一種生產(chǎn)全雌泥鰍的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)一種生產(chǎn)全雌泥鰍的方法，包括如下步驟：1）人工催產(chǎn)和人工授精；2）性逆轉(zhuǎn)：魚(yú)苗用雄性激素溶液浸泡過(guò)的鹵蟲(chóng)幼體作餌料，魚(yú)苗中大部分XX♀雌魚(yú)性逆轉(zhuǎn)成為XX♂生理雄魚(yú)，XY♂雄魚(yú)不變，飼養(yǎng)至可區(qū)分雌雄時(shí)剔除XX♀雌魚(yú)；3）測(cè)交：將XX♂生理雄魚(yú)、XY♂雄魚(yú)飼養(yǎng)至性成熟，然后分別與XX♀雌魚(yú)交配，將子代為100%XX♀雌魚(yú)的父本，即XX♂生理雄魚(yú)保留；4）擴(kuò)群：XX♂生理雄魚(yú)與XX♀雌魚(yú)交配產(chǎn)生100%XX♀雌魚(yú)苗，取一部分雌魚(yú)苗按步驟2）性逆轉(zhuǎn)成為XX♂生理雄魚(yú)；5）種群的建立：XX♀雌魚(yú)和XX♂生理雄魚(yú)交配生產(chǎn)100％XX♀雌魚(yú)，重復(fù)步驟4）和5），可規(guī)?；掷m(xù)生產(chǎn)全雌泥鰍。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種生產(chǎn)全雌泥鰍的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及魚(yú)類(lèi)的人工性別控制技術(shù)，屬于一種魚(yú)類(lèi)生理遺傳繁殖的方法，是以人工性逆轉(zhuǎn)、測(cè)交篩選、擴(kuò)群等技術(shù)控制單性魚(yú)類(lèi)繁育的【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種生產(chǎn)全雌泥鰍的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]泥鰍是淡水養(yǎng)殖的重要魚(yú)類(lèi)。在相同的養(yǎng)殖條件下，雌性泥鰍比同胞雄魚(yú)的生長(zhǎng)快、增重量大。養(yǎng)殖全雌泥鰍將顯著提高養(yǎng)殖產(chǎn)量和經(jīng)濟(jì)效益。
[0003]生產(chǎn)單性雌魚(yú)有幾種方法可供選擇:如人工選擇、雌性激素直接誘導(dǎo)性逆轉(zhuǎn)、雌核發(fā)育和性別特異的DNA探針技術(shù)等。人工選擇方法因勞動(dòng)強(qiáng)度大，而且不能準(zhǔn)確區(qū)分雌雄魚(yú)，不適合單性雌魚(yú)的規(guī)?；a(chǎn)。雌性激素直接誘導(dǎo)性逆轉(zhuǎn)方法可以規(guī)模化使雄性魚(yú)性逆轉(zhuǎn)成為雌性魚(yú)，但這種方法不能達(dá)到全雌的目的，且有性激素殘留的危險(xiǎn)，不利于安全生產(chǎn)，早已被許多國(guó)家禁用。目前，利用雌核發(fā)育產(chǎn)生全雌魚(yú)的方法已經(jīng)應(yīng)用于養(yǎng)殖生產(chǎn)，但這種方法最大的困難是二倍體出現(xiàn)頻率低，仔幼魚(yú)階段成活率低，個(gè)體差異大，能達(dá)到性成熟的個(gè)體不多。再者，在雌核發(fā)育產(chǎn)生的子代中也可能出現(xiàn)雄性魚(yú)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)全雌泥鰍的方法。
[0005]本發(fā)明提供的生產(chǎn)全雌泥鰍的方法，包括如下步驟:
1)人工催產(chǎn)和人工授精:挑選體表無(wú)傷、性腺發(fā)育良好的泥鰍雌魚(yú)和雄魚(yú)，進(jìn)行人工催產(chǎn)、授精，把受精卵置于生化培養(yǎng)箱中`恒溫孵育成雄性和雌性魚(yú)苗；
2)性逆轉(zhuǎn):待卵黃吸收后，魚(yú)苗用雄性激素溶液浸泡過(guò)的鹵蟲(chóng)幼體作為開(kāi)口餌料，連續(xù)投喂40-60天，經(jīng)雄性激素處理后存活的魚(yú)苗中大部分XX早雌魚(yú)性逆轉(zhuǎn)成為XX ^生理雄魚(yú)，XY ?雄魚(yú)不變，然后將用雄性激素溶液浸泡過(guò)渡的鹵蟲(chóng)幼體喂養(yǎng)過(guò)的所有幼魚(yú)轉(zhuǎn)移至水泥池之后，飼料中不再拌合雄性激素，轉(zhuǎn)為正常飼養(yǎng)至可按胸鰭形狀區(qū)分雌雄時(shí)剔除XX早雌魚(yú)，保存XX ^生理雄魚(yú)、XY ^雄魚(yú)備用；
3)測(cè)交:將XXt生理雄魚(yú)、XY t雄魚(yú)飼養(yǎng)至性成熟，然后分別與XX早雌魚(yú)交配，將子代為100% XX早雌魚(yú)的父本，即XX ^生理雄魚(yú)保留；
4)擴(kuò)群:取步驟3)中已被確認(rèn)的XX^生理雄魚(yú)與XX早雌魚(yú)交配產(chǎn)生100% XX早雌魚(yú)苗，在魚(yú)苗開(kāi)口時(shí)，取一部分按步驟2)用雄性激素誘導(dǎo)性逆轉(zhuǎn)成為XX ^生理雄魚(yú)；
5)全雌泥鰍繁育種群的建立:取步驟4)得到的XX早雌魚(yú)和XX?生理雄魚(yú)交配，可持續(xù)生產(chǎn)100% XX早雌魚(yú)，重復(fù)步驟4)和步驟5)，建立全雌泥鰍繁育種群，即可規(guī)?；掷m(xù)生產(chǎn)全雌泥鰍。
[0006]作為優(yōu)選技術(shù)方案，步驟I)中人工催產(chǎn)、受精的步驟為:用地歐酮和魚(yú)用促黃體釋放激素類(lèi)似物2號(hào)一次注射，劑量為雌魚(yú):地歐酮5mg +魚(yú)用促黃體釋放激素類(lèi)似物2號(hào)5ug/kg，雄魚(yú)減半，當(dāng)親鰍發(fā)情劇烈時(shí)，將親鰍捕起，用手輕輕擠壓雌雄鰍腹部，擠出卵子和精子，取卵子與精子混合進(jìn)行干法人工受精。
[0007]作為優(yōu)選技術(shù)方案，步驟I)中受精卵置于27°C的生化培養(yǎng)箱中恒溫孵育成雄性和雌性魚(yú)苗。
[0008]優(yōu)選地，步驟2)所述雄性激素為甲基睪丸酮。
[0009]作為優(yōu)選技術(shù)方案，步驟2)中鹵蟲(chóng)幼體先在200~400 IU的甲基睪丸酮中浸泡I小時(shí)，再抽濾取出富集雄性激素的鹵蟲(chóng)幼體投喂已開(kāi)口 4天的人工繁殖泥鰍魚(yú)苗，每天上午、下午和晚上各投喂一次，投喂量以30分鐘內(nèi)吃完為準(zhǔn)，連續(xù)投喂40-60天。 [0010]本發(fā)明具有以下有益效果:
1.因省略了雌核發(fā)育步驟，可以降低人工誘導(dǎo)雌核發(fā)育對(duì)受精卵遺傳物質(zhì)的損傷，提高了 XX早雌魚(yú)的獲得率。
[0011]2.有明顯的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益:由于采用了 XX早雌魚(yú)和XX ^生理雄魚(yú)交配法，可以迅速獲得100% XX早雌魚(yú)，產(chǎn)品可規(guī)?；a(chǎn)，進(jìn)行全雌泥鰍養(yǎng)殖，可提高產(chǎn)量和商品質(zhì)量。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0012]圖1為本發(fā)明建立全雌泥鰍繁育種群的方法技術(shù)原理圖。
[0013]圖2為本發(fā)明的生產(chǎn)全雌泥鰍的方法步驟流程方框圖。
【具體實(shí)施方式】
[0014]下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，以使本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以更好的理解本發(fā)明并能予以實(shí)施，但所舉實(shí)施例不作為對(duì)本發(fā)明的限定。
[0015]附圖1示出了建立全雌泥鰍繁育種群的方法技術(shù)原理圖，附圖2示出了建立規(guī)?；a(chǎn)全雌泥鰍的方法步驟流程方框圖，結(jié)合附圖1和2，具體論述本發(fā)明的生產(chǎn)全雌泥鰍的方法具體如下:
步驟1、人工催產(chǎn)與人工授精:根據(jù)實(shí)驗(yàn)或工業(yè)化生產(chǎn)的需要，取若干數(shù)量成熟的泥鰍親本，按常規(guī)方法進(jìn)行人工催產(chǎn)。用地歐酮(DOM)和魚(yú)用促黃體釋放激素類(lèi)似物2號(hào)(LRH-A2) —次注射，劑量為雌魚(yú)(DOM 5mg+ LRH-A2 5ug)/kg，雄魚(yú)減半。當(dāng)親鰍發(fā)情劇烈時(shí)，將親鰍捕起，用手輕輕擠壓雌雄鰍腹部，擠出卵子和精子。根據(jù)需要取一定量的卵子與精子混合進(jìn)行干法人工受精，受精卵在27°C生化培養(yǎng)箱中恒溫孵育至魚(yú)苗全部出膜，得到的雄性和雌性魚(yú)苗，即為H)。待卵黃吸收后，魚(yú)苗用鹵蟲(chóng)幼體作為開(kāi)口餌料。
[0016]步驟2、性逆轉(zhuǎn):將普通XX早雌魚(yú)泥鰍性逆轉(zhuǎn)成XX ^生理雄魚(yú)，以鹵蟲(chóng)幼體作為雄激素載體，將其先在200~400 IU的甲基睪丸酮(MT ；sigma)溶液中浸泡I小時(shí)，再抽濾取出富集雄激素的鹵蟲(chóng)幼體投喂已開(kāi)口 4天的人工繁殖泥鰍魚(yú)苗，每天上午、下午和晚上各投喂一次，投喂量以30分鐘內(nèi)吃完為準(zhǔn)，連續(xù)投喂40-60天，實(shí)驗(yàn)證明魚(yú)苗存活率為60%以上，性逆轉(zhuǎn)率達(dá)95%以上，由于泥鰍是雄性配子異型的魚(yú)類(lèi)，其性別體制是XX早雌魚(yú)/ XY ?雄魚(yú)，雌雄魚(yú)的比例近似為1:1。所以，經(jīng)性激素處理后成活的魚(yú)苗中，約有50%是XX早雌魚(yú)性逆轉(zhuǎn)成XX ?生理雄魚(yú)，將經(jīng)激素性逆轉(zhuǎn)后的幼魚(yú)(包括XX ?生理雄魚(yú)、XY ?雄魚(yú)和XX早雌魚(yú))一并轉(zhuǎn)移至水泥池中，養(yǎng)至可按胸鰭形狀區(qū)分雌雄時(shí)(雌魚(yú)胸鰭短而圓，雄魚(yú)胸鰭長(zhǎng)而尖)，剔除XX早雌魚(yú)泥鰍，保存雄性泥鰍(XX ?生理雄魚(yú)和XY ?雄魚(yú))備用。[0017]步驟3、性逆轉(zhuǎn)魚(yú)的測(cè)交篩選:將XX ^生理雄魚(yú)、XY ^雄性泥鰍飼養(yǎng)至性成熟，然后分別與普通XX早雌魚(yú)交配，將子代為100% XX早雌魚(yú)的父本，即XX ^生理雄性泥鰍保留備用。
[0018]步驟4、擴(kuò)群:取步驟3中已被確認(rèn)的XX ^生理雄魚(yú)與普通的XX早雌魚(yú)交配，產(chǎn)生100%XX早雌魚(yú)(即Fl )，當(dāng)魚(yú)苗開(kāi)口 4天時(shí)，取一部分XX早雌魚(yú)魚(yú)苗按步驟2，用MT誘導(dǎo)性逆轉(zhuǎn)成為XX ^生理雄魚(yú)。
[0019]步驟5、全雌泥鰍繁育種群的建立:取步驟4中XX早雌魚(yú)和XX ^生理雄魚(yú)交配，可持續(xù)生產(chǎn)XX早雌魚(yú)(即F2)，重復(fù)步驟4和步驟5，建立全雌泥鰍繁育種群，可規(guī)?；a(chǎn)全雌泥鰍。
[0020]至此，即形成了全雌泥鰍的持續(xù)規(guī)模化生產(chǎn)過(guò)程以及它們的繁育體系。
[0021]以上所述實(shí)施例僅是為充分說(shuō)明本發(fā)明而所舉的較佳的實(shí)施例，本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此。本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在本發(fā)明基礎(chǔ)上所作的等同替代或變換，均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明的 保護(hù)范圍以權(quán)利要求書(shū)為準(zhǔn)。
【權(quán)利要求】
1.一種生產(chǎn)全雌泥鰍的方法，其特征在于，包括如下步驟: 1)人工催產(chǎn)和人工授精:挑選體表無(wú)傷、性腺發(fā)育良好的泥鰍雌魚(yú)和雄魚(yú)，進(jìn)行人工催產(chǎn)、授精，把受精卵置于生化培養(yǎng)箱中恒溫孵育成雄性和雌性魚(yú)苗； 2)性逆轉(zhuǎn):待卵黃吸收后，魚(yú)苗用雄性激素溶液浸泡過(guò)的鹵蟲(chóng)幼體作為開(kāi)口餌料，連續(xù)投喂40-60天，經(jīng)雄性激素處理后存活的魚(yú)苗中大部分XX早雌魚(yú)性逆轉(zhuǎn)成為XX ^生理雄魚(yú)，XY ?雄魚(yú)不變，然后將用雄性激素溶液浸泡過(guò)渡的鹵蟲(chóng)幼體喂養(yǎng)過(guò)的所有幼魚(yú)轉(zhuǎn)移至水泥池之后，飼料中不再拌合雄性激素，轉(zhuǎn)為正常飼養(yǎng)至可按胸鰭形狀區(qū)分雌雄時(shí)剔除XX早雌魚(yú)，保存XX ^生理雄魚(yú)、XY ^雄魚(yú)備用； 3)測(cè)交:將XXt生理雄魚(yú)、XY t雄魚(yú)飼養(yǎng)至性成熟，然后分別與XX早雌魚(yú)交配，將子代為100% XX早雌魚(yú)的父本，即XX ^生理雄魚(yú)保留； 4)擴(kuò)群:取步驟3)中已被確認(rèn)的XX^生理雄魚(yú)與XX早雌魚(yú)交配產(chǎn)生100% XX早雌魚(yú)苗，在魚(yú)苗開(kāi)口時(shí)，取一部分按步驟2)用雄性激素誘導(dǎo)性逆轉(zhuǎn)成為XX ^生理雄魚(yú)； 5)全雌泥鰍繁育種群的建立:取步驟4)得到的XX早雌魚(yú)和XX^生理雄魚(yú)交配，可持續(xù)生產(chǎn)100% XX早雌魚(yú)，重復(fù)步驟4)和步驟5)，建立全雌泥鰍繁育種群，即可規(guī)?；掷m(xù)生產(chǎn)全雌泥鰍。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)全雌泥鰍的方法，其特征在于，步驟I)中人工催產(chǎn)、受精的步驟為:用地歐酮和魚(yú)用促黃體釋放激素類(lèi)似物2號(hào)一次注射，劑量為雌魚(yú):地歐酮5mg+魚(yú)用促黃體釋放激素類(lèi)似物2號(hào)5ug/kg，雄魚(yú)減半，當(dāng)親鰍發(fā)情劇烈時(shí)，將親鰍捕起，用手輕輕擠壓雌雄鰍腹部，擠出 卵子和精子，取卵子與精子混合進(jìn)行干法人工受精。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)全雌泥鰍的方法，其特征在于，步驟I)中受精卵置于27°C的生化培養(yǎng)箱中恒溫孵育成雄性和雌性魚(yú)苗。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)全雌泥鰍的方法，其特征在于，步驟2)所述雄性激素為甲基睪丸酮。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)全雌泥鰍的方法，其特征在于，步驟2)中鹵蟲(chóng)幼體先在200~400 IU的甲基睪丸酮中浸泡I小時(shí)，再抽濾取出富集雄性激素的鹵蟲(chóng)幼體投喂已開(kāi)口 4天的人工繁殖泥鰍魚(yú)苗，每天上午、下午和晚上各投喂一次，投喂量以30分鐘內(nèi)吃完為準(zhǔn)，連續(xù)投喂40-60天。
【文檔編號(hào)】A01K61/00GK103548740SQ201310546649
【公開(kāi)日】2014年2月5日 申請(qǐng)日期:2013年11月7日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月7日
【發(fā)明者】劉漢勤, 徐江, 侯昌春, 陳麗慧 申請(qǐng)人:武漢百瑞生物技術(shù)有限公司