一種復(fù)合植物提取物飼料添加劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及飼料【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種復(fù)合植物提取物飼料添加劑及其制備方法。本發(fā)明的目的是提供一種具有強(qiáng)效抑菌效果的復(fù)合植物提取物飼料添加劑，解決了抗生素等其他合成藥物添加到飼料中存在毒副作用等諸多弊端，取得了良好的效果。本發(fā)明的技術(shù)方案為提供一種復(fù)合植物提取物飼料添加劑，包括柑橘精油、大蒜素、柑橘黃酮、松針粉、松花精油。本發(fā)明有益效果：本發(fā)明復(fù)合植物提取物飼料添加劑借鑒傳統(tǒng)中草藥理論研究和實(shí)踐的基礎(chǔ)上選出4種中草藥5種提取物，并測定其體外抑菌活性，從中篩選出對嗜水氣單胞菌有抑制作用的植物提物，制備成復(fù)方制劑，具有良好的體外抑菌活性，具有高效、安全無毒，長期使用無殘留的特點(diǎn)。
【專利說明】一種復(fù)合植物提取物飼料添加劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及飼料【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種復(fù)合植物提取物飼料添加劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]植物提取物飼料由一系列的植物生物活性成分及其衍生物構(gòu)成，長期以來就被當(dāng)作香料、防腐劑與藥材使用。植物提取物類飼料添加劑被認(rèn)為為“安全、高效、穩(wěn)定、可控”的飼料添加劑，逐漸成為綠色環(huán)保安全動物食品生產(chǎn)和飼料工業(yè)充滿活力的新的經(jīng)濟(jì)增長點(diǎn)。
[0003]水生動物與陸生動物所處環(huán)境各異，水的粘度為空氣的800倍，具良好的保溫性能，但透氣性差。養(yǎng)殖水體中殘餌糞便堆積，各類微生物物集聚，其中許多的致病菌混生。水生動物免疫缺少時最易導(dǎo)致病害的發(fā)生，而水產(chǎn)動物攝食行為不可避免的與病原微生物發(fā)生直面接觸，誘發(fā)疾病的除了病毒、細(xì)菌、真菌及寄生蟲外，營養(yǎng)不良、水質(zhì)惡化等皆為致病誘因。
[0004]精油作為飼料添加劑可提高動物的免疫機(jī)能。部分植物復(fù)合提取物據(jù)抗氧化活性，例如麝香草精油及其主要成分一百里香酚和甲基異丙基苯-2，3-二醇，可有效清除自由基(如氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶和維生素E)。據(jù)推測，植物源添加劑和魚類免疫功能的正常發(fā)揮有較好的協(xié)同作用，可有效促進(jìn)消化酶的活性提高，脂質(zhì)代謝和脂肪的消化吸收。
[0005]植物提取物因其香味可影響?zhàn)B殖動物的采食習(xí)慣、促進(jìn)唾液和消化液分泌從而提高采食量而最初用于飼料中。長期使用，植物提取物中的化學(xué)活性物質(zhì)還可抗菌殺菌、抗氧化，保證動物腸道健康、提高自身免疫機(jī)能。與抗生素促生長劑不同，植物提取物被認(rèn)定為安全、高效、穩(wěn)定、可控的飼料添加劑。
[0006]植物提取物飼料添加劑的抗微生物活性已有較多研究和報道。該特性使其在化妝品和食品工業(yè)上已得到廣泛認(rèn)可和應(yīng)用。眾多研究報道發(fā)現(xiàn)，植物提取物(如肉桂屬、麝香草屬和止痢草/牛至植物提取物等)具有廣泛的體外抗微生物活，并發(fā)現(xiàn)其抗微生物活性是基于植物精油的作用。在抗菌方面，蕓香料灌木、肉桂/ 丁香、大蒜、止痢草/牛至和芥菜提取物抗菌能力最強(qiáng)，但除止痢草/牛至提取物添加劑開發(fā)成功外，其它提取物的開發(fā)還尚需時曰。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的是提供一種具有強(qiáng)效抑菌效果的復(fù)合植物提取物飼料添加劑，解決了抗生素等其他合成藥物添加到飼料中存在毒副作用等諸多弊端，取得了良好的效果。
[0008]本發(fā)明的技術(shù)方案為提供一種復(fù)合植物提取物飼料添加劑，由柑橘精油、大蒜素、柑橘黃酮、松針粉、松花精油混合而成。
[0009]優(yōu)選的，上述的復(fù)合植物提取物飼料添加劑由以下重量份比的原料組成:[0010]松針粉150-200 份；
[0011]柑橘精油10-15份；
[0012]大蒜素3-5份；
[0013]柑橘黃酮1-3份；
[0014]松花精油1-3份。
[0015]優(yōu)選的，上述的復(fù)合植物提取物飼料添加劑由以下重量份比的原料組成:
[0016]松針粉180份；
[0017]柑橘精油12份；
[0018]大蒜素3.6份；
[0019]柑橘黃酮2.2份；
[0020]松花精油2.2份。[0021]本發(fā)明的另一技術(shù)方案為提供一種復(fù)合植物提取物飼料添加劑的制備方法，包括以下步驟:將柑橘精油、大蒜素、柑橘黃酮、松針粉和松花精油進(jìn)行混合得到復(fù)合植物提取物飼料添加劑。
[0022]優(yōu)選的，上述的復(fù)合植物提取物飼料添加劑的制備方法中，所述柑橘精油的制備方法為:柑橘皮干燥后粉碎成柑橘粉，柑橘粉與水按照固液比1:5添加至蒸餾器，添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.0%的NaCL、蒸餾時間60min時，蒸餾處所得為提純柑橘精油。
[0023]優(yōu)選的，上述的復(fù)合植物提取物飼料添加劑的制備方法中，所述柑橘黃酮的制備方法為:柑橘皮粉末裝入萃取池中，使用甲醇萃取技術(shù)提取，所述甲醇萃取技術(shù)提取柑橘皮中黃酮類化合物的工藝條件為:壓力為10.3MPa，溫度為70°C，萃取池的甲醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%，料液比為1:15，提取時間lOmin，得提取液，經(jīng)過濾渣滓過濾得甲醇柑橘黃酮提取物，經(jīng)氫氧化鈉提取，可得柑橘黃酮。
[0024]優(yōu)選的，上述的復(fù)合植物提取物飼料添加劑的制備方法中，所述松針粉制備方法為:松針?biāo)幉挠梅兴崛纱?，過濾，把兩次的濾液合并，濃縮至浸膏狀，所得浸膏放置于4°C冰箱靜置48h后，除去下層沉淀物，取上清液，真空干燥24小時得松針粉。
[0025]優(yōu)選的，上述的復(fù)合植物提取物飼料添加劑的制備方法中，所述大蒜素提取方法為:將去皮蒜瓣搗碎制成蒜泥，大蒜破碎粒徑為0.2_，所述蒜泥在發(fā)酵溫度為45°C，酶解時間為30min，酶解ph值為6.0條件下利用大蒜細(xì)胞破碎后產(chǎn)生的蒜氨酸酶酶解后，用乙醇浸提，離心，取上清液，在溫度50°C、壓力0.0謹(jǐn)?&、轉(zhuǎn)速751./ min的條件下，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行減壓濃縮，得大蒜素。
[0026]本發(fā)明有益效果:本發(fā)明復(fù)合植物提取物飼料添加劑借鑒傳統(tǒng)中草藥理論研究和實(shí)踐的基礎(chǔ)上選出4種中草藥5種提取物，并測定其體外抑菌活性，從中篩選出對嗜水氣單胞菌有抑制作用的植物提物，制備成復(fù)方制劑，具有良好的體外抑菌活性，具有高效、安全無毒，長期使用無殘留的特點(diǎn)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0027]圖1本實(shí)驗采用揮發(fā)油提取蒸餾裝置來提取橘皮精油的收率圖；
[0028]圖2為柑橘皮粉碎度對精油收率的影響；
[0029]圖3為柑橘皮蒸餾時間對精油收率的影響；[0030]圖4為NaCl的添加量對精油收率的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0031]為詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容、構(gòu)造特征、所實(shí)現(xiàn)目的及效果，以下結(jié)合實(shí)施方式詳予說明。
[0032]實(shí)施例1
[0033]( I)柑橘精油一蒸餾法
[0034]干燥橘皮一粉碎一水蒸氣蒸餾一橘皮精油。
[0035]柑橘干燥后粉碎至40目橘皮粉，柑橘粉與水按照固液比1:5添加至蒸餾器，內(nèi)添加NaCL2.0%、蒸餾時間60min時，蒸餾處所得為提純橘皮精油。
[0036](2)柑橘黃酮的提取
[0037]黃酮類化合物大多具有酚羥基，因此可用堿性水或堿性稀醇浸出，浸出液經(jīng)酸化后析出黃酮類化合物。
[0038]提取設(shè)備:試劑與設(shè)備:蘆丁，無水甲醇，鹽酸，亞硝酸鈉，硝酸鋁，氫氧化鈉等。電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，分光光度計，高速粉碎機(jī)，電子天平，加速溶劑萃取儀:壓力10.3MPa，34mL萃取池。
[0039]提取工藝流程:橘皮粉末-裝入萃取池中-甲醇萃取技術(shù)提取-提取液干燥-成品，橘皮經(jīng)高速粉碎機(jī)粉碎粒度過30目篩。
[0040]甲醇萃取技術(shù)提取柑橘皮中黃酮類化合物的工藝條件為壓力10.3MPa，溫度是700C (使用電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱)，加速溶劑萃取儀:壓力10.3MPa，34mL萃取池，以甲醇濃度為80%，料液比為1:15，提取時間lOmin。提取液，經(jīng)過濾渣滓過濾得甲醇柑橘黃酮提取物。經(jīng)氫氧化鈉提取，可得柑橘黃酮提取物。
[0041](3)松針粉
[0042]復(fù)方松針?biāo)幉募s(IOOg)用沸水提取兩次，過濾，把兩次的濾液合并，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至浸膏狀，得浸膏約Hg，放置于4°C冰箱靜置48h后，除去下層沉淀物，取上清液，至真空干燥器中，真空干燥24小時。
[0043](4)大蒜素提取
[0044]晚干大蒜頭一(纟父碎)一油水混合物一(蒸懼)一粗提取物一(分懼)一成品。
[0045]水蒸氣蒸餾法主要得到的是大蒜素進(jìn)一步降解的烯丙基硫化物，有機(jī)溶劑提取法所得廣物以大蒜素為主。
[0046]將大蒜去皮，稱取一定量的去皮蒜瓣，用組織搗碎機(jī)制成蒜泥，大蒜破碎粒徑為0.2mm。亞鐵離子濃度為10m01/l，發(fā)酵溫度為45°C，酶解時間為30min，酶解ph值為6.0條件下利用大蒜細(xì)胞破碎后產(chǎn)生的蒜氨酸酶酶解后，用乙醇浸提，3500r / min離心lOrain，取上清液，在溫度50°C、壓力0.0lMPa、轉(zhuǎn)速75r / min的條件下，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行減壓濃縮，測定濃縮大蒜素溶液中大蒜素含量。酶解時間、萃取溫度、料液比對大蒜素提取率影響最顯著。優(yōu)化所得的大蒜素提取最佳工藝為:酶解時間30min、酶解溫度45°C、酶解pH6.0、料液比Ig:4ml、萃取時間60min、萃取溫度30°C，乙醇濃度95%。
[0047]柑橘精油、大蒜素、松針粉、松花黃酮、柑橘黃酮分別從柑橘皮、大蒜、松花、松針中提取。柑橘精油提取后呈現(xiàn)沸點(diǎn)高、熱敏性、易氧化的特性；柑橘黃酮不但具有獨(dú)特的芳香性、良好的水溶性。大蒜素性質(zhì):淡黃色油狀液體。大蒜素，沸點(diǎn)80-85°C (0.2kPa)，相對密度1.112 (20/4°C)，折光率1.561。溶于乙醇、氯仿或乙醚。水中溶解度2.5%(質(zhì)量)(10°C )，其水溶液pH值為6.5，靜置時有油狀物沉淀物形成。與乙醇，乙醚及苯可互溶。對熱堿不穩(wěn)定，對酸穩(wěn)定。由存在于百合科植物大蒜的鱗莖中，由存在的大蒜氨酸在大蒜酶作用下轉(zhuǎn)化產(chǎn)生。也存在于蔥的鱗莖中。具有強(qiáng)烈的大蒜臭，味辣。
[0048]將上述的柑橘精油、柑橘黃酮、松花黃酮及大蒜素按照比例及先后順序，投放至溫州發(fā)昊星機(jī)械設(shè)備制造有限公司生產(chǎn)的水粉混料泵THJ-f中，先后順序按照其沸點(diǎn)的高低進(jìn)行安排，由高到底，綜合考慮其熱敏活性。混合的順序分別為:大蒜素、柑橘黃酮、松花黃酮、柑橘精油?；旌媳壤秊椋苫ǚ?.8kg，柑橘精油0.12kg，柑橘黃酮0.022kg，松花黃酮0.022kg，大蒜素0.036kg。制作工藝參數(shù)參考福建正源飼料有限公司柑橘復(fù)合素制作工藝控制。
[0049]實(shí)施例2本發(fā)明復(fù)合植物提取物飼料添加劑體外抑菌效果
[0050]嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)屬于弧菌科、氣單胞菌屬，是嗜溫、有動力的氣單胞菌群，普遍存在于淡水、污水、淤泥、土壤和人類糞便中，具有廣泛的致病性，對水產(chǎn)動物1、兩棲動物和哺乳動物均有致病性。在水產(chǎn)上，是魚類最常見的致病菌，對淡水魚感染稱為細(xì)菌性敗血癥，發(fā)病率達(dá)到90%以上，死亡率高達(dá)65%以上。曾在上海、江蘇、浙江、安徽、廣東、廣西、福建等20多個省、市、自治區(qū)廣泛流行，受危害的魚種類有鰱、鳙、鯪、鯉、鱖、黃鱔、草魚、白鯧、加州鱸、蝦、鱉等多種淡水養(yǎng)殖魚類。植物提取物作為免疫增強(qiáng)劑和治療藥物在水產(chǎn)上的應(yīng)用逐漸增多。
[0051]本發(fā)明借鑒傳統(tǒng)中草藥理論研究和實(shí)踐的基礎(chǔ)上選出4種中草藥5種提取物，并測定其體外抑菌活性，從中篩選出對嗜水氣單胞菌有抑制作用的植物提物，制備成復(fù)方制劑。
[0052]1.1試驗材料
[0053]1.1.1 供試菌株:嗜水氣單胞菌 IB101，JGlOl，4LNS301，CCH201，LNBlOl，CGlOl:由中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心惠贈；BSK — 10、TPS 一 30由浙江省淡水水產(chǎn)研究所提供。
[0054]1.1.2培養(yǎng)基:普通肉湯培養(yǎng)基為牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g,氯化鈉5.0g,瓊脂20g，高壓蒸汽滅菌。
[0055]1.1.3供試植物樣品:柑橘皮、松針葉、松花粉、大蒜中提取物。柑橘黃酮、柑橘精油、松針葉提取松針粉、松花精油、大蒜素。(提取方法按照上文方式)
[0056]1.1.4儀器800型離心機(jī):北京醫(yī)學(xué)儀器廠；SW?CJ 一 2F超凈工作臺:蘇州凈化設(shè)備廠制造；電子天平:Sartorius Co, Germany公司制造；PW—30精密培養(yǎng)箱；UV — 2100分光光度儀:尤尼柯上海儀器有限公司制造；高效液相色譜儀:美國Agilent公司制造。
[0057]1.2實(shí)驗方法
[0058]1.2.1各植物提取物的制備:按實(shí)施例1方法制備。
[0059]1.2.2茵懸液的制備
[0060]將菌株融化，用接種針在固體培養(yǎng)基上劃線，37°C培養(yǎng)24h后，挑取單個菌落，接種到液體培養(yǎng)基上振蕩培養(yǎng)12?16h。采用麥?zhǔn)媳葷岱▽⒕河靡后w培養(yǎng)基稀釋到合適濃度。實(shí)驗中菌液濃度為10CFU / mL。[0061]1.2.3抗茵活性的測定
[0062]I)濾紙方法(瓊脂擴(kuò)散法):濾紙片出_)經(jīng)滅菌后，分別浸入提取物，無菌條件下貼在涂有菌液的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基上，并做空白對照，37C培養(yǎng)24h后測抑菌圈直徑(盡可能地使紙片的含藥量一致)，每種提取物8次重復(fù)。
[0063]2) 二倍稀釋法:通過抑菌圈的測定篩選出有抑菌效果的植物提取物進(jìn)行最小抑菌濃度(Minimumlnhibitory Concentration,MIC)的測定。采用二倍稀釋法。對植物提取物進(jìn)行梯度稀釋至0.006~12.5mg/mL的12個2倍系列濃度。然后在盛有1.9mL肉湯培養(yǎng)基的試管中分別加入100L稀釋后的藥液，最后一管不加提取物作空白對照，最后加入細(xì)菌懸液，使細(xì)菌濃度達(dá)到10CFU/mL。37°C培養(yǎng)24h，625nm測定吸光值，無菌生長的試管中的藥物濃度即為該藥物的最小抑菌濃度(MIC)。試驗重復(fù)3次。
[0064]1.2.4正交t值法優(yōu)化組合復(fù)方及劑量配比從抑菌活性試驗中篩選出抑菌效果佳的提取物，利用正交t值法，以最小抑菌濃度為檢測指標(biāo)，對篩選出的提取物進(jìn)行組方和劑量優(yōu)化。
[0065]I)正交t值法優(yōu)化組方原則:將篩選出來的提取物其中每種為一個因素，其代號隨機(jī)選定，分別為A、B、C、D、E，每種提取物均有給藥和不給藥兩個水平，設(shè)水平I為給藥，水平2為不給藥，結(jié)果見表1。各藥在每組方中的用量采用正交試驗中效果最優(yōu)的劑量組合。試驗選用正交t值表們進(jìn)行試驗安排，各組通過二倍稀釋法測定最小抑菌濃度(MIC)，每組3個重復(fù)，數(shù)據(jù)越小，抑菌效果越好。
[0066]表1復(fù)方5種成分因素水平分析表(單位:mg)
[0067]
【權(quán)利要求】
1.一種復(fù)合植物提取物飼料添加劑，其特征在于，由柑橘精油、大蒜素、柑橘黃酮、松針粉、松花精油混合而成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合植物提取物飼料添加劑，其特征在于，由以下重量份比的原料組成: 松針粉150-200份； 柑橘精油10-15份； 大蒜素3-5份； 柑橘黃酮1-3份； 松花精油1_3份。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的復(fù)合植物提取物飼料添加劑，其特征在于，由以下重量份比的原料組成: 松針粉180份； 柑橘精油12份； 大蒜素3.6份； 柑橘黃酮2.2份； 松花精油2.2份。
4.一種復(fù)合植物提取物飼料添加劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:將柑橘精油、大蒜素、柑橘黃酮、松針粉和松花精油進(jìn)行混合得到復(fù)合植物提取物飼料添加劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的復(fù)合植物提取物飼料添加劑的制備方法，其特征在于，所述柑橘精油的制備方法為:柑橘皮干燥后粉碎成柑橘粉，柑橘粉與水按照固液比1:5添加至蒸餾器，添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.0%的NaCL、蒸餾時間60min，蒸餾處所得為提純柑橘精油。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的復(fù)合植物提取物飼料添加劑的制備方法，其特征在于，所述柑橘黃酮的制備方法為:柑橘皮粉末裝入萃取池中，使用甲醇萃取技術(shù)提取，所述甲醇萃取技術(shù)提取柑橘皮中黃酮類化合物的工藝條件為:壓力為10.3MPa，溫度為70°C，萃取池的甲醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%，料液比為1:15，提取時間lOmin，得提取液，經(jīng)過濾渣滓過濾得甲醇柑橘黃酮提取物，經(jīng)氫氧化鈉提取，可得柑橘黃酮。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的復(fù)合植物提取物飼料添加劑的制備方法，其特征在于，所述松針粉制備方法為:松針?biāo)幉挠梅兴崛纱?，過濾，把兩次的濾液合并，濃縮至浸膏狀，所得浸膏放置于4°C冰箱靜置48h后，除去下層沉淀物，取上清液，真空干燥24小時得松針粉。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的復(fù)合植物提取物飼料添加劑的制備方法，其特征在于，所述大蒜素提取方法為:將去皮蒜瓣搗碎制成蒜泥，大蒜破碎粒徑為0.2mm,所述蒜泥在發(fā)酵溫度為45°C，酶解時間為30min，酶解ph值為6.0條件下利用大蒜細(xì)胞破碎后產(chǎn)生的蒜氨酸酶酶解后，用乙醇浸提，離心，取上清液，在溫度50°C、壓力0.01MPa、轉(zhuǎn)速75r / min的條件下，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行減壓濃縮，得大蒜素。
【文檔編號】A23K1/14GK103564197SQ201310571309
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2013年11月13日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月13日
【發(fā)明者】陸鵬 申請人:福建正源飼料有限公司