一種含有丁酸梭菌的鯽魚飼料的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物飼料領域，具體涉及一種含有丁酸梭菌的鯽魚飼料，將丁酸梭菌與鯽魚基礎飼料按質量比為0.0001:1～0.0005:1的比例添加。不僅可以促進鯽魚腸道蛋白消化吸收，提高鯽魚增重率，減少病患，還可以減少鯽魚糞便中氨氮含量和飼料資源的浪費，促進我國水產(chǎn)業(yè)的健康養(yǎng)殖和高效生產(chǎn)。
【專利說明】一種含有丁酸梭菌的鯽魚飼料【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及微生物在生物飼料中的應用，具體地說，涉及一種含有丁酸梭菌的鯽魚詞料。
【背景技術】
[0002]蛋白質是決定魚類生長的關鍵營養(yǎng)物質，也是飼料成本花費最大的部分。水產(chǎn)養(yǎng)殖動物大多數(shù)都要求較高的飼料蛋白質水平，一般蛋白質原料在水產(chǎn)動物飼料配方中的比重占到50%以上。魚類對飼料中蛋白質的消化吸收水平不僅會影響魚類的生長性能，而且還關系到魚類糞便中氮的含量以及對環(huán)境的污染程度。因此，研究開發(fā)能提高魚類對飼料中蛋白質的消化吸收能力，從而使飼料配方得到優(yōu)化的新型促蛋白吸收調節(jié)劑具有重要的科學意義和應用前景。
[0003]為了維持生存和正常生長，動物必須從食物中不斷地攝入蛋白質，飼料蛋白質對魚類的必要性不能被其他營養(yǎng)物質代替。魚類飼料中的蛋白質在魚體內(nèi)經(jīng)胃蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶等作用最終降解成短鏈的小肽和游離氨基酸，然后被小肽轉運載體和氨基酸轉運載體轉運到細胞內(nèi)吸收利用，特別是蛋白質的消化產(chǎn)物60%以上是以小肽的形式被動物腸道小肽轉運載體PepTl蛋白轉運，因此，鯽魚腸道PepTlmRNA表達水平反映其對蛋白消化吸收的能力。
[0004]血清中一些生理生化指標可以反映魚類機體蛋白質代謝的狀況。血清總蛋白、白蛋白和球蛋白的含量與機體蛋白質的吸收`和代謝狀況有關；谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶是廣泛存在于魚類線粒體中重要的氨基酸轉氨酶，當魚類肝臟細胞沒有被損傷時，谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶活性的提高可反映出機體蛋白質合成和分解代謝的增強。
[0005]魚類飼料干物質和蛋白質表觀消化率的提高直接反映魚類對飼料中營養(yǎng)物質和蛋白質消化吸收率的增強。蛋白代謝能影響蛋白消化吸收，蛋白消化吸收的狀況直接關系到魚類生長的好壞。而魚類生長的好`壞又影響魚類養(yǎng)殖效益的提高。鯽魚蛋白飼料的消化吸收，以及調節(jié)鯽魚蛋白飼料消化吸收的飼料添加劑篩選已成為淡水魚類營養(yǎng)與飼料研究的重點和熱點，迫切需要篩選能夠增強腸道消化吸收相關酶和有機酸的分泌，以及功能基因表達的飼料添加劑，從而利用該飼料添加劑優(yōu)化鯽魚飼料配方，以此獲得促蛋白質消化吸收的鯽魚飼料添加劑及其相應飼料。
[0006]丁酸梭菌屬于芽孢桿菌科，梭菌屬，革蘭氏陽性，孢子卵圓，偏心或次端生，室溫生長，耐酸和高溫。在魚類飼料中，丁酸梭菌與飼料原料配伍對動物蛋白消化吸收和增重產(chǎn)生作用效果，這種作用效果可以從魚類對蛋白消化吸收、蛋白代謝相關血清生化指標、以及小肽轉運載體PepTl基因的表達等指標表現(xiàn)出來，但是丁酸梭菌與飼料原料配伍具有劑量效應。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]為了解決現(xiàn)有技術中存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種含有丁酸梭菌的鯽魚飼料，以及丁酸梭菌作為促蛋白吸收調節(jié)劑在促進鯽魚腸道蛋白消化吸收、提高鯽魚增重率上的應用。
[0008]本發(fā)明首先提供了一種含有丁酸梭菌的鯽魚飼料，所述飼料為將丁酸梭菌與鯽魚基礎飼料按質量比為0.0001:1?0.0005:1的比例添加。
[0009]其中，所述鯽魚基礎飼料的原料組份按重量百分比為:豆柏20%、麩皮8%、次粉6%、一級面粉7%、玉米酒糟6%、中國菜柏18%、棉柏14%、全脂魚粉6%、肉骨粉4%、棕櫚柏3%、一級豆油3%、氯化膽堿0.5%、磷酸二氫鈣1%、三氧化二鉻0.5%、預混料2%、大蒜素0.05%、防霉劑
0.1%、乙氧基喹啉0.05%、膨潤土 0.8%。
[0010]進一步地，所述丁酸梭菌的活菌數(shù)為1.0X 108cfu/g。
[0011]進一步地，所述丁酸梭菌從土壤或動物糞便中分離培養(yǎng)，包括如下步驟:
[0012]I)制備土壤或糞便樣品稀釋液:以無菌操作，將樣品加入裝有無菌水的錐形瓶中，振蕩10-20分鐘，使樣品與水充分混合，再稀釋成濃度分別為10_4、10_5和10_6的樣品稀釋液，分別加到無菌培養(yǎng)皿內(nèi)；
[0013]2)平板的制作:將固體培養(yǎng)基融化，待冷卻至45_50°C左右，分別傾入到已盛有10_4、10_5、IO-6稀釋液的無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，迅速輕輕搖勻，靜置凝固；凝固后將平板倒置于30°c恒溫箱中，培養(yǎng)24-48小時，此菌即在所固定的位置長成肉眼能見的菌落；
[0014]3 )接種:平板培養(yǎng)48h后，用接種針挑取單個菌落插入深層固體培養(yǎng)基內(nèi)，再沿原路拔出，在28-32°C溫度下培養(yǎng)48h后轉入4-7°C冰箱中保藏。
[0015]更進一步地,所述步驟I)具體為以無菌操作，稱取樣品lg，加入裝有99ml無菌水的錐形瓶中，振蕩10-20分鐘，使樣品與水充分混合，即成10_2樣品稀釋液，然后用無菌移液管吸取9ml無菌水的試管內(nèi)，制成10_3的稀釋液，用同樣方法再制成10_4、10_5、10_6的稀釋液，稀釋完畢后，可用原來的移液管，從菌液濃度最小的10_6的稀釋液開始吸取lmllO—6稀釋液，加到相應編號10_6的無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，以相同方法分別吸取lmllO'lO—4的稀釋液加到相應編號為10_5、10_4的無菌培養(yǎng)皿內(nèi)。
[0016]本發(fā)明還提供了前述飼料在促進鯽魚腸道蛋白消化吸收中的應用。
[0017]本發(fā)明還提供了前述飼料在提高鯽魚增重率中的應用。
[0018]本發(fā)明還提供了丁酸梭菌在促進鯽魚腸道PepTl基因的表達上的應用。
[0019]本發(fā)明還提供了 丁酸梭菌在促進鯽魚腸道蛋白消化吸收中的應用。
[0020]本發(fā)明還提供了丁酸梭菌在提高鯽魚增重率中的應用。
[0021]本發(fā)明的有益效果在于:
[0022]本發(fā)明提出一種含有丁酸梭菌的鯽魚飼料，丁酸梭菌作為促蛋白吸收添加劑，不僅可以促進鯽魚的生長，減少病患，還可以減少鯽魚糞便中氨氮含量和飼料資源的浪費，促進我國水產(chǎn)業(yè)的健康養(yǎng)殖和高效生產(chǎn)。
[0023]丁酸梭菌在動物腸道中可以分泌蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶和有機丁酸等物質，能促進動物腸道細胞增殖，改善腸道消化吸收功能，同時能提高鯽魚蛋白代謝水平及其相關基因的表達。同時，丁酸梭菌由于無污染、無殘留和無耐藥性，也成為較具潛力的抗生素替代品之一。
[0024]本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)了丁酸梭菌作為鯽魚蛋白消化吸收促進劑的用途，并研究得到丁酸梭菌作為蛋白消化吸收促進劑在鯽魚飼料中的最適添加劑量，發(fā)現(xiàn)其能提聞觸魚蛋白代謝相關血清生化指標和小妝轉運載體PepTl基因的表達。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0025]圖1為丁酸梭菌對鯽魚腸道PepTl基因相對表達量的影響。
【具體實施方式】
[0026]以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
[0027]實施例1 丁酸梭菌作為促蛋白吸收調節(jié)劑制備鯽魚飼料
[0028]丁酸梭菌由大北農(nóng)集團提供，在鯽魚基礎飼料中分別添加0.0g/kg、0.lg/kg、
0.25g/kg、0.5g/kg、l.0g/kg五種劑量，以混合方式直接添加，配制5種等氮等能的飼料(粗蛋白32.06%，粗脂肪6.33%)，丁酸梭菌的活菌數(shù)為1.0X 108cfu/g。
[0029]鯽魚基礎飼料配方如下:各原料組份按重量百分比為:豆柏20%、麩皮8%、次粉6%、一級面粉7%、玉米酒糟(DDGS) 6%、中國菜柏18%、棉柏14%、國產(chǎn)全脂魚粉6%、肉骨粉4%、棕櫚柏3%、一級豆油3%、氯化膽堿0.5%、磷酸二氫鈣1%、三氧化二鉻0.5%、預混料2%、大蒜素
0.05%、防霉劑0.1%、乙氧基喹啉0.05%、膨潤土 0.8%。
[0030]實施例2 丁酸梭菌對鯽魚生長、蛋白質消化吸收的影響研究
[0031]試驗材料:實施例1所制備的添加有五種不同劑量丁酸梭菌的鯽魚飼料。
[0032]試驗地點:養(yǎng)殖實驗在長沙學院產(chǎn)學研基地進行，室內(nèi)循環(huán)流水控溫玻璃水族缸規(guī)格為 120cm x80cm x80cm。
[0033]試驗設計:選用初始體質量(2.0±0.04) g，大小規(guī)格一致和體質健壯的同批孵化芙蓉鯽作為實驗對象，進行8周的攝食生長試驗。共設5個處理，每個處理設3個重復，每個重復20尾魚。
[0034]試驗環(huán)境與條件:實驗開始后，每日于8:30，12:30，16:30投喂3次，養(yǎng)殖過程均采用魚體質量3% - 5%投喂量投喂，飼料在投喂20分鐘后基本被攝食完全。實驗期間水族箱24h不間斷充氣，水溫24-26°C，pH值6.5-7.5。每天記錄水溫、投喂量和攝食情況等。
[0035]試驗結果:生長性能指標見表1，血清生化指標結果見表2，飼料表觀消化率見表
3。在飼料中添加丁酸梭菌對鯽魚有明顯的促生長作用，并顯著提高了鯽魚增重率、特定生長率、血清總蛋白和蛋白質表觀消化率(P〈0.05)。當丁酸梭菌添加量為0.5g/kg時，鯽魚增重率、血清總蛋白、白蛋白和蛋白質表觀消化率最聞，比對照組分別提聞了 36.4%、18.82%、
18.13% 和 10.98%ο
[0036]表1本發(fā)明飼料對鯽魚生產(chǎn)性能的影響11=3;.TiSD
[0037]
【權利要求】
1.一種含有丁酸梭菌的鯽魚飼料，其特征在于，所述飼料為將丁酸梭菌與鯽魚基礎飼料按質量比為0.0001:1?0.0005:1的比例添加。
2.如權利要求1所述的飼料，其特征在于，所述丁酸梭菌的活菌數(shù)為1.0X108cfU/g。
3.如權利要求1所述的飼料，其特征在于，所述丁酸梭菌從土壤或動物糞便中分離培養(yǎng)，包括如下步驟: 1)制備土壤或糞便樣品稀釋液:以無菌操作，將樣品加入裝有無菌水的錐形瓶中，振蕩10-20分鐘，使樣品與水充分混合，再稀釋成濃度分別為10_4、10_5和10_6的樣品稀釋液，分別加到無菌培養(yǎng)皿內(nèi)； 2)平板的制作:將固體培養(yǎng)基融化，待冷卻至45-50°C左右，分別傾入到已盛有10_4、10_5、10_6稀釋液的無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，迅速輕輕搖勻，靜置凝固；凝固后將平板倒置于30°C恒溫箱中，培養(yǎng)24-48小時，此菌即在所固定的位置長成肉眼能見的菌落； 3 )接種:平板培養(yǎng)48h后，用接種針挑取單個菌落插入深層固體培養(yǎng)基內(nèi)，再沿原路拔出，在28-32°C溫度下培養(yǎng)48h后轉入4-7°C冰箱中保藏。
4.如權利要求1所述的飼料，其特征在于，所述步驟I)具體為以無菌操作，稱取樣品lg，加入裝有99ml無菌水的錐形瓶中，振蕩10-20分鐘，使樣品與水充分混合，即成10_2樣品稀釋液，然后用無菌移液管吸取9ml無菌水的試管內(nèi)，制成10_3的稀釋液，用同樣方法再制成10_4、10_5、10_6的稀釋液，稀釋完畢后，可用原來的移液管，從菌液濃度最小的10_6的稀釋液開始吸取lmll0_6稀釋液，加到相應編號10_6的無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，以相同方法分別吸取lmll0_5、10_4的稀釋液加到相應編號為10_5、10_4的無菌培養(yǎng)皿內(nèi)。
5.如權利要求1所述的飼料，其特征在于，所述鯽魚基礎飼料的原料組份按重量百分比為:豆柏20%、麩皮8%、次粉6%、一級面粉7%、玉米酒糟6%、中國菜柏18%、棉柏14%、全脂魚粉6%、肉骨粉4%、棕櫚柏3%、一級豆油3%、氯化膽堿0.5%、磷酸二氫鈣1%、三氧化二鉻0.5%、預混料2%、大蒜素0.05%、防霉劑0.1%、乙氧基喹啉0.05%、膨潤土 0.8%。
6.權利要求1-5任一項所述的飼料在促進鯽魚腸道蛋白消化吸收中的應用。
7.權利要求1-5任一項所述的飼料在提高鯽魚增重率中的應用。
8.丁酸梭菌在促進鯽魚腸道PepTl基因的表達上的應用。
9.丁酸梭菌在促進鯽魚腸道蛋白消化吸收中的應用。
10.丁酸梭菌在提高鯽魚增重率中的應用。
【文檔編號】A23K1/16GK103583900SQ201310546212
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年11月6日 優(yōu)先權日:2013年11月6日
【發(fā)明者】劉臻, 魯雙慶, 周毅, 孫浪, 伍琴 申請人:長沙學院