一種柘樹(shù)的組培快速繁殖方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種柘樹(shù)的組培快速繁殖方法。包括無(wú)菌葉片的獲得，愈傷組織的誘導(dǎo)，愈傷組織的分化，壯苗培養(yǎng)，煉苗移栽等步驟。采用本發(fā)明所建立的柘樹(shù)完整的組培體系，解決了柘樹(shù)生長(zhǎng)速度慢，繁殖率低等技術(shù)難題，達(dá)到了增殖系數(shù)高，成活率高的要求。可以為柘樹(shù)的工業(yè)化生產(chǎn)提供一種周期短、繁殖率高的人工培育方法。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種拓樹(shù)的組培快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種柘樹(shù)的組培快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]柘樹(shù)(Cudrania tricuspidata (Carr.)Bur.)為桑科柘屬植物,又名柘木、刺桑、柘桑、黃桑、奴柘、柞樹(shù)等。落葉灌木或小喬木，喜生在陽(yáng)光充足的荒山、坡地、丘陵及水溪旁，廣泛分布于我國(guó)華東、中南、西南至河北南部柘樹(shù)在我國(guó)分布廣泛，且具有重要的藥用價(jià)值，柘樹(shù)的根、樹(shù)皮或根皮、莖葉、果實(shí)等均可入藥，具有祛風(fēng)利濕、活血通經(jīng)、止咳化痰之功效，可治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)疼痛、黃疸、淋濁、閉經(jīng)、跌打損傷以及疔瘡癰腫等癥，近年來(lái)又用于治療食管癌、胃癌、腸癌等消化系統(tǒng)腫瘤。柘樹(shù)藥材中的主要化學(xué)成分為黃酮類(lèi)、酮類(lèi)化合物，但其資源有限。為柘樹(shù)資源的可持續(xù)性利用，建立柘樹(shù)完整的組培體系是目前亟待解決的問(wèn)題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種柘樹(shù)的組培快速繁殖方法，由該方法所制備得到的柘樹(shù)組培幼苗生長(zhǎng)周期短，增殖系數(shù)高，成活率高，可以規(guī)?；倪M(jìn)行大田生產(chǎn)。
[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是通過(guò)以下方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的:
野外采取的柘樹(shù)幼嫩的葉片，洗衣粉浸泡3分鐘，流水沖洗30min，在超凈工作臺(tái)上用0.2%的氯化汞消毒處理8min，無(wú)菌水沖洗4_5次，接入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為WPM+IAA0.2mg/l+6-BA3mg/l，繼代培養(yǎng) 2-3 代，接種入分化培養(yǎng)基 WPM+IAA0.2mg/l+KTlmg/l+2mg/l ΑΒΑ,誘導(dǎo)分化30天，分化后的柘樹(shù)幼苗接種入WPM+0.5mg/LNAA+椰乳+5mg/LAgNO3，椰乳可以促進(jìn)器官的生長(zhǎng)，AgN03用來(lái)防止試管苗的玻璃化及早衰落葉等現(xiàn)象，長(zhǎng)約5cm柘樹(shù)幼苗先在培養(yǎng)室中，去掉封口膜，敞口放置一周，一周后，清水洗去根部培養(yǎng)基，放入沙土，放置無(wú)菌光照培養(yǎng)箱中，光照40001x,光期14h,暗期IOh,—周后裝盆,室內(nèi)培養(yǎng)，早晚澆一次水，持續(xù)日光燈照射，兩周后移栽大田栽種。
[0005]采用本發(fā)明試管苗長(zhǎng)勢(shì)好，成活率95%，周期短，操作可控，可進(jìn)行工業(yè)擴(kuò)大化生產(chǎn)。
[0006]下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
【具體實(shí)施方式】
[0007]實(shí)施例1
野外采取的柘樹(shù)幼嫩的葉片，洗衣粉浸泡3分鐘，流水沖洗30min，在超凈工作臺(tái)上用0.2%的氯化汞消毒處理8min，無(wú)菌水沖洗4-5次，接入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為WPM+IAA0.2mg/l+6-BA3mg/l,繼代培養(yǎng)2-3代，接種入分化培養(yǎng)基WPM+IAA0.1mg/1+KT0.5mg/l+2mg/lABA,誘導(dǎo)分化30天，分化后的柘樹(shù)幼苗接種入WPM+0.2mg/LNAA+椰乳+5mg/LAgN03，椰乳可以促進(jìn)器官的生長(zhǎng)，AgNO3用來(lái)防止試管苗的玻璃化及早衰落葉等現(xiàn)象，長(zhǎng)約5cm柘樹(shù)幼苗先在培養(yǎng)室中，去掉封口膜，敞口放置一周，一周后，清水洗去根部培養(yǎng)基，放入沙土，放置無(wú)菌光照培養(yǎng)箱中，光照40001x,光期14h,暗期10h,—周后裝盆,室內(nèi)培養(yǎng)，早晚澆一次水，持續(xù)日光燈照射，兩周后移栽大田栽種，成活率87%。
[0008]實(shí)施例2
野外采取的柘樹(shù)幼嫩的葉片，洗衣粉浸泡3分鐘，流水沖洗30min，在超凈工作臺(tái)上用0.2%的氯化汞消毒處理8min，無(wú)菌水沖洗4-5次，接入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為WPM+IAA0.2mg/l+6-BA3mg/l,繼代培養(yǎng)2-3代，接種入分化培養(yǎng)基WPM+IAA0.3mg/1+KT1.5mg/l+2mg/l ΑΒΑ,誘導(dǎo)分化30天，分化后的柘樹(shù)幼苗接種入WPM+0.5mg/LNAA+椰乳+5mg/LAgN03，椰乳可以促進(jìn)器官的生長(zhǎng)，AgNO3用來(lái)防止試管苗的玻璃化及早衰落葉等現(xiàn)象，長(zhǎng)約5cm柘樹(shù)幼苗先在培養(yǎng)室中，去掉封口膜，敞口放置一周，一周后，清水洗去根部培養(yǎng)基，放入沙土，放置無(wú)菌光照培養(yǎng)箱中，光照40001x,光期14h,暗期IOh,—周后裝盆,室內(nèi)培養(yǎng)，早晚澆一次水，持續(xù)日光燈照射，兩周后移栽大田栽種，成活率90%。
[0009]實(shí)施例3
野外采取的柘樹(shù)幼嫩的葉片，洗衣粉浸泡3分鐘，流水沖洗30min，在超凈工作臺(tái)上用0.2%的氯化汞消毒處理8min，無(wú)菌水沖洗4-5次，接入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為WPM+IAA0.2mg/l+6-BA3mg/l,繼代培養(yǎng)2-3代，接種入分化培養(yǎng)基WPM+IAA0.2mg/1+KT1.5mg/l+2mg/l ΑΒΑ,誘導(dǎo)分化30天，分化后的柘樹(shù)幼苗接種入WPM+0.3mg/LNAA+椰乳+5mg/LAgN03，椰乳可以促進(jìn)器官的生長(zhǎng)，AgNO3用來(lái)防止試管苗的玻璃化及早衰落葉等現(xiàn)象，長(zhǎng)約5cm柘樹(shù)幼苗先在培養(yǎng)室中，去掉封口膜，敞口放置一周，一周后，清水洗去根部培養(yǎng)基，放入沙土，放置無(wú)菌光照培養(yǎng)箱中，光照40001x,光期14h,暗期IOh,—周后裝盆,室內(nèi)培養(yǎng)，早晚澆一次水，持續(xù)日光燈照射，兩周后移栽大田栽種，成活率91%。
[0010]實(shí)施例4
野外采取的柘樹(shù)幼嫩的葉片，洗衣粉浸泡3分鐘，流水沖洗30min，在超凈工作臺(tái)上用0.2%的氯化汞消毒處理8min，無(wú)菌水沖洗4-5次，接入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為WPM+IAA0.2mg/l+6-BA3mg/l,繼代培養(yǎng)2-3代，接種入分化培養(yǎng)基WPM+IAA0.2mg/1+KT1.5mg/l+2mg/l ΑΒΑ,誘導(dǎo)分化30天，分化后的柘樹(shù)幼苗接種入WPM+0.2mg/LNAA+椰乳+5mg/LAgN03，椰乳可以促進(jìn)器官的生長(zhǎng)，AgNO3用來(lái)防止試管苗的玻璃化及早衰落葉等現(xiàn)象，長(zhǎng)約5cm柘樹(shù)幼苗先在培養(yǎng)室中，去掉封口膜，敞口放置一周，一周后，清水洗去根部培養(yǎng)基，放入沙土，放置無(wú)菌光照培養(yǎng)箱中，光照40001x,光期14h,暗期IOh,—周后裝盆,室內(nèi)培養(yǎng)，早晚澆一次水，持續(xù)日光燈照射，兩周后移栽大田栽種，成活率93%。
【權(quán)利要求】
1.一種柘樹(shù)的組培快速繁殖方法，包括無(wú)菌葉片的獲得，愈傷組織的誘導(dǎo)，愈傷組織的分化，壯苗培養(yǎng)，煉苗移栽等，其主要步驟如下: (1)按照植物組織培養(yǎng)常規(guī)消毒方法對(duì)野外采取的柘樹(shù)葉片進(jìn)行消毒處理，獲得無(wú)菌葉； (2)將步驟(I)獲得的無(wú)菌柘樹(shù)葉片接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，誘導(dǎo)出來(lái)的愈傷組織接種入分化培養(yǎng)基中進(jìn)行胚的誘導(dǎo)，加入ABA，促進(jìn)胚狀體發(fā)育成熟； (3)將步驟(2)獲得的胚接入到MS培養(yǎng)基中，不加激素，加入15%的椰乳，促進(jìn)器官的生長(zhǎng)，培養(yǎng)30天； (4)將步驟(3)獲得的分化后生長(zhǎng)良好的柘樹(shù)幼苗，接種入WPM培養(yǎng)基中，附加0.5mg/LNAA，5mg/LAgN03，進(jìn)行壯苗培養(yǎng)； (5)將步驟(4)獲得的生長(zhǎng)健壯的柘樹(shù)幼苗，先在實(shí)驗(yàn)室里進(jìn)行煉苗培養(yǎng)，后裝盆，然后移栽入大田進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利 要求1所述的一種柘樹(shù)的組培快速繁殖方法，其特征在于:柘樹(shù)的消毒方法為:野外采取的柘樹(shù)幼嫩的葉片，洗衣粉浸泡3分鐘，流水沖洗30min，在超凈工作臺(tái)上用0.2%的氯化汞消毒處理8min，無(wú)菌水沖洗4_5次。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種柘樹(shù)的組培快速繁殖方法，其特征在于:采用的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為WPM+IAA0.2mg/l+6-BA3mg/l,采用的分化培養(yǎng)基為WPM+IAA0.1-0.3mg/1+KT0.5-1.5mg/l，并附加2mg/l的ABA，促進(jìn)胚狀體發(fā)育成熟。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種柘樹(shù)的組培快速繁殖方法，其特征在于:柘樹(shù)幼苗接種入WPM+0.5mg/LNAA+椰乳+5mg/LAgN03，椰乳可以促進(jìn)器官的生長(zhǎng)，AgNO3用來(lái)防止試管苗的玻璃化及早衰落葉等現(xiàn)象。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種柘樹(shù)的組培快速繁殖方法，其特征在于:柘樹(shù)的煉苗移栽分三個(gè)步驟，先在培養(yǎng)室中，去掉封口膜，敞口放置一周，清水洗去根部培養(yǎng)基，放入沙土，放置無(wú)菌光照培養(yǎng)箱中，光照40001x,光期14h,暗期IOh,—周后裝盆,室內(nèi)培養(yǎng),早晚澆一次水，持續(xù)日光燈照射，兩周后移栽大田栽種。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103444545SQ201310423686
【公開(kāi)日】2013年12月18日 申請(qǐng)日期:2013年9月17日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月17日
【發(fā)明者】楊存 申請(qǐng)人:南京通澤農(nóng)業(yè)科技有限公司