一種劍葉龍血樹的組織培養(yǎng)快速繁殖方法
【專利摘要】一種劍葉龍血樹的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括如下步驟：（1）取劍葉龍血樹種子作為外植體進(jìn)行消毒；（2）將消毒后的外植體置于MS基本培養(yǎng)基中誘導(dǎo)發(fā)芽得到無(wú)菌試管苗；（3）將所述無(wú)菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中進(jìn)行試管苗快速繁殖培養(yǎng)獲得叢生芽；（4）將所述叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)得到健壯植株；（5）將所述健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到完整的帶根苗；（6）取完整的帶根苗進(jìn)行煉苗后移植于沙床生長(zhǎng)一個(gè)月，再移栽至大田。采用本發(fā)明所述的培養(yǎng)方法得到的劍葉龍血樹叢生芽增殖系數(shù)達(dá)到10-15倍，獲得的組培苗生根率在95%以上，移栽苗床成活率在90%以上，有效解決了劍葉龍血樹的規(guī)?；鐔?wèn)題。
【專利說(shuō)明】一種劍葉龍血樹的組織培養(yǎng)快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種植物繁殖方法，特別是一種劍葉龍血樹的組織培養(yǎng)快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]劍葉龍血樹又名千年木、血竭樹、交趾龍血樹，是漸危種，屬國(guó)家二級(jí)保護(hù)植物，2003年被國(guó)際自然與自然資源保護(hù)聯(lián)合會(huì)劃歸為易受危害的物種列為紅色名單，被定為佛得角紅皮書中的瀕危物種，是目前國(guó)內(nèi)公認(rèn)的國(guó)產(chǎn)龍血竭的基源植物。
[0003]血竭是一種名貴傳統(tǒng)中藥，在我國(guó)的使用歷史已有1500年以上。據(jù)《本草綱目》記載，龍血竭性溫、平，味甘、咸，無(wú)毒，入血分，歸肺、脾、腎三經(jīng)，具有活血化瘀、消腫止痛、收斂止血，軟堅(jiān)散結(jié)、生肌斂瘡等顯著功效，被譽(yù)為活血圣藥?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證實(shí)，血竭具有改善機(jī)體微循環(huán)、調(diào)整機(jī)體新陳代謝、改善機(jī)體免疫功能等作用。
[0004]雖然血竭在國(guó)內(nèi)的使用歷史悠久,但在1972年以前一直是依靠東南亞和非洲進(jìn)口，價(jià)格十分昂貴。1973年蔡希陶先生在云南思茅地區(qū)孟連縣境內(nèi)的石灰山上發(fā)現(xiàn)了大片可以產(chǎn)生血竭的龍血樹，才暫時(shí)緩解了我國(guó)血竭的資源壓力，從而誕生了國(guó)產(chǎn)龍血竭的歷史。但是龍血樹的生長(zhǎng)非常緩慢，一年之內(nèi)樹干增粗還不到I厘米，龍血竭又為龍血樹受傷后流出的紅色液體，產(chǎn)量非常有限。而且隨著醫(yī)藥觀念的轉(zhuǎn)變，越來(lái)越多的人群傾向于使用傳統(tǒng)中醫(yī)藥來(lái)防病治病，中藥資源的用量急劇上升，越來(lái)越多的藥用植物趨于稀缺，甚至瀕危。近年來(lái)，市場(chǎng)對(duì)龍血竭需求的不斷擴(kuò)大，目前龍血竭價(jià)格已漲到1000-1300元/kg，致使人們對(duì)劍葉龍血樹野生資源實(shí)施了不合理的掠奪性采伐，劍葉龍血樹野生資源日趨枯竭，瀕危滅絕，已經(jīng)被國(guó)際上很多國(guó)家列為珍稀瀕危保護(hù)植物。
[0005]為了加強(qiáng)龍血竭基源植物保護(hù)，防止劍葉龍血樹的瀕危滅絕，實(shí)現(xiàn)資源的可持續(xù)利用，需要大力推廣劍葉龍血樹的栽培種植。在種苗繁育上，劍葉龍血樹可通過(guò)種子、扦插或分蘗繁殖，但這種常規(guī)方法的繁殖速率低，所需時(shí)間長(zhǎng)，所得的種苗數(shù)量非常有限，生產(chǎn)上難以實(shí)現(xiàn)大面積栽培。而采用生物技術(shù)組織培養(yǎng)技術(shù)，可以有效快速地提高劍葉龍血樹種苗的繁殖速度和質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)劍葉龍血樹優(yōu)質(zhì)種苗的工廠化育苗，以滿足生產(chǎn)上的需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種劍葉龍血樹的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，它能夠快速繁殖出大量適合移栽的優(yōu)良劍葉龍血樹種苗、滿足生產(chǎn)需要。
[0007]本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案達(dá)到上述目的:一種劍葉龍血樹的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟:
[0008](I)外植體的選擇與消毒:取劍葉龍血樹種子作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來(lái)水沖洗15-30min、添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、無(wú)菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無(wú)菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水；[0009](2)種子萌發(fā)獲得無(wú)菌試管苗:將步驟(1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001uX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天，種子發(fā)芽后獲得無(wú)菌試管苗，其中MS培養(yǎng)基中含1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0010](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(2)中得到的無(wú)菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為8_10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基中含1.0-5.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、
0.l-ο.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-2.0mg/L的激動(dòng)素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的PH值為5.8 ；
[0011](4)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(3)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中含1.0-3.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.5-1.5mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0012](5)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(4)中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)35天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基中含0.1-1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0013](6)煉苗與移栽:步驟(5)獲得帶根的完整植株后，在室溫為25°C的室內(nèi)打開瓶蓋，在瓶中加入少量自來(lái)水，煉苗2-4天，表面角質(zhì)形成后將苗取出，洗凈根部培養(yǎng)基，立即移栽到沙床中，在沙床中生長(zhǎng)Iv月后移栽大田。
[0014]本發(fā)明的突出優(yōu)點(diǎn)在于:`[0015](I)采用生物技術(shù)對(duì)劍葉龍血樹進(jìn)行組織培養(yǎng)快速繁殖，通過(guò)劍葉龍血樹叢生芽的繁殖，在短時(shí)間內(nèi)可培育出大量適合栽培種植的劍葉龍血樹幼苗，顯著提高了劍葉龍血樹種苗的增殖系數(shù)和種苗質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)，滿足生產(chǎn)上的需要。
[0016](2)在MS繁殖培養(yǎng)基中添加的6-芐基腺嘌呤6-BA、吲哚乙酸IAA和激動(dòng)素KT屬于化學(xué)合成物質(zhì)，價(jià)格較為便宜，可大大降低劍葉龍血樹組織培養(yǎng)的成本消耗，達(dá)到降低成本的目的；
[0017]在MS繁殖培養(yǎng)基中添加1.0-5.0mg/L的6_芐基腺嘌呤6-BA和0.1-2.0mg/L的激動(dòng)素可促進(jìn)叢生芽的分化；添加濃度為0.1-0.5mg/L的生長(zhǎng)激素吲哚乙酸IAA可促進(jìn)叢生芽的生長(zhǎng)；
[0018]在MS壯苗培養(yǎng)基中添加濃度為1.0-3.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA和0.5-1.5mg/L的吲哚乙酸IAA可促進(jìn)叢生芽的再次增殖及長(zhǎng)高展葉；
[0019]在MS生根培養(yǎng)基上組合使用濃度為0.1-1.0mg/L的生長(zhǎng)激素IAA和0.1-0.5mg/L生根粉ABT，可獲得帶根的完整植株，這些植株經(jīng)煉苗后可直接移栽沙床。
[0020](3)采用本發(fā)明所述的培養(yǎng)方法得到的劍葉龍血樹叢生芽增殖系數(shù)達(dá)到10-15倍，叢生芽經(jīng)過(guò)復(fù)壯后，接種到含有生根粉IAA、ABT的生根培養(yǎng)基上，獲得的組培苗生根率在95%以上，移栽苗床成活率在90%以上；快速、便捷、高效地進(jìn)行劍葉龍血樹組織培養(yǎng)，實(shí)現(xiàn)劍葉龍血樹組培種苗的規(guī)?；a(chǎn)?！揪唧w實(shí)施方式】
[0021]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)一步說(shuō)明。
[0022]實(shí)施例1
[0023]本發(fā)明所述的劍葉龍血樹的組織培養(yǎng)快速繁殖方法的一個(gè)實(shí)例，包括以下步驟:
[0024](I)外植體的選擇與消毒:取劍葉龍血樹種子作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來(lái)水沖洗15-30min、添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、無(wú)菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無(wú)菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水；
[0025](2)種子萌發(fā)獲得無(wú)菌試管苗:將步驟(1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001uX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天，種子發(fā)芽后獲得無(wú)菌試管苗，其中MS培養(yǎng)基中含1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0026](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(2)中得到的無(wú)菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為8_10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基中含1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、2.0mg/L的激動(dòng)素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，叢生芽增殖系數(shù)為9.2 ；
[0027](4)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(3)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中含1.0-3.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.5-1.5mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/ L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，叢生芽再次增殖的系數(shù)為
2.8 ；
[0028](5)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(4)中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)35天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基中含0.1-1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，生根率為90.6% ；
[0029](6)煉苗與移栽:步驟(5)獲得帶根的完整植株后，在室溫為25°C的室內(nèi)打開瓶蓋，在瓶中加入少量自來(lái)水，煉苗2-4天，表面角質(zhì)形成后將苗取出，洗凈根部培養(yǎng)基，立即移栽到沙床中，在沙床中生長(zhǎng)Iv月后移栽大田。
[0030]實(shí)施例2
[0031]本發(fā)明所述的劍葉龍血樹的組織培養(yǎng)快速繁殖方法的另一個(gè)實(shí)例，包括以下步驟:
[0032](I)外植體的選擇與消毒:取劍葉龍血樹種子作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來(lái)水沖洗15-30min、添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、無(wú)菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無(wú)菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水；
[0033](2)種子萌發(fā)獲得無(wú)菌試管苗:將步驟(1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001uX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天，種子發(fā)芽后獲得無(wú)菌試管苗，其中MS培養(yǎng)基中含1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0034](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(2)中得到的無(wú)菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為8_10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基中含3.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、2.0mg/L的激動(dòng)素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，叢生芽增殖系數(shù)為17.9 ；
[0035](4)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(3)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中含2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，叢生芽再次增殖的系數(shù)為4.1 ；
[0036](5)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(4)中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)35天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基中含0.55mg/L的吲哚乙酸IAA、0.3mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，生根率為94.4% ；
[0037](6)煉苗與移栽:步驟(5)獲得帶根的完整植株后，在室溫為25°C的室內(nèi)打開瓶蓋，在瓶中加入少量自來(lái)水，煉苗2-4天，表面角質(zhì)形成后將苗取出，洗凈根部培養(yǎng)基，立即移栽到沙床中，在沙床中生長(zhǎng)Iv月后移栽大田。
[0038]實(shí)施例3
[0039]本發(fā)明所述的劍葉龍血樹的組織培養(yǎng)快速繁殖方法的再一個(gè)實(shí)例，包括以下步驟:
[0040](I)外植體的選擇與消毒:取劍葉龍血樹種子作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來(lái)水沖洗15-30min、添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、無(wú)菌水沖洗3_5次，最后``用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無(wú)菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水；
[0041](2)種子萌發(fā)獲得無(wú)菌試管苗:將步驟(1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001uX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天，種子發(fā)芽后獲得無(wú)菌試管苗，其中MS培養(yǎng)基中含1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0042](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(2)中得到的無(wú)菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為8_10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基中含3.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、1.05mg/L的激動(dòng)素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為
5.8，叢生芽增殖系數(shù)為15.2 ;
[0043](4)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(3)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中含3.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、1.5mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，叢生芽再次增殖的系數(shù)為5.0 ；
[0044](5)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(4)中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)35天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基中含1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、0.5mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，生根率為98.2% ；
[0045](6)煉苗與移栽:步驟(5)獲得帶根的完整植株后，在室溫為25°C的室內(nèi)打開瓶蓋，在瓶中加入少量自來(lái)水，煉苗2-4天，表面角質(zhì)形成后將苗取出，洗凈根部培養(yǎng)基，立即移栽到沙床中，在沙床中生長(zhǎng)Iv月后移栽大田。
[0046]實(shí)施例4
[0047]本發(fā)明所述的劍葉龍血樹的組織培養(yǎng)快速繁殖方法的又一個(gè)實(shí)例，包括以下步驟: [0048](I)外植體的選擇與消毒:取劍葉龍血樹種子作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來(lái)水沖洗15-30min、添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升0.1%升汞消毒
8-10min、無(wú)菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無(wú)菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水；
[0049](2)種子萌發(fā)獲得無(wú)菌試管苗:將步驟(1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001uX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天，種子發(fā)芽后獲得無(wú)菌試管苗，其中MS培養(yǎng)基中含1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0050](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(2)中得到的無(wú)菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為8_10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基中含，5.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、0.lmg/L的激動(dòng)素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，叢生芽增殖系數(shù)為14.3 ；
[0051](4)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(3)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中含1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、1.5mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，叢生芽再次增殖的系數(shù)為3.8 ；
[0052](5)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(4)中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)35天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基中含1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、0.lmg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，生根率為96.7% ；
[0053](6)煉苗與移栽:步驟(5)獲得帶根的完整植株后，在室溫為25°C的室內(nèi)打開瓶蓋，在瓶中加入少量自來(lái)水，煉苗2-4天，表面角質(zhì)形成后將苗取出，洗凈根部培養(yǎng)基，立即移栽到沙床中，在沙床中生長(zhǎng)Iv月后移栽大田。
【權(quán)利要求】
1.一種劍葉龍血樹的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于:該方法包括以下步驟: (O外植體的選擇與消毒:取劍葉龍血樹種子作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5min，線狀自來(lái)水沖洗15-30min，添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、無(wú)菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無(wú)菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水； (2)種子萌發(fā)獲得無(wú)菌試管苗:將步驟(1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001uX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天，種子發(fā)芽后獲得無(wú)菌試管苗，其中MS培養(yǎng)基中含1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ; (3)試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(2)中得到的無(wú)菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為8_10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基中含1.0-5.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-2.0mg/L的激動(dòng)素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的PH值為5.8 ； (4)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(3)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中含1.0-3.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.5-1.5mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ; (5)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(4)中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)35天得到帶根的完整植株，其中MS生根培 養(yǎng)基中含0.1-1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂 ，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ; (6)煉苗與移栽:步驟(5)獲得帶根的完整植株后，在室溫為25°C的室內(nèi)打開瓶蓋，在瓶中加入少量自來(lái)水，煉苗2-4天，表面角質(zhì)形成后將苗取出，洗凈根部培養(yǎng)基，立即移栽到沙床中，在沙床中生長(zhǎng)Iv月后移栽大田。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103548694SQ201310537742
【公開日】2014年2月5日 申請(qǐng)日期:2013年11月4日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月4日
【發(fā)明者】韋坤華, 李林軒, 韋瑩, 繆劍華, 李翠, 農(nóng)東新, 黃雪彥, 王曉峰 申請(qǐng)人:廣西壯族自治區(qū)藥用植物園