，但目前在生產(chǎn)、實驗中的實際應(yīng)用的酶制劑酶活力大多較低，因此也成為改善飼用酶應(yīng)用現(xiàn)狀的瓶頸之一。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的在于提供一種多酶種復(fù)配的含有P -葡聚糖酶的小麥日糧酶及其制備方法。
[0008]本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn):
[0009]一種含有(6-葡聚糖酶的小麥日糧酶，由以下重量份數(shù)的組分組成:中草藥粉劑0.5-2份，木聚糖酶100-140份，纖維素酶8-12份，^ -葡聚糖酶15-20份，中溫a -淀粉酶6-10 份。
[0010]所述木聚糖酶、纖維素酶和中溫a -淀粉酶均為湖南鴻鷹翔生物工程股份有限公司產(chǎn)品；
[0011]所述中草藥粉劑的制備方法如下:
[0012]稱取黃芪20-30份；黨參10-18份；柴胡10-15份；麥冬10_15份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然后于容器中均勻混合并添加3-6倍重量的水，控制溫度70°C~90°C保持2~4h，然后降溫至45-60°C，加入混合酶制劑進行酶解，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為5.5-6.8，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物，IlOff功率下超聲萃取0.5~1.5h，過濾；濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中草藥粉劑；
[0013]所述混合酶添加量為混合物料總重量的5-10% ；
[0014]所述混合酶的重量份數(shù)組成為:P -葡萄糖苷酶10-15份，木聚糖酶15-20份，戊聚糖酶15-20份，普魯蘭酶20-30份，(6-淀粉酶10-15份，果膠酶10-15份，酸性蛋白酶10-15份，木瓜蛋白酶5-10份，葡萄糖氧化酶5-10份，酸性磷酸酶5-10份；
`[0015]所述乙醇和丙醇的質(zhì)量比例為1:1-1.5。
[0016]所述0 -葡聚糖酶制備方法如下:
[0017](I)種子培養(yǎng)
[0018]將地衣芽孢桿菌斜面菌種經(jīng)三級搖瓶發(fā)酵及一級種子罐發(fā)酵；
[0019]所述種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基為:酵母粉0.5%，蛋白胨I %，可溶性淀粉1%，NaCll %,pH4.5-7.0，121-123°C滅菌 30_40min。
[0020](2)發(fā)酵罐發(fā)酵
[0021]將一級種子罐發(fā)酵液以3%接種量接入含有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度35-45 °C，攪拌速度200-300r/min，通風量(V/V) 1:1-3，培養(yǎng)時間10_15h ;然后將IL經(jīng)過121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至35_45°C時恒溫培養(yǎng)15-20h ;此時，將一級種子罐發(fā)酵液以2%接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)10-15h ;繼續(xù)將IL經(jīng)過121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至35_45°C時恒溫培養(yǎng)10-15h ;
[0022]所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:麥麩75g，玉米粉55g，米糠25g，豆餅粉20g，^ -葡聚糖2g，中草藥劑粉40g，海藻糖35g，酵母粉6g，玉米漿3g，硫酸銨2g，磷酸氫二鉀2g，磷酸二氫鉀2g，檸檬酸鈉3g，消泡劑0.5g,純凈水1000mL, pH值4.5-7.0，121°C滅菌20min ；
[0023]所述發(fā)酵培養(yǎng)基的調(diào)配方法為:按比例準確稱取原料，將原料中的純凈水、玉米粉、豆餅粉投入配料罐中，調(diào)節(jié)PH值3-7，加入中溫淀粉酶(3u/g玉米粉)與高溫淀粉酶(30u/g玉米粉)，同時邊攪拌邊升溫至70°C保溫15-30min，然后緩慢升溫至90°C保溫15-30min進行液化，最后加入其它原料，攪拌均勻，pH3_7，121_123°C滅菌30_40min備用。
[0024]溶解氧控制:通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速及通風量，控制溶解氧15-30% ；
[0025]PH控制:通過補氨水或稀磷酸，控制發(fā)酵過程中pH值保持在3-7 ；
[0026]補料控制:當發(fā)酵液中的還原糖含量降至3mg/ml-8mg/ml時,開始添加補料培養(yǎng)基，補料量以維持發(fā)酵液還原糖含量為2mg/ml-5mg/ml ；
[0027]放罐標準:60-80%菌體衰老自溶，酶活力增長緩慢。
[0028](3)發(fā)酵液經(jīng)過濾、濃縮、精濾、干燥得β -葡聚糖酶。
[0029]所述地衣芽孢桿菌具體為地衣芽孢桿菌(B acillus Iicheniformis) β-10-25。該菌株已于2013年11月3日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC，地址為:湖北省武漢市武昌區(qū)珞珈山武漢大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院)，保藏號為CCTCC NO:Μ2013538ο
[0030]該菌株特點如下:
[0031]所述菌株在固體平板上菌落為白色，邊緣不整齊，表面干燥不透明，鏡檢為革蘭氏陽性細菌，細胞形態(tài)呈短桿狀，芽孢中生，橢圓形，不膨大。
[0032]所述菌株生理生化特征:V-P試驗( + )，淀粉水解( + )，酪素水解( + )，明膠水解( + )，硝酸鹽還原( + )，吲哚試驗(_)，利用檸`檬酸鹽( + )，硝酸還原( + )，甘露醇( + )，木糖(+ )。
[0033]優(yōu)選的，一種小麥日糧酶由如下重量份數(shù)原料組成:木聚糖酶120份，纖維素酶10份，β -葡聚糖酶18份，中溫淀粉酶8份，中草藥粉劑1份。
[0034]所述小麥日糧酶適用于飼料加工廠和養(yǎng)殖場自配飼料，使用時應(yīng)與飼料中的其它原料混合均勻。建議每噸全價料添加量為80-150g (飼料中小麥用量低于30%，添加量為80-100g/t，小麥用量超過30%，添加量為100-150g/t)。
[0035]有益效果:
[0036]1、本發(fā)明所使用的β -葡聚糖酶酶活力高達8000-10000u/ml，是原始菌株的2.5倍；在50-70°C條件下具有較高酶活，最適反應(yīng)溫度為65°C ;適用反應(yīng)pH值范圍為5.0 ;在室溫下保存6個月后酶活損失小于25%，4°C保存12個月后酶活損失小于20%。比現(xiàn)有的β -葡聚糖酶酶活力高，酶作用最適PH值范圍寬泛，熱穩(wěn)定性及儲存穩(wěn)定性均較高，特別適合反應(yīng)溫度高、液化工藝與糖化工藝并存的工業(yè)化需求。
[0037]2、本發(fā)明所使用的β-葡聚糖酶具有良好的熱穩(wěn)定性，在60°C條件下保存Ih后仍能保持80%以上酶活，70°C條件下保存IOmin后保持20%以上酶活。
[0038]3、相較于添加有普通β_葡聚糖酶的小麥日糧酶，在同樣的用量下本發(fā)明對β -葡聚糖的酶解率更高，從而提高飼料轉(zhuǎn)化率，降低飼料成本。
[0039]4、本發(fā)明中添加了中草藥粉劑，其具有天然抗菌和增強免疫力的作用，可以有效的提高畜禽動物的抗應(yīng)激能力、免疫功能以及抗病防御機能。另外，中草藥粉劑中添加了具有抗熱應(yīng)激原作用的黃芩、柴胡，使得本發(fā)明產(chǎn)品具有更好的穩(wěn)定性和保存活性，較沒有添加中草藥粉劑的產(chǎn)品在長時間高溫條件下的保存活性提高了 15%。
【具體實施方式】
[0040]實施例1中草藥粉劑的制備方法
[0041]一種中草藥粉劑的制備方法如下:[0042]稱取黃芪25份；黨參15份；柴胡12份；麥冬12份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然后于容器中均勻混合并添加5倍重量的水，控制溫度80°C保持3h，然后降溫至50°C，加入混合酶制劑進行酶解，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為6，酶解3h，最后添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物，IlW超聲萃取lh，過濾；濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中草藥粉劑。
[0043]所述混合酶添加量為混合物料總重量的8%。
[0044]所述混合酶的重量份數(shù)組成為:β -葡萄糖苷酶12份，木聚糖酶18份，戊聚糖酶18份，普魯蘭酶25份，β -淀粉酶18份，果膠酶12份，酸性蛋白酶12份，木瓜蛋白酶8份，葡萄糖氧化酶8份，酸性磷酸酶8份。
[0045]所述乙醇和丙醇的質(zhì)量比例為1:1.2。
[0046]實施例2 —種β -葡聚糖酶的制備方法
[0047]一種β -葡聚糖酶的制備方法，包括如下步驟:
[0048](I)液體種子擴大培養(yǎng)
[0049]①一級種子培養(yǎng):將活化后的斜面菌種2環(huán)接入500毫升搖瓶中，培養(yǎng)基裝量100毫升，旋轉(zhuǎn)式搖床180轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度40°C，培養(yǎng)時間IOh ；
[0050]②二級種子培養(yǎng):將一級種子按照10%的接種量接入500毫升二級種子搖瓶中，培養(yǎng)條件與一級種子相同；
[0051]③三級種子培養(yǎng):將二級種子以10%接種量接入5000毫升三級種子搖瓶中，培養(yǎng)基裝量1000毫升，旋轉(zhuǎn)式搖`床100轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度40°C，培養(yǎng)時間12h ；
[0052]④一級種子罐培養(yǎng):將三級種子以10%接種量接入總?cè)莘e為150L的一級種子罐，發(fā)酵培養(yǎng)基裝量100L，培養(yǎng)溫度41 °C，攪拌速度300rpm，通風量(V/V) 1: 1.5，罐壓0.05Mpa,培養(yǎng)時間15h ；
[0053]所述種子培養(yǎng)基重量組成為:酵母粉0.5%，蛋白胨I %，可溶性淀粉I %，NaCl I %ρΗ5.5，121°C 滅菌 35min。
[0054](2)發(fā)酵罐發(fā)酵
[0055]將一級種子罐發(fā)酵液以3%接種量接入含有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度37°C，攪拌速度250r/min，通風量(V/V) 1:1-3，培養(yǎng)時間12h ;然后將IL經(jīng)過121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至37°C時恒溫培養(yǎng)18h ;此時，將一級種子罐發(fā)酵液以2%接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)12h ;繼續(xù)將IL經(jīng)過121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至37°C時恒溫培養(yǎng)12h ；
[0056]所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:麥麩75g，玉米粉55g，米糠25g，豆餅粉20g，β -葡聚糖2g，中草藥劑粉40g，海藻糖35g，酵母粉6g，玉米漿3g，硫酸銨2g，磷酸氫二鉀2g，磷酸二氫鉀2g，檸檬酸鈉3g，消泡劑0.5g,純凈水1000mL, pH值5.5，121°C滅菌20min ；
[0057]所述發(fā)酵培養(yǎng)基的調(diào)配方法為:按比例準確稱取原料，將原料中的純凈水、玉米粉、豆餅粉投入配料罐中，調(diào)節(jié)PH值5.5，加入中溫淀粉酶(3u/g玉米粉)與高溫淀粉酶(30u/g玉米粉)，同時邊攪拌邊升溫至70°C保溫20min，然后緩慢升溫至90°C保溫20min進行液化，最后加入其它原料，攪拌均勻，PH5.5，121°C滅菌35min備用。
[0058]所述中草藥粉劑的制備方法同實施例1.[0059](3)發(fā)酵液經(jīng)過濾、濃縮、精濾、干燥得β -葡聚糖酶。[0060]經(jīng)上述制備方法得到的P -葡聚糖酶液體酶活力為10000u/ml。
[0061]實施例3 —種飼用復(fù)合酶制劑的制備方法
[0062]一種小麥日糧酶，由以下重量份數(shù)的酶制劑組成:
[0063]木聚糖酶120份，纖維素酶10份，^ -葡聚糖酶18份，中溫a -淀粉酶8份，中草藥粉劑1份。
[0064]取產(chǎn)自湖南鴻鷹翔生物工程股份有限公司的木聚糖酶120份，纖維素酶10份，中溫a -淀粉酶8份，以及實施例1所得的中草藥粉劑1份，實施例2所得的P -葡聚糖酶18份于25°C條件下在混合機中攪拌均勻，攪拌時間為5分鐘。攪拌均勻裝箱后于常溫或冷室中保存。
[0065]實施例4 一種飼用復(fù)合酶制劑的制備方法
[0066]一種小麥日糧酶，由以下重量份數(shù)的酶制劑組成:
[0067]木聚糖酶100份，纖維素酶8份，P -葡聚糖酶20份，中溫a -淀粉酶10份，中草藥粉劑0.5份。
[0068]按上述重量份數(shù)取產(chǎn)自湖南鴻鷹翔生物工程股份有限公司的木聚糖酶，纖維素酶，中溫a-淀粉酶，以及實施例1所得的中草藥粉劑，實施例2所得的(6-葡聚糖酶于25°C條件下在混合機中攪拌均勻，攪拌時間為5分鐘。攪拌均勻裝箱后于常溫或冷室中保存。
[0069]實施例5 —種飼用復(fù)合酶制劑的制備方法
[0070]—種小麥日糧酶，由`以下重量份數(shù)的酶制劑組成:
[0071]木聚糖酶140份，纖維素酶12份，^ -葡聚糖酶15份，中溫a -淀粉酶6份，中草藥粉劑2份。
[0072]按上述重量份數(shù)取產(chǎn)自湖南鴻鷹翔生物工程股份有限公司的木聚糖酶，纖維素酶，中溫a-淀粉酶，以及實施例1所得的中草藥粉劑，實施例2所得的(6-葡聚糖酶于25°C條件下在混合機中攪拌均勻，攪拌時間為5分鐘。攪拌均勻裝箱后于常溫或冷室中保存。
[0073]實施例6效果對比實驗
[0074]選取120頭育肥前期豬，按體重、血統(tǒng)及性別無差異分為實驗組和對照組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)20頭豬。實驗期為28天，實驗組每噸飼料添加本實施例3所述復(fù)合酶制劑120g,對照組不添加復(fù)合酶制劑，于試驗期的始末日早晨空腹稱重，計算日增重和料肉比，并給毛色進行打分。實驗結(jié)果如下表所示:
[0075]
【權(quán)利要求】
1.一種含有3-葡聚糖酶的小麥日糧酶，由以下重量份數(shù)的組分組成:木聚糖酶100-140份，纖維素酶8-12份，P -葡聚糖酶15-20份，中溫a -淀粉酶6-10份，中草藥粉劑0.5-2份； 所述P -葡聚糖酶由地衣芽孢桿菌(B acillus licheniformis) ^ -10-25經(jīng)生物發(fā)酵制的，所述菌株保藏編號為CCTCC N0:M2013538o
2.如權(quán)利要求1所述一種含有(6-葡聚糖酶的小麥日糧酶，其特征在于，所述中草藥粉劑的制備方法如下: 稱取黃芪20-30份；黨參10-18份；柴胡10-15份；麥冬10-15份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然后于容器中均勻混合并添加3-6倍重量的水，控制溫度70°C~90°C保持2~4h，然后降溫至45-60°C，加入混合酶制劑進行酶解，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為5.5-6.8，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物，IlOff功率下超聲萃取0.5~1.5h，過濾；濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中草藥粉劑。
3.如權(quán)利要求2所述的一種含有(6-葡聚糖酶的小麥日糧酶，其特征在于，混合酶制劑組成如下:3 -葡萄糖苷酶10-15份，木聚糖酶15-20份，戊聚糖酶15-20份，普魯蘭酶20-30份，(6-淀粉酶10-15份，果膠酶10-15份，酸性蛋白酶10-15份，木瓜蛋白酶5-10份，葡萄糖氧化酶5-10份，酸性磷酸酶5-10份。
4.如權(quán)利要求1所述一種含有(6-葡聚糖酶的小麥日糧酶，其特征在于，(6-葡聚糖酶的制備方法，包括如下 步驟: 地衣芽孢桿菌3-10-25經(jīng)斜面菌種活化培養(yǎng)后進行一、二、三級液體種子和種子罐培養(yǎng)；將一級種子罐發(fā)酵液以3%接種量接入含有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度35-45°C，攪拌速度200-300r/min，通風量(V/V) 1:1-3,培養(yǎng)時間10_15h ;然后將IL經(jīng)過121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至35_45°C時恒溫培養(yǎng)15-20h ;此時，將一級種子罐發(fā)酵液以2%接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)10-15h ;繼續(xù)將IL經(jīng)過121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至35_45°C時恒溫培養(yǎng)10-15h ; 發(fā)酵液經(jīng)過濾、濃縮、精濾、干燥得3 -葡聚糖酶。
5.如權(quán)利要求4所述的一種含有(6-葡聚糖酶的小麥日糧酶，其特征在于，所述種子培養(yǎng)的組成為:酵母粉0.5 %，蛋白胨I %，可溶性淀粉I %，NaCl I %，pH4.5-7.0 ； 所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:麥麩75g，玉米粉55g，米糠25g，豆餅粉20g，3 -葡聚糖2g，中草藥劑粉40g，海藻糖35g，酵母粉6g，玉米漿3g，硫酸銨2g，磷酸氫二鉀2g，磷酸二氫鉀2g，檸檬酸鈉3g，消泡劑0.5g,純凈水1000mL, pH值4.5-7.0，121°C滅菌20min ； 所述發(fā)酵培養(yǎng)基的調(diào)配方法為:按比例準確稱取原料，將原料中的純凈水、玉米粉、豆餅粉投入配料罐中，調(diào)節(jié)PH值3-7,加入中溫淀粉酶(3u/g玉米粉)與高溫淀粉酶(30u/g玉米粉)，同時邊攪拌邊升溫至70°C保溫15-30min，然后緩慢升溫至90°C保溫15_30min進行液化，最后加入其它原料，攪拌均勻，PH3-7，。
6.一種制備如權(quán)利要求1所述的含有(6-葡聚糖酶的小麥日糧酶的方法，包括如下步驟: 按照原料組成將木聚糖酶，纖維素酶，^ -葡聚糖酶，中溫a -淀粉酶，中草藥粉劑混合均勻即可；所述木聚糖酶，纖維素酶，中溫α-淀粉酶為湖南鴻鷹祥生物工程股份有限公司產(chǎn)品； 所述中草藥粉劑的制備方法如下: 稱取黃芪20-30份；黨參10-18份；柴胡10-15份；麥冬10-15份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然后于容器中均勻混合并添加3-6倍重量的水，控制溫度70°C~.90°C保持2~4h，然后降溫至45-60°C，加入混合酶制劑進行酶解，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為.5.5-6.8，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物，IlOff功率下超聲萃取0.5~1.5h，過濾；濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中草藥粉劑； 所述混合酶添加量為混合物料總重量的5-10% ； 所述混合酶的重量份數(shù)組成為:β -葡萄糖苷酶10-15份，木聚糖酶15-20份，戊聚糖酶15-20份，普魯蘭酶20-30份，β-淀粉酶10-15份，果膠酶10-15份，酸性蛋白酶10-15份，木瓜蛋白酶5-10份，葡萄糖氧化酶5-10份，酸性磷酸酶5-10份； 所述乙醇和丙醇的質(zhì)量比例為1:1-1.5 ； 所述β-葡聚糖酶制備方法如下: (1)種子培養(yǎng) 將地衣芽孢桿菌β -10-25斜面菌種經(jīng)三級搖瓶發(fā)酵劑一級種子罐發(fā)酵； 所述種子培養(yǎng)的培養(yǎng) 基為:酵母粉0.5%，蛋白胨1%，可溶性淀粉1%，NaCll %,ρΗ4.5-7.0,121-123°C滅菌 30_40min ； (2)發(fā)酵罐發(fā)酵 將一級種子罐發(fā)酵液以3%接種量接入含有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度.35-45°C，攪拌速度200-300r/min，通風量(V/V) 1:1-3,培養(yǎng)時間10_15h ;然后將IL經(jīng)過.121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至35_45°C時恒溫培養(yǎng).15-20h ;此時，將一級種子罐發(fā)酵液以2%接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)10-15h ;繼續(xù)將.IL經(jīng)過121°C滅菌20min，溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補入發(fā)酵罐，待溫度升至35_45°C時恒溫培養(yǎng)10-15h ; 所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:麥麩75g，玉米粉55g，米糠25g，豆餅粉20g，β -葡聚糖2g，中草藥劑粉40g，海藻糖35g，酵母粉6g，玉米漿3g，硫酸銨2g，磷酸氫二鉀2g，磷酸二氫鉀.2g，檸檬酸鈉3g，消泡劑0.5g,純凈水1000mL, pH值4.5-7.0,121°C滅菌20min ； 所述發(fā)酵培養(yǎng)基的調(diào)配方法為:按比例準確稱取原料，將原料中的純凈水、玉米粉、豆餅粉投入配料罐中，調(diào)節(jié)PH值3-7,加入中溫淀粉酶(3u/g玉米粉)與高溫淀粉酶(30u/g玉米粉)，同時邊攪拌邊升溫至70°C保溫15-30min，然后緩慢升溫至90°C保溫15_30min進行液化，最后加入其它原料，攪拌均勻，調(diào)初始PH3-7，121-123°C滅菌30_40min備用； 溶解氧控制:通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速及通風量，控制溶解氧15-30% ； PH控制:通過補氨水或稀磷酸，控制發(fā)酵過程中pH值保持在3-7 ； 補料控制:當發(fā)酵液中的還原糖含量降至3mg/ml-8mg/ml時,開始添加補料培養(yǎng)基,補料量以維持發(fā)酵液還原糖含量為2mg/ml-5mg/ml ； 放罐標準:60-80%菌體衰老自溶，酶活力增長緩慢； (3)發(fā)酵液經(jīng)過濾、濃縮、精濾、干燥得β-葡聚糖酶。
7.如權(quán)利要求1所述的一種含有葡聚糖酶的小麥日糧酶，其特征在于:由以下重量份數(shù)的組分組成:木聚糖酶120份，纖維素酶10份，β -葡聚糖酶18份，中溫α -淀粉酶8份，中草藥粉劑1份。
8.如權(quán)利要求1 所述的一種含有P -葡聚糖酶的小麥日糧酶在動物飼養(yǎng)中的應(yīng)用。
【文檔編號】A23K1/14GK103805583SQ201310738348
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2013年12月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月27日
【發(fā)明者】李洪兵, 李海清, 胡永明, 向左東, 楊中秋 申請人:湖南鴻鷹生物科技有限公司